收藏本站
《中国农业大学》 2003年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

有机磷农药的酶免疫化学研究

韩丽君  
【摘要】: 农药小分子的酶免疫化学研究可以是针对单个化合物制备特异性抗体,也可以针对一类化合物制备“簇特异性”抗体从而进行多残留免疫分析。本论文第一部分首次较为系统地针对常用的二甲氧基(硫代)磷酸酯类农药化合物的共性结构进行了多残留酶免疫分析研究,合成了三种具有共性结构特征的半抗原,并成功地得到了两种具有“宽谱特异性”的抗体。 根据我国常用的有机磷酸酯类农药的结构特征,将它们归为三类:(1) 芳环硫代磷酸酯类,如甲基对硫磷、杀螟硫磷、甲基嘧啶磷等;(2) 直链硫代磷酸酯类,如乐果、马拉硫磷等;(3) 乙烯基磷酸酯类,如久效磷、磷胺、速灭磷等农药,分别针对它们的共性结构合成了三种半抗原(分别简称为MP、SP和VP),以期得到对结构类似化合物具有“宽谱特异性”的多克隆抗体。针对这三种半抗原的活性基团特征,通过直接氨解法、重氮化法、混合酸酐法或活性酯法等方法,使之与不同的载体蛋白偶联,分别合成了人工抗原。以各种半抗原与BSA的偶联物作为免疫原进行动物免疫,分别得到了针对半抗原MP和SP的高效价抗体(VP免疫未成功)。获得的MP和SP抗血清与相应包被原结合的中点效价均为1∶12800倍,终点效价均大于50000倍。 采用间接竞争性ELISA方法,分别以甲基对硫磷和SP半抗原作为小分子竞争物,对其免疫分析条件进行了试验和筛选,在优化条件下建立了针对甲基对硫磷和SP半抗原的标准抑制曲线和回归方程。在此基础上进行了其它结构类似化合物的抑制试验。结果表明,甲基对硫磷对MP抗原抗体结合反应的I_(50)为0.13μg/mL,该抗体对杀螟硫磷和倍硫磷表现了较高的交叉反应性,二者的I_(50)分别为0.50μg/mL和0.35μg/mL。方法对这三种农药的检测限(I_(20))分别为6.7、20.9和12.1ng/mL,说明产生的抗体对三种农药均有识别能力,可用于三种农药的多残留检测。采用所建立的ELISA方法测得黄瓜中甲基对硫磷、杀螟硫磷和倍硫磷三种农药的添加回收率分别为83.10%~93.46%,80.45%~95.78%和74.89%~86.78%;C.V%分别为2.36%~10.36%,5.14%~7.14%和4.40%~6.34%,结果与GC测定数据基本吻合,在黄瓜中的最低检出浓度分别为0.003、0.01和0.006mg/kg,均低于相应的MRL值,符合残留分析的要求。 SP产生的抗体对乙酰甲胺磷、乐果、甲基对硫磷和马拉硫磷都表现了一定的交叉反应,四种化合物对SP抗原抗体结合反应产生抑制的I_(50)分别为2.66、3.31、8.26和14.9μg/mL,方法检测限(I_(20))分别为0.05、0.15、0.19和0.53μg/mL。表明针对这种化合物的共性结构产生的抗体对这些结构类似的化合物能够有一定的识别能力。 毒死蜱是一种中等毒性的广谱有机磷农药,在国内外农业生产中大量使用。本论文第二部分在国内首次进行了毒死蜱的免疫化学研究,并成功制备了针对毒死蜱的特异性抗体。从毒死蜱的磷酸酯乙氧基部位引入5-C间隔臂,通过混合酸酐法和活性酯法与不同的载体蛋白偶联,制备了人工抗原。以其BSA偶联物作为免疫原进行动物免疫,得到了对毒死蜱具有高度特异性和亲和力的高效价抗体。抗血清与包被原结合的中点效价为12800倍,终点效价大于50000倍。采用间接竞争性ELISA方法对免疫分析条件进行了试验和优化,建立了毒死蜱的标准抑制曲线和回归方程。 中国农业大学博士学位论文 摘要 一 毒死婢对抗原抗体结合反应的I。。为 76.snghL,方法对毒死婢的检测限(I。。)为5.2 nghL。除甲 基毒死婢以外uR%为66.9%),抗体对其它有机磷农药均不表现交叉反应。土壤、黄瓜和河水中 毒死婢的添加回收率分别为73.sl%~89.45%、76.93%~102.吕%和89.30%~103.2%,Cv%分别为 5.28%~9.83%、7.62%~12.25%和4.04%~5.18%,与GC测定数据基本吻合,最低检出浓度分别 为0刀05mghg、0.003mghg和0.08pgh,均低于其在蔬菜中的MRL值,符合残留分析的要求。利 用抗体进行的酶免疫分析方法灵敏度、准确性较好,操作简便,适于大量样本的快速筛选,可作 为快速测定工具予以开发和利用。
