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紫锥菊中菊苣酸提取纯化工艺研究

吴启林  
【摘要】:菊苣酸为咖啡酸衍生物,是紫锥菊中极为重要的免疫活性成分之一。菊苣酸能抑制透明质酸酶和HIV-1整合酶,并在体内体外具有细胞吞噬促进作用和抗病毒活性。本文对紫锥菊中菊苣酸的提取纯化工艺进行了研究。 建立了菊苣酸的高效液相色谱分析方法并对国内引种紫锥菊菊苣酸进行了检测。色谱条件:色谱柱Alltima C18;流动相乙腈-1.8%冰醋酸(25:75);流速1.0mL/min;检测波长:327nm,柱温35℃。紫锥菊药材的各个部位都含有菊苣酸。茎的菊苣酸含量普遍较低,根和花的原料较高,叶的含量最高。药材中菊苣酸含量很不稳定,含量易受紫锥菊中多酚氧化酶的降解。 确定了紫锥菊中菊苣酸提取的最佳条件。以40%乙醇溶液将紫锥菊粉末于90℃下以1:15(m/v)的料液比回流提取3次,每次为2h。初提物菊苣酸含量4.1%,菊苣酸提取得率0.8527%。 对菊苣酸纯化工艺进行了研究,确立了以AB-8树脂吸附分离、溶剂萃取、结晶纯化菊苣酸的工艺。此工艺适合分别生产20%、40%、60%及90%以上菊苣酸产品。 AB-8树脂吸附分离菊苣酸的工艺条件为:3~4mg/mL,pH3的菊苣酸原料液以4BV/h上柱吸附,先用5BV去离子水以2BV/h洗去杂质,再用6BV的30%乙醇以2BV/h上柱进行解吸。AB-8树脂柱饱和吸附量可达18.0mg/mL,解吸率达90.2%,产品为黄褐色,纯度达20.2%。AB-8树脂纯化后的粉末溶于水用等体积乙酸乙酯萃取3次,萃取率达93.9%,纯度达40%。产品再溶于水用等体积乙醚萃取4次可得到纯度50~60%的产品,萃取收率96.9%。3步工艺总的收率在80%以上。50%左右的浅黄色产品,用热水(固液比=3:10)在90℃下结晶,可得91.1%的白色结晶,收率71.3%,重结晶能使90%的白色结晶粉提高到95.9%,收率为82.0%。 pH3的原料液直接用乙酸乙酯萃取3次和乙醚萃取4次可以得到纯度40% WP=5 左右的产品,两步萃取收率都在90%以上。 本文还对紫锥菊中的多酚氧化酶进行了研究。40℃、pH7.0为多酚氧化酶的最适反应温度、pH。加热能抑制多酚氧化酶活性。Vc、NaHSO3、柠檬酸能抑制其对菊苣酸的降解。


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