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《北京化工大学》 2003年
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以卟啉为探针毛细管电泳分析蛋白质方法的研究

李昕  
【摘要】:本论文从利用毛细管电泳定量微量蛋白质的角度出发,主要研究了利用水溶性卟啉——meso-四(4-磺基苯)卟啉 (TPPS4)作为光谱探针,在毛细管电泳上定量微量蛋白质的方法,并探讨了两种卟啉作为蛋白质标记物应用于毛细管电泳免疫分析的可能性。 本文研究了meso-四(4-磺基苯)卟啉染色测定蛋白质的复合反应,讨论了蛋白质浓度与TPPS4溶液在435nm处光谱吸收值的线性关系。考察了反应温度及时间、缓冲溶液酸度、TPPS4浓度对定量关系的影响,并探讨了非蛋白物质的干扰和采用不同蛋白作标准工作曲线时各种蛋白质的响应。优化了光谱分析中用TPPS4作为探针定量微量蛋白的条件。 在光谱分析的基础上,研究了毛细管电泳技术定量微量蛋白质的方法。考察了复合物形成后改变溶液酸度对复合物稳定性的影响,优化毛细管电泳分析TPPS4的条件,并引入(-环糊精作为电泳缓冲添加剂进一步优化TPPS4的电泳行为。最后以BSA作为标准蛋白质,建立标准曲线,对人血清中蛋白质总量进行测定。本论文所建立的毛细管电泳定量分析蛋白质的方法,在未使用荧光检测器或增加毛细管光程的情况下,比毛细管电泳蛋白质直接进样、紫外检测的灵敏度提高了2个数量级。与毛细管电泳测定微量蛋白的常用方法——荧光衍生后利用激光诱导荧光检测相比,方法操作简单,试剂稳定并降低了仪器的成本。 最后考察了TPPS4 和氯化血红素(hemin) 作为标记物应用于免疫分析和毛细管电泳免疫分析的可行性。讨论了TPPS4和hemin与蛋白质的结合方法和游离标记物的去除,测定了TPPS4-BSA结合率和TPPS4与BSA结合后对蛋白免疫活性的影响。讨论中发现,所研究的卟啉类高灵敏度染色剂与抗原蛋白结合后,在毛细管电泳可见光检测的分析并不比非标记蛋白在毛细管电泳紫外检测分析中更为灵敏。实验结果为进一步探讨两种卟啉化合物作为荧光标记物的可能性打下了基础。
【学位授予单位】:北京化工大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2003
【分类号】:O658.9

【参考文献】
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