【学位授予单位】:中国农业大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2003
【分类号】:TQ450

手机知网App
【引证文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 祁志军;寇立泉;王东方;刘爽;;有机磷杀虫剂多残留免疫分析技术研究进展[J];食品安全质量检测学报;2013年01期
2 刘喜保;温万东;祁志军;胡兆农;杨润亚;;硫代磷酸酯类农药通用抗原的合成与鉴定[J];西北农林科技大学学报(自然科学版);2012年04期
3 丁晓燕;卢平;胡德禹;;酶联免疫分析方法在有机磷农药残留检测中的应用研究进展[J];山地农业生物学报;2011年06期
4 王磊;张丽杰;吕伟;韩世鹤;张付凯;潘家荣;;生物素-亲和素放大酶联免疫吸附法测定二乙基磷酸酯类有机磷农药[J];分析化学;2011年03期
5 任克维;刘蕊;王鸣华;;农药多残留免疫分析研究进展[J];农药;2010年08期
6 江英志;谢桂勉;;有机磷农药多残留检测研究进展[J];安徽农业科学;2010年17期
7 谢桂勉;沈玉栋;孙远明;;农兽药多残留免疫分析检测方法研究进展[J];现代农业科技;2010年11期
8 王姝婷;虞爱旭;金铨;任韧;王菁;朱国念;;多组分免疫分析技术在农药残留检测中的应用及其研究进展[J];中国卫生检验杂志;2009年08期
9 殷祥刚;尹丽梅;胥传来;;有机磷农药多残留免疫分析方法研究进展[J];食品科学;2008年10期
10 张敏;唐建设;程国华;陆贻通;;有机磷农药通用人工抗原的合成与鉴定[J];生态毒理学报;2008年02期
中国博士学位论文全文数据库 前7条
1 李艳玲;噬菌体展示肽库筛选农药通用结构半抗原的肽模拟物及其在农药多残留免疫检测中的应用研究[D];山东农业大学;2013年
2 刘艳;二甲氧基硫代磷酸酯类农药单克隆抗体研制及单链抗体三维结构模拟[D];南京农业大学;2009年
3 蒋雪松;用于有机磷农药残留检测的免疫生物传感器的研究[D];浙江大学;2008年
4 王姝婷;农药多簇人工抗原的免疫特异性及多残留免疫金技术[D];浙江大学;2008年
5 张静;川楝素免疫分析方法及其应用研究[D];西北农林科技大学;2008年
6 梁颖;超市鲜活食品质量安全体系及有机磷农药免疫检测方法研究[D];西北农林科技大学;2008年
7 任丽萍;四种农药在环境水体中降解研究[D];中国农业大学;2004年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 龙蓓青;酶传感器用于蔬菜和水体中有机磷农药快速检测的研究[D];湖南大学;2018年
2 胡春艳;基于噬菌体模拟表位的有机磷农药多残留免疫检测方法的研究[D];山东农业大学;2016年
3 赵吉建;有机磷农药ScFv抗体的筛选研究[D];西北农林科技大学;2015年
4 刘爽;抗硫代磷酸酯类ScFv抗体的筛选、鉴定及ELISA条件初步优化[D];西北农林科技大学;2014年
5 闫旭;农药多残留酶联免疫分析方法研究[D];南京农业大学;2013年
6 赵亚茹;食品中Ⅱ型拟除虫菊酯类农药残留的免疫胶体金快速检测试剂条的研究[D];上海师范大学;2013年
7 刘喜保;有机磷多残留免疫检测分析研究[D];西北农林科技大学;2012年
8 任克维;芳氧苯氧丙酸酯类除草剂多残留酶联免疫分析方法研究[D];南京农业大学;2011年
9 张丽杰;广谱有机磷农药单克隆抗体的制备与鉴定[D];中国农业科学院;2010年
10 刘莹;有机磷农药的胶体金免疫层析快速检测试纸条的研制[D];上海师范大学;2009年
