地被月季、菊花再生和抗旱遗传转化体系建立及其耐旱性快速评价方法研究

【摘要】： 本研究为建立园林地被植物抗旱种质资源筛选和创新方法体系，以地被月季‘Royal Bassino’和地被菊花‘White Snow’为试材，研究了再生和抗旱遗传转化体系建立，并探索了其耐旱性快速鉴定和评价方法。 ‘White Snow’在MS添加0.2mg/l NAA、1.0mg/l KT和2.5mg/l GA_3或0.1mg／l NAA、2.0mg/l KT、5.0mg/l GA_3的培养基中每40天一次交替继代，对幼芽增殖效果最好；以无菌苗叶片为外植体，在附加2.0mg／l 6-BA和0.2mg/l NAA的MS培养基中获得了93.8％的不定芽再生率。而对于‘Royal Bassino’带有腋芽的茎段，MS中添加1.5mg/l 6-BA和0.1mg／l IBA为最适诱导培养基，诱导出芽率100％；MS中添加0.5mg/l 6-BA和0.05mg/l IBA可以获得最高增殖倍数6.3；而添加0.01 mg/l IBA的1／2MS为最佳生根培养基，生根率92％；以叶柄为外植体和MS为基础培养基，在添加7μM TDZ的诱导培养基中暗培养10天后，转接到添加0.5mg/l 6-BA的再生培养基中光周期培养约20天，可以获得57.1％的芽再生率，为最适再生培养条件。 将含拟南芥逆境诱导转录因子DREB1A基因的植物双元表达载体pBI-DREB1A导入根癌农杆菌LBA4404，农杆菌介导法遗传转化地被菊花‘White Snow’叶盘，经PCR和PCR-Southern检测，DREB1A基因已整合到转化植株的基因组中。遗传转化过程中，预培养2d后，将OD_(600)为0.5～0.7的农杆菌菌液稀释30倍后侵染叶盘10min，再共培养2d，有利于获得最高遗传转化效率。 用‘White Snow’10叶龄扦插生根幼苗为试材，分别采用自然失水胁迫和PEG胁迫处理，环境条件为温度23±2℃、空气相对湿度30±3％、光照约10μmol．m~(-2)s~(-1)。在划分不同处理萎蔫指数的基础上，测定了鲜样质量保持率、叶片水势、叶片溶质渗透势、MDA含量、SOD和CAT活性等指标。结果表明：萎蔫指数划分的主要形态特征因胁迫方法而异。自然失水胁迫中，胁迫8h为幼苗恢复极限；在恢复极限内复水，幼苗鲜样质量保持率、叶片水势、MDA含量、SOD以及CAT活性都得到了规律性的结果。PEG胁迫处理中，与胁迫浓度呈正相关的指标有鲜样质量保持率、叶片溶质渗透势、MDA含量以及SOD活性，而叶片水势和CAT活性却没有发现规律性结果。20％PEG胁迫处理4h内复水，能够正常恢复，其复水期间的鲜样质量保持率、叶片溶质渗透势、MDA含量、SOD活性都得到规律性的结果，而叶片水势和CAT活性却没有得到。综合上述，自然失水胁迫和PEG胁迫都可以用于地被菊花‘White Snow’幼苗耐旱性快速评价；不同处理形态萎蔫评价指标不同；不同的胁迫处理方式可利用的水分状况和生理指标存在一定的差异。

【关键词】：地被月季 地被菊花 再生 遗传转化 抗旱
【学位授予单位】：中国农业大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2004
【分类号】：S688.4
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