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《中国农业大学》 2004年
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DNA指纹图与微卫星DNA技术在近交系大、小鼠遗传监测中的应用研究

陈振文  
【摘要】: 本文通过对DNA指纹技术和PCR扩增微卫星DNA技术在近交系大、小鼠遗传检测中的应用研究,并与生化位点标记分析法进行比较,旨在筛选出具有精确、可靠、特异性好的实验动物遗传检测方法,为建立分子生物学实验动物遗传质量监测技术和标准奠定基础。 1.采用公安部二所自行研制的JL-02多位点探针对5个品系的近交系小鼠和2个品系近交系大鼠进行了DNA指纹分析,经过对同一DNA的反复制作DNA指纹图和同一个体不同组织进行的DNA指纹图制作及对亲代和子代(同品系内和不同品系间杂交)间的DNA指纹图比较。结果表明,不同近交系大、小鼠的DNA指纹图差异很大,而同一品系DNA指纹图基本一致;F1及其父母代的DNA指纹图比较,发现仔代的DNA指纹图带均能在其父母代的DNA指纹图带中找到,而且无其他图带。图谱可供分析的图带多,条带清晰可见,易于判读和具有灵敏性高及丰富的多态性,并具有遗传稳定性和组织稳定性。 2.通过对4家单位提供的BALB/c、C57品系小鼠,1家单位提供的615、DBA/2各一窝(其中母鼠各1只、仔鼠各3只),经提取脑组织DNA,限制性内切酶Hinf Ⅰ酶切,利用JL-02多位点探针Southern杂交技术对其进行了DNA指纹分析。结果显示:在2.0kb-23kb之间均出现了14条以上清晰可见、易于判别的图谱条带。经统计表明同一品系近交系小鼠DNA指纹图带基本一致,其中共有带率(X)0.94—1.0,相似系数(F)0.94—1.0。而不同品系间的F值为0.11,X值为0.11。两个品系同一家系的母鼠与仔鼠所得到的DNA指纹图相一致。 3.实验采用JL-02多位点探针对北京和西安地区较大的7家实验动物生产供应单位的5个BALB/c群,2个BALB/c-nu/nu群,4个C_(57)群,1个CBA/N群和1个DBA/2群近交系小鼠进行了DNA指文图分析,并与常规生化标记分析法进行了比较,结果显示:所产生的DNA指纹图的图带数均在17-22条,具有良好的多态性。生化标记分析中Hbb位点显示异常的BALB/c及BALB/c-nu/nu小鼠与其同群体正常小鼠的DNA指纹图有较大差异,两个体之间的相似系数(F)及共有带率(X)均在0.8以下。完全相同DNA指纹图的概率(P)均在1.3×10~(-2)以下。生化标记分析未见异常的群体内DNA指纹图基本一致,P>2.2×10~(-1)。DNA指纹图显示不同单位的同一品系间存在一定差异,其相似系数及共有带率均在0.8以下,P<1.1×10~(-3)。不同品系间DNA指纹图的相似系数及共有带率相差较大,在0.4以下,P=2.7×10~(-10)。BALB/c BALB/c-nu/nu间DNA指纹图的相似系数和共有带率在0.65以下,P值为3.8×10~(-6)。两种方法经比较表明,DNA指纹图在动物遗传检测中比生化标记分析有较大的优势,它不但能确切地反映生化标记分析显示异常动物的遗传变化,而且还检出了生化标记分析未能检出的动物遗传变异,因此更加灵敏。DNA指纹图能反映出动物个体间、群体间及品系间的变异程度、亲缘关系及遗传距离,这是生化标记分析无法比拟的。 4.采用DNA指纹图法对国内已知的7个品系9个近交系大鼠群体进行了分析。结果表明:不同品系之间DNA指纹图差异较大,其平均图带数为16.360±2.178,共有带率为0.061±0.008,相似系数为0.062±0.008,相同DNA指纹图概率为3.691×10~(-23)。同一群体不同个体之间DNA指纹图带的相似系数和共有带率(除SHR(哈)和WKY(哈)小于0.6外),其他均在大于0.9。不同地区同一SHR和同一WKY品系间DNA指纹图存在差异,其相似系数和共有带率均小于0.6。 中国农业大学博士学位论文中文摘要 !旦旦旦旦旦里旦旦旦旦旦旦旦旦旦 5.选取小鼠不同染色体上的16个微卫星位点,通过PCR扩增对国内常用的10个近交系小鼠 进行了微卫星多态性分析。结果表明14个微卫星DNA具有稳定扩增效果,在同一品系不同 个体之间表现单态性;在不同品系之间表现多态性,在每一微卫星位点有2至5个等位基因。 129/Sv与其余品系在14个微卫星位点都表现较高的多态性,TA,与TA:只在DgMit23位点 表现多态性。因此,所筛选的14个微卫星位点(DIMit365、DZMit30、D3Mitsl、DSMit48、 D6Mitl02、D10Mitl80、DllMitl28、D12Mitl47、D14Mitl02、D17Mit36)能够反映近交系 小鼠的品系特异性,具有较高多态性,可快速、经济地对近交系小鼠进行遗传监测. 6.实验利用聚合酶链反应(.PCR)扩增技术对国内北京和哈尔滨等4家单位6个品系(SHR、 SHRSP、LEW、RCS、从叹Y和F344)的8个近交系大鼠群体进行了DNA多态性的分析研 究。结果表明9个微卫星位点(位点名称为:PKC、SCNZA、CAI,、MYC、APOC3、THYI、 SMST、AFP、AGT、UCP)具有显著多态性;不同品系个体之间具有多态性;同一群体不同个 体之间除SHR(哈)的SMST位点和WKY(哈)的AGT位点出现一定的差异外,其他均 没有差异;不同地区同一品系不同个体之间也存在一定的差异。说明该方法能有效地对近交 系与杂交系、品系与品系:、品系与亚系加以区分。 7.为了解和掌握国内BALB/。小鼠遗传质量状况,验证微卫星标记技术在近交系小鼠遗传检测 中应用的可靠性,本实验应用所筛选的小鼠不同染色体上的14个微卫星位点,通过PcR扩 增对北京、上海、沈
【学位授予单位】:中国农业大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2004
【分类号】:Q789

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