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《中国农业大学》 2016年
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铜绿假单胞杆菌核酸传感器及逻辑门的研究

陈玉婷  
【摘要】:铜绿假单胞杆菌造成的污染问题日趋严重,而传统培养基培养和PCR检测铜绿假单胞杆菌的方法所需时间长、操作复杂,不能满足现场快速检测的要求。因此,寻求更加经济高效的检测方法非常有必要。本研究针对铜绿假单胞杆菌的内标及毒素基因进行引物设计筛选,并通过多重LAMP反应和胶体金核酸传感器结合对铜绿假单胞杆菌及其毒素进行多重检测。系统优化后该方法可以在50分钟内不依赖复杂的大型仪器对铜绿假单胞杆菌及其毒素进行检测,检测限为20 CFU/mL,比PCR检测技术更灵敏。同时,将本研究开发的方法应用于分子逻辑门,并进行自然界水体的实际样品检测。本研究结果如下:1.建立铜绿假单胞杆菌及其毒素的等温扩增检测方法。筛选出针对铜绿假单胞杆菌两种重要的外毒素基因和内标基因的特异性引物用于LAMP方法,结果证实该方法可以用来在突发情况下或者常规监测研究中,鉴定饮用水和环境中铜绿假单胞杆菌外毒素的存在性,以判断其毒性潜力和调查其致病性。2.建立了多重LAMP与胶体金核酸传感器结合同时检测多种基因的方法。将已筛选出的针对铜绿假单胞杆菌两种重要的外毒素基因和内标基因的特异性引物应用于多重LAMP体系,结合胶体金核酸传感器检测,验证了该方法的可行性,并对传感器的制备进行优化以提高检测性能,最终达到现场检测的目的。3. 建立多重胶体金核酸传感器逻辑门。应用已建立的多重LAMP与胶体金核酸传感器结合同时检测多种基因的方法,以铜绿假单胞杆菌内标基因及两种毒素基因DNA为输入条件,以胶体金核酸传感器的红色条带信号为输出,建立了YES、AND、OR、INHIBIT、NOR逻辑门;应用所建立的多重胶体金核酸传感器OR逻辑门,对饮用水进行铜绿假单胞杆菌及其毒素基因的检测。
【学位授予单位】:

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