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《北京理工大学》 2016年
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医用表面活性蛋白的分离与定量分析

孟聪  
【摘要】:肺表面活性蛋白(SP)是由Ⅱ型肺泡细胞分泌的,是表面活性物质特异性结合蛋白。SP有两大类型,一类为分子较小的疏水性蛋白SP-B、SP-C,一类为大分子的亲水性蛋白SP-A、SP-D。其中疏水性蛋白对肺表面活性物质的活性起重要作用。目前,已有相关产品用于临床治疗急性肺损伤、急性呼吸窘迫综合征等疾病,但是药品中所含的目标蛋白的量存在不确定性,需要制备标准品进行分析并建立相应的检测方法。本课题旨在建立一种稳定的分离表面活性蛋白SP-B、SP-C的方法。首先,借助有机溶剂冷冻处理和固相萃取等方法从来源于猪肺或牛肺冲洗液的原料中纯化出SP-B、SP-C蛋白;优化提取、分离的条件,包括提取溶剂、提取次数等。结果表明,用乙酸乙酯/三氯甲烷溶解后进行冷处理,离心,重复提取5次,能出去65.7%的杂质,同时伴有8.7%的总蛋白丢失;再进一步进行固相萃取处理,能除去83.3%杂质,并伴有26.5%的总蛋白丢失。其次,利用高效液相色谱(HPLC)、酶联免疫吸附(ELISA)对纯化前后的样品纯度进行分析。高效液相色谱分析结果显示,对于每种纯化方法,纯化后与纯化前的色谱图相比,洗脱峰的个数都减少了,说明杂质都有减少。酶联免疫吸附实验结果显示,先用有机溶剂冷处理后再进行固相萃取处理,纯化效果最好,纯化后,能除去83.3%的杂质,并且SP-B含量从原来的0.612μg/mg提升到3.075μg/mg,目标蛋白的收率为84.268%,SP-C的含量从原来的0.324μg/mg提升到1.706μg/mg,目标蛋白的收率为87.865%。
【学位授予单位】:北京理工大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2016
【分类号】:R392-33

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