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《中国农业大学》 2004年
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猪小肠抗菌肽分离鉴定及其生物活性研究

马卫明  
【摘要】: 新鲜猪小肠经充分破碎后,再经高温处理、乙酸浸提,最后经Sephadex G-100和Sephadex G-25凝胶柱过滤层析,超滤离心管超滤后,收集各组分并用琼脂糖弥散法检测各组分的抗菌活性。具有抗菌活性的组分,经Tricine SDS-PAGE分析为一条蛋白带,分子量约为5972Da左右,得到电泳纯的猪小肠抗菌肽,并进一步对分离纯化的猪小肠抗菌肽的生物学功能进行了如下研究。 采用琼脂糖弥散实验和活菌计数实验检测了猪小肠抗菌肽对鸡大肠杆菌O_1 C83845株、鸡白痢沙门氏菌C79-13株、E.coli O_2、E.coli O_(78)、猪致病性大肠杆菌自然分离株、鸡致病性大肠杆菌自然分离株、白色葡萄球菌、金黄色葡萄球菌ATCC25923株、猪致病性沙门氏菌自然分离株、绿脓杆菌ATCC27853株、鱼致病性嗜水气单胞菌等11株细菌的作用。结果表明,猪小肠抗菌肽除对E.coli O_2和猪致病性沙门氏菌自然分离株作用较弱外,对以上其他9株菌株均有较强的抑制或杀灭作用,杀菌率由59.5%~98.5%不等。揭示了该物质具有较强的抗菌活性和较广的抗菌谱。 将鸡大肠杆菌O_1 C83845株、鸡白痢沙门氏菌C79-13株和金黄色葡萄球菌ATCC25923株与猪小肠抗菌肽在室温下作用15min。扫描电镜下观察猪小肠抗菌肽对这三株细菌形态结构的影响。结果发现,猪小肠抗菌肽可作用于细菌,导致细菌表面出现囊泡样或不规则突起样结构,细菌严重变形、扭曲,表面变得粗糙,皱缩,胞膜破裂,内容物外流而死亡。从而可推断该抗菌肽类物质对细菌具有溶膜性作用,在一定程度上揭示了该物质的抗菌机理。 将IBV用猪小肠抗菌肽处理后再接种9日龄鸡胚,测定鸡胚尿囊液中的IBV血凝效价,并观察鸡胚病变。结果发现,猪小肠抗菌肽可使鸡胚尿囊液中IBV的血凝效价降低,同时还能抑制IBV所引起的鸡胚病变。用猪小肠抗菌肽处理NDV和IBDV后再感染SPF鸡,结果发现,猪小肠抗菌肽可以降低ND和IBD的发病率和死亡率。表明猪小肠抗菌肽对IBV、NDV和IBDV等有一定的灭活作用。 给雏鸡肌肉注射猪小肠抗菌肽后,定期测定雏鸡腹腔巨噬细胞吞噬率和吞噬指数、免疫器官指数、ND弱毒苗及IBD中等毒力苗的血清抗体水平、生长指标与各段肠管肠绒毛长度、黏膜厚度、绒毛长度与隐窝深度比值(V/C),上皮内淋巴细胞(IEL)、肥大细胞、杯状细胞的数量以及肠道组织中IgA阳性物面积系数。结果发现猪小肠抗菌肽可提高鸡腹腔巨噬细胞吞噬率和吞噬指数;提高免疫器官指数;提高ND弱毒苗及IBD中等毒力苗的血清抗体水平;使肠道粘膜IEL、肥大细胞和杯状细胞数量以及肠道组织中的IgA阳性物面积系数显著增加;可提高各段肠管肠绒毛长度和V/C值,但对肠黏膜厚度无显著影响,实验组鸡的生长指标也较对照组明显升高。另外,猪小肠抗菌肽也可以增强小鼠腹腔巨噬细胞LDH活性。这些结果表明猪小肠抗菌肽对鸡特异性免疫与肠道粘膜免疫水平均有不同程度的提高作用;猪小肠抗菌肽还能促进雏鸡生长发育,并从结构上初步揭示了猪小肠抗菌肽促进生长发育的机理是使肠绒毛增长,改善了肠绒毛结构。 本研究还利用化学交联法增强猪小肠抗菌肽免疫原性,以此抗原免疫家兔成功制备了猪小肠抗菌肽多抗,采用免疫组化方法对猪小肠抗菌肽在小肠中的分布定位进行了初步观察。猪小肠抗菌肽多抗的成功制备为进一步深入研究抗菌肽生物学功能及其特性和抗菌肽与肠道黏膜免疫的关系奠定了基础。
【学位授予单位】:中国农业大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2004
【分类号】:S852.61

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【引证文献】
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3 明双喜;王沂蒙;刘艳;江国托;;抗菌肽作用机理及其在生产方面的研究进展[A];格莱姆抗菌肽——抗菌肽开发与应用技术研讨会论文集[C];2009年
4 张东玲;黄文树;粱英;关瑞章;宋凯;;日本鳗鲡肝脏抗菌肽的分离纯化[A];“细胞活动 生命活力”——中国细胞生物学学会全体会员代表大会暨第十二次学术大会论文摘要集[C];2011年
5 陆婕;钟雅;柳林;付康;陈正望;;家蝇蛆抗菌肽提取工艺研究[A];格莱姆抗菌肽——抗菌肽开发与应用技术研讨会论文集[C];2009年