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 郭永恩,陈家华,王能东,张秀,郭振泉,金声;抗丁草胺多克隆抗体的制备及应用(英文)[J];北京大学学报(自然科学版);2002年04期
2 郑光;毒死蜱的毒理学研究进展[J];中国公共卫生;2002年04期
3 纪淑娟,赵丽丽,冯辉;一种快速检测农产品有机磷农药残留的方法[J];农药;2000年10期
4 高晓辉,朱光艳;蔬菜上农药残毒快速检测技术——酶抑制法检测有机磷和氨基甲酸酯类农药[J];农药科学与管理;2000年04期
5 李莹,高成仁,吴剑英,陈光,息长林;40%毒死蜱乳油在稻田土壤中的消解动态[J];农药;2000年06期
6 高晓辉;蔬菜上农药残留快速检测势在必行[J];农药科学与管理;2000年01期
7 张柏青,周曙光,胡军,袁剑锋;毒死蜱的合成研究[J];农药;1999年07期
8 朱敏,韩树波,袁倬斌,沈含熙;硝基磺酚S作为酶联免疫分析中辣根过氧化物酶测定底物的研究[J];分析化学;1999年04期
9 李俊锁,钱传范,扈洪波,李喜旺,王明安;兽药残留的免疫亲合色谱分析(二)[J];中国兽药杂志;1998年01期
10 何亚楠,陈洪渊,虞伟,武建国;邻苯二胺-过氧化氢-辣根过氧化物酶酶联免疫示差脉冲伏安法测定人血清类风湿因子抗体[J];分析化学;1997年01期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 柳林;冯安生;王威;;氯化焙烧回收河南某黄金冶炼渣中的有价金属[J];金属矿山;2015年12期
2 张杰西;赵斌;房彬;;我国铁尾矿排放现状及综合利用研究[J];再生资源与循环经济;2015年09期
3 孙进兴;刘培生;;多孔吸声陶瓷的研究进展[J];陶瓷学报;2015年04期
4 汪振双;焦玉麟;赵宁;赵一健;;相变材料墙体使用阶段的碳排放评价[J];沈阳大学学报(自然科学版);2015年03期
5 韩培山;;黄金冶炼尾渣综合利用研究进展[J];化工管理;2015年19期
6 高丽娟;吴红运;吴红霞;徐妍;赵雪飞;;碱活化法制备外墙保温板残料活性炭及表征[J];科技导报;2015年09期
7 潘志颖;于水;冯国会;李慧星;郑淑;丁红雨;;保温材料保温能力对预制装配式建筑节能性的影响分析[J];节能;2015年04期
8 周明凯;彭丽芬;王怀德;胡开文;;氧化铁和发泡剂对煤矸石闭孔发泡陶瓷的性能影响[J];中国陶瓷;2015年02期
9 秦爱华;于成广;李括;杨柯;;辽宁省柴河铅锌矿开采与重金属污染历史重建[J];现代地质;2014年03期
10 张磊;;不同砌筑方式对非承重烧结页岩保温砖墙体热工性能的影响[J];四川建材;2014年01期
【二级引证文献】
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 张晓帅;广谱有机磷农药单克隆抗体、单链抗体的制备及免疫检测技术研究[D];兰州大学;2018年
2 刘运清;基于金纳米棒的有机磷农药等离子体ELISA方法的建立[D];吉林大学;2018年
3 胡薇薇;茶叶中啶虫脒农药的纳米生物传感器检测方法研究[D];江苏大学;2017年
4 陈鸽;对硫磷化学发光免疫分析方法研究[D];中国农业科学院;2017年
5 高苑;用于烟草戒断综合症的SH-NIC双醇质体水凝胶膏剂研究[D];西北大学;2017年
6 夏诗琪;基于不同标记物的免疫层析方法检测猪霍乱沙门氏菌的研究[D];南昌大学;2016年
7 王江录;食品中苯巴比妥快速检测方法的研究[D];南昌大学;2015年
8 闫莉婷;通用有机磷、喜树碱单克隆抗体的制备及免疫检测技术研究[D];兰州大学;2015年
9 周引怡;溴氰菊酯酶联免疫吸附和胶体金标记免疫分析[D];扬州大学;2015年
10 刘培辰;烯啶虫胺胶体金免疫层析试纸条的研究[D];天津科技大学;2014年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 张玉明;李晓恒;张福元;;黄金冶炼尾渣综合利用研究进展[J];无机盐工业;2014年12期
