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《中国农业大学》 2003年
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猪干扰素-γ基因的克隆及其表达

陈幸德  
【摘要】: 从猪的肝脏组织中提取基因组DNA,用长链PCR的方法扩增得到猪的干扰素-γ基因,经测序表明其与GenBank中发表的猪干扰素-γ基因序列的同源性为99%左右。将其纯化后克隆到真核表达载体PCI-neo载体中,组装成了真核表达载体PCI-neo-PoIFNγ。利用脂质体转染法将重组载体PCI-neo-PoIFNγ转染入仓鼠卵巢细胞(CHO)中,在G418的存在下进行筛选培养,获得了能表达猪干扰素-γ的转染细胞系。 收集转染细胞,用UNIQ-10柱式Trizol总RNA抽提试剂盒提取总RNA,并通过RT-PCR的方法扩增获得猪干扰素-γ cDNA基因,这也从另一途径证实了猪干扰素-γ基因已成功地整合到细胞染色体中并能正确的转录出其mRNA。将获得的猪干扰素-γ cDNA基因克隆入原核表达载体pBV220中,组装成了原核表达载体pBV220-cPoIFNγ,经正反测序表明其与GenBank中发表的猪干扰素-γ cDNA序列完全相同。将这个表达载体转化入大肠杆菌表达菌株DH5α和BL21中,温度诱导培养后,经SDS-PAGE和Western实验检测可知特异表达带约在17KD的位置,并证实在菌株DH5α和BL21中的表达量没有明显的差异,其表达量都约占细菌总蛋白的15%左右。
【学位授予单位】:中国农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2003
【分类号】:Q785

【参考文献】
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