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一种快速筛选可与G-四链体相互作用的中草药的方法研究

陈蕊  
【摘要】:人类端粒DNA末端富含鸟嘌呤的重复序列,在含有单价金属离子的生理条件下,可以自发形成G-四链体结构。G-四链体结构的形成,可以直接破坏端粒酶对端粒的催化位点,抑制端粒酶的活性,进而抑制肿瘤细胞的增殖。以G-四链体DNA为靶点,能够稳定或促进形成G-四链体的分子配体,都能够作为端粒酶活性的抑制剂而用于肿瘤的治疗。中国是中草药的发源地,所含草药资源极其丰富,中草药的药效与安全性也得到了一定的验证。并且,高效液相色谱因其诸多优点广泛应用于中草药的分析中。基于上述背景,本课题将利用高效液相色谱法去探索一种快速筛选能够与G-四链体DNA相互作用的中草药的方法。 首先,G-四链体的形成及结构表征。本研究中采用的富G DNA序列为5’-GGGGATGCAGGGGTACCAGGGGCGTACGGGG-3’,经PAGE纯化,含有31个碱基。用PBS K+缓冲液溶解,12h后进行圆二色谱测定,结果表明,富G DNA序列在实验条件下形成了一定的G-四链体结构。 其次,G-四链体与阳性对照三乙烯四胺的相互作用。通过探索高效液相色谱的工作条件,进行相关的色谱操作。三乙烯四胺与G-四链体DNA混合后进行相互作用分析,G-四链体出峰时间以及峰值明显改变。该阳性对照为探究中草药与G-四链体的相互作用奠定了基础。 最后,探索出利用高效液相色谱法分析中草药与G-四链体DNA的色谱条件,然后从经正丁醇、乙醇萃取的56种中草药中,快速筛选出能够与G-四链体发生相互作用的5种中草药,分别为西洋参、人参、石见穿、野菊花、女贞。这5种中草药分别经紫外吸收光谱测试,进一步确认了它们能够与G-四链体发生相互作用。


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