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《中国农业大学》 2003年
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谷子(Stetaria italica)中F128基因和F103基因的克隆及其功能的初步研究

薛静  
【摘要】: 以马铃薯基因SB401cDNA为探针筛选谷子cDNA文库。对筛选得到的5个阳性克隆进行序列测定、数据库同源序列查询,结果三个克隆分别与数据库中已知功能基因有较高同源性。F128和F103分别与数据库中稻P0003D09.9和拟南芥的At2g42190在氨基酸水平上有56%和34%的同源性。选择F128和F103基因进行深入研究。 F128基因由581个核苷酸组成,推测其编码的蛋白质有109个氨基酸,分子量为11,691Da。生物学软件分析结果表明,F128蛋白具有明显的疏水区域,并且具有信号肽序列,可能定位于液泡内。肽链上有多个可以被磷酸化修饰的位点。这些特点可能为F128蛋白发挥其生理功能提供结构基础。基因组Southern杂交结果显示F128基因可能以单拷贝或低拷贝存在于谷子基因组中。Northern杂交结果表明F128基因在授粉后不同时期的未成熟种子中表达,并且随着种子的成熟过程表达水平显著增强。F128在不同植物中的同源基因的Southern杂交分析结果表明,在玉米中存在F128同源基因。为进一步研究F128基因的功能,构建了在花椰菜花叶病毒35S启动子驱动下正义植物表达载体pBO128S,并将其转化烟草。转基因的烟草外植体比对照晚3-4天产生愈伤组织;但转基因烟草再生苗的表型与对照相比没有明显差异。 F103基因由819个核苷酸组成,推测其编码的蛋白质有130个氨基酸,分子量为14,113Da。生物学软件分析结果表明,F103蛋白是一个亲水蛋白,可能定位于核内。肽链上有多个可以被磷酸化修饰的位点。这些特点可能为F103蛋白发挥其生理功能提供结构基础。基因组Southern杂交结果显示F103基因以单拷贝或低拷贝存在于谷子基因组中。Northern杂交结果表明F103基因在叶中不表达,在茎、幼穗、未成熟种子中均表达。F103在不同植物中的同源基因的Southern杂交分析结果表明,在玉米中存在F103同源基因。为进一步研究F103基因的功能,构建了在花椰菜花叶病毒35S启动子驱动下正义植物表达载体pBO103S,并将其转化烟草。转基因的烟草外植体比对照晚一周左右产生愈伤组织;转基因烟草再生苗的表型与对照相比没有明显差异。
【学位授予单位】:中国农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2003
【分类号】:S515

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【参考文献】
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