2 谭宝会;朱强;陈莹;陈星明;;我国尾矿综合利用现状及存在的问题和发展对策[J];矿山机械;2013年11期
3 刘阳;马健岩;朱旭;礼航;;以碳粉为造孔剂研制粉煤灰泡沫陶瓷[J];中国陶瓷;2013年10期
4 段宁;陈浩;李婧;;发泡陶瓷保温板应用技术及前景研究[J];江苏建筑;2013年04期
5 林俊领;李增华;卢冀伟;王奉水;李艳军;;新疆某金矿氰化尾渣回收铜的试验研究[J];矿产综合利用;2013年02期
6 周白霞;;无机保温材料在外墙保温系统中的应用展望[J];四川建筑科学研究;2013年01期
7 鲁斌;;浅谈民用建筑外墙保温系统和保温材料的选择探讨[J];建筑安全;2013年02期
8 汪洋;李仕雄;诸向东;於智泉;;从氰化尾渣衍生物制备标准铅、锌精矿的新工艺[J];中国有色金属学报;2013年01期
9 马龙;李国忠;姜葱葱;;用赤泥生产发泡陶瓷保温材料的试验室初探[J];建筑砌块与砌块建筑;2013年01期
10 欧阳小胜;孙国梁;邓美兰;陈锐彬;;闭孔泡沫陶瓷气孔微结构的分形表征及其模拟[J];中国陶瓷;2012年12期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 韩长绵;;乐果、甲基对硫磷、马拉硫磷和乙基对硫磷等常用有机磷农药色谱分离的研究[J];四川环境;1987年01期
2 罗启章;庞晓露;;废气中甲基对硫磷的气相色谱测定[J];环境污染与防治;1991年02期
3 吴芸茹;王利民;娄旸;刘扬;胡白石;刘凤权;;复合免疫制备3种有机磷农药单克隆抗体的技术研究[J];南京农业大学学报;2009年04期
4 钟宁;曾清如;姜洁凌;杨成建;;有机磷农药的降解及其研究进展[J];现代农药;2005年06期
5 黄士忠,田淑贤,王一茹,田作峰;气相色谱法测定苹果中多种有机磷农药方法的研究[J];农业环境科学学报;1985年02期
6 温万东;刘喜保;高履桐;杨润亚;祁志军;;在离子液体中合成有机磷农药通用半抗原[J];合成化学;2012年05期
7 刘冰;葛玉;王硕;;有机磷农药半抗原及人工抗原合成方法研究进展[J];农产品加工(创新版);2009年10期
8 韩天玮;李君;徐丽莉;;气相色谱法测定水中有机磷农药和阿特拉津[J];仪器仪表与分析监测;2011年02期
9 丁园,胡正生,魏洽,史蓉蓉;南昌市农药使用调查及控制对策[J];南昌航空工业学院学报(社会科学版);2003年04期
10 邢建,郑迪梅;气相色谱法测定蔬菜中有机农磷药残留量[J];干旱环境监测;1987年02期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 张雁;康天放;万译文;周忠亮;刘桐珅;;负载金微粒修饰电极的甲基对硫磷传感器研究[A];持久性有机污染物论坛2008暨第三届持久性有机污染物全国学术研讨会论文集[C];2008年
2 李晓露;龚荔;刘广龙;周易勇;朱端卫;;第八届湖北省给水排水工程与环境工程研究生学术论坛 硝酸盐对甲基对硫磷光降解的研究[A];武汉大学第九届研究生学术科技节系列活动之“第八届湖北省给水排水工程与环境工程研究生学术论坛”论文集[C];2014年
3 崔中利;孙洁梅;李顺鹏;;甲基对硫磷水解酶性质的初步研究[A];第九届全国土壤微生物学术讨论会论文摘要[C];2001年
4 张大帅;李晨;吴迪;张小朋;于长江;林强;史载锋;;南渡江水域中有机磷农药的检测[A];2017中国环境科学学会科学与技术年会论文集(第四卷)[C];2017年
5 戴桂玲;刘向明;;毒杀威乳油中甲基对硫磷和氰戊菊酯的气相色谱定量测定方法[A];中国化工学会农药专业委员会第八届年会论文集[C];1996年
6 王洪山;张美兰;;水中有机磷农药残留量的气相色谱分析[A];天津市色谱研究会第一届学术报告会论文、报告(摘要)汇集[C];1980年
7 齐懿鸣;王峰;杨晓波;;食品中有机磷农药残留量的测定[A];第二届中国奶业大会论文集(下册)[C];2011年