6 马清泉;单安山;董娜;曹艳萍;;新型抗菌肽的分子设计和活性检测[A];第六次全国饲料营养学术研讨会论文集[C];2010年
7 彭兵;张树斌;王立安;;枯草芽孢杆菌菌株A抗菌肽的分离纯化及抗真菌机理[A];格莱姆抗菌肽——抗菌肽开发与应用技术研讨会论文集[C];2009年
8 明双喜;刘艳;单春乔;江国托;;抗菌肽PMAP-37基因重组原核表达载体构建[A];中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第三届猪病防控学术研讨会论文集[C];2008年
9 袁天虎;张欣;胡泽汗;王芳;雷鸣;;抗菌肽Piscidin 1及其突变体稳定性的动力学研究[A];中国化学会第28届学术年会第13分会场摘要集[C];2012年
10 赵瑞君;刘颜岗;程璟侠;樊宏英;冀霞;;黄粉虫抗菌肽对K562细胞周期的影响及与羟基脲对细胞增殖抑制的比较[A];格莱姆抗菌肽——抗菌肽开发与应用技术研讨会论文集[C];2009年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 本报通讯员 梅组;猪小肠做出大文章[N];黄冈日报;2011年
2 杨小蓉;猪小肠加工利润大[N];四川科技报;2002年
3 赵永伟;自治区政协力促抗菌肽产业发展[N];亚洲中心时报(汉);2009年
4 暨南大学医药生物技术研究开发中心 黄亚东博士;千金不换[N];医药经济报;2001年
5 王志灵;李锂:道在猪小肠 志在四海[N];21世纪经济报道;2010年
6 郑青;揭开抗菌肽生物活性的面纱[N];医药经济报;2001年
7 江南大学食品学院动物营养研究室 宫霞乐国伟;昆虫抗菌肽在动物营养中的应用[N];中国畜牧兽医报;2008年
8 暨南大学医药生物技术研究开发中心 郑青博士后;抗菌肽 前景广阔的新型抗生素[N];医药经济报;2001年
9 宏宇;抗菌肽推动绿色养殖业发展[N];中国特产报;2003年
10 邹忠全;E.R.抗菌肽符合妇科杀菌剂国际新标准[N];中国医药报;2007年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 马卫明;猪小肠抗菌肽分离鉴定及其生物活性研究[D];中国农业大学;2004年
2 王远强;小分子抗菌肽的虚拟组合设计、筛选与效应研究[D];西南大学;2012年
3 刘黎;抗菌肽活性的力学调控机制研究[D];华南理工大学;2012年
4 刘蕊;抗微生物活性肽的资源发掘和功能研究[D];南京农业大学;2011年
5 侯峰;光滑爪蟾(Xenopus laevis)皮肤抗菌肽的筛选及其相关研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2010年
6 鄢然;1b型HCV研究模型的建立及蝎源抗菌肽抑制HCV感染的初步探讨[D];武汉大学;2010年
7 周杰;中国林蛙抗菌肽RTCI的结构功能研究[D];吉林大学;2007年
8 王宇光;抗菌肽CMIV基因突变体的设计、合成和表达的研究[D];华南热带农业大学;2002年
9 张卫民;幽门螺杆菌抗菌肽抗菌及抗肿瘤作用的基础研究[D];中国人民解放军第一军医大学;2003年
10 徐国华;抗菌肽HEDISTIN和二氢叶酸还原酶突变体DHFR-W21H的结构及生物作用机制研究[D];华中师范大学;2011年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 林文学;仔猪抗菌肽PR-39基因表达随日龄的变化及不同锌源对其表达的影响[D];浙江大学;2003年
2 邱晓燕;舍蝇(Musca domestica vicina)幼虫抗菌肽的提取及其生物活性的初步研究[D];厦门大学;2001年
3 舒慕娅;抗菌肽Selysin的表达及其对肝癌细胞HepG2的毒性作用[D];华中科技大学;2009年
4 潘新民;Hepcidin、铁和炎症相互关系的初步研究[D];浙江大学;2011年
5 曾雪嘉;转不同抗菌肽和几丁质酶基因烟草的抗病性研究[D];西南农业大学;2004年
6 田晓乐;林蛙抗菌肽的制备与制剂研究[D];吉林大学;2004年
7 王红叶;α-螺旋型多肽对不同肿瘤细胞的抗癌活性研究[D];吉林大学;2010年
8 陈道煌;基于Loloatin C的系列假环多肽的设计合成及抑菌机理的初步研究[D];汕头大学;2010年
9 陈姗;人β防御素3(hβD-3)的cDNA克隆与融合蛋白的表达[D];第三军医大学;2002年
10 江惠;竹叶天然抗菌肽的分离纯化、抑菌活性与抑菌机理研究[D];西华大学;2011年
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