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《中国农业大学》 2004年
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抗草甘膦大豆转基因PCR检测及其饲用安全研究

朱元招  
【摘要】: 本论文研究了RR抗草甘膦转基因大豆、豆粕及其饲料产品中外源基因的PCR检测技术以及系统评价其饲喂动物的安全性。 建立大豆及其饲料产品中转基因成分的定性和定量PCR检测方法。以CTAB和GMO试剂盒两种方法提取基因组DNA。用常规定性PCR对外源基因盒结构中的不同基因进行筛选或特异性扩增,对产物进行回收和酶切鉴定,最低检测下限为0.1%;在巢式PCR方法中,对大豆模板DNA的检测下限可达到pg级水平;利用建立的双引物PCR技术同时检测内源和外源基因,检出来自美国、阿根廷的大豆及饲料为转基因阳性产品,取得良好效果。另外,建立了双链DNA SYBR Green Ⅰ结合染料实时荧光定量PCR技术,绘制lec和CaMV35s基因定量扩增标准曲线方程,R~2值分别达到0.9997和0.9992;对已知转基因含量的大豆标准品及大豆模拟样品进行定量,实测值与实际值相对偏差在5~11%范围之间。上述PCR方法适用于RR大豆或饲料中转基因成分的定性与定量检测。 通过断奶仔猪生长试验、生长猪消化试验和大鼠