8 高强;王彬彬;郑永良;刘德立;;几株甲基对硫磷高效降解菌的分离鉴定及降解特性研究[A];2006中国微生物学会第九次全国会员代表大会暨学术年会论文摘要集[C];2006年
9 温伟;崔岩;冷斌;张新超;;有机磷农药复合汽油中毒抢救成功一例[A];中华医学会急诊医学分会第十三次全国急诊医学学术年会大会论文集[C];2010年
10 温伟;;有机磷农药复合中毒12例临床分析[A];中华医学会急诊医学分会第十三次全国急诊医学学术年会大会论文集[C];2010年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 山东科技报 科技网记者 李一凡;山农大新技术实现有机磷农药多残留快速检测[N];山东科技报;2017年
2 中化化肥高级顾问 中国农业大学教授 肖悦岩;有机磷农药不能起到叶面肥的作用[N];农民日报;2011年
3 黄显斌 唐明山;当心!蔬菜水果农药超标[N];中国中医药报;2004年
4 北京解放军302医院叶文华;蔬菜水果农药超标危害大[N];科技日报;2002年
5 中化化肥高级顾问 中国农业大学教授 肖悦岩;有机磷农药无叶面肥作用[N];农资导报;2011年
6 记者  范建;毕赤酵母能“吃掉”多种有机磷农药[N];科技日报;2006年
7 记者 刘海英;婴儿出生前接触有机磷影响大脑发育[N];科技日报;2018年
8 刘晴;有机磷农药降解酶制剂[N];农村医药报(汉);2006年
9 周铮;我国研制成功"有机磷农药降解酶制剂"[N];农民日报;2006年
10 本报记者 胡其峰;有机磷农药降解酶制剂即将产业化[N];光明日报;2006年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 韩丽君;有机磷农药的酶免疫化学研究[D];中国农业大学;2003年
2 董静;新型电化学传感器对土壤和水中甲基对硫磷的检测研究[D];山东农业大学;2013年
3 廖小平;江汉平原典型研究区有机磷农药分布特征及氧化还原机制研究[D];中国地质大学;2016年
4 赵凤春;基于噬菌体展示技术的有机磷农药多残留免疫分析研究[D];山东农业大学;2017年
5 孙运光;乐果毒性效应与M受体的研究[D];复旦大学;2003年
6 徐悦华;纳米二氧化钛光催化降解有机磷农药的研究[D];华南理工大学;2001年
7 龚春雨;有机磷农药—敌敌畏的发育生殖毒性及其机制的实验研究[D];四川大学;2006年
8 匡兴亚;长期接触有机磷农药对健康的影响[D];复旦大学;2006年
9 吴强恩;兴奋性氨基酸递质系统在乐果神经毒性中的作用[D];复旦大学;2007年
10 文一;有机磷农药的联合毒性及其毒理学机理研究[D];中国农业科学院;2008年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 万娟;多功能粘质沙雷氏菌的筛选鉴定及其甲基对硫磷水解酶基因的克隆[D];湖北大学;2017年
2 柳絮云;有机磷农药降解菌新种的分离鉴定及其甲基对硫磷水解酶的催化性能研究[D];华东理工大学;2015年
3 李英南;体外分子进化提高甲基对硫磷水解酶的催化活力[D];江南大学;2018年
4 王慧敏;甲基对硫磷特异性单克隆抗体和单链抗体的制备及应用[D];山东农业大学;2017年
5 肖玮;甲基对硫磷降解菌的筛选及其甲基对硫磷水解酶基因的克隆[D];中国农业科学院;2008年
6 潘志军;TiO_2超声催化降解有机磷农药—甲基对硫磷的研究[D];辽宁大学;2006年
7 潘志军;TiO2超声催化降解有机磷农药—甲基对硫磷的研究[D];辽宁大学;2006年
8 刘媛;典型有机磷农药的水解行为研究[D];中国地质大学;2016年
9 马倩倩;有机磷农药速测膜的研制[D];浙江师范大学;2011年
10 刘璐璐;甲基对硫磷水解酶的研究[D];中国科学院研究生院(武汉病毒研究所);2003年
中国知网广告投放
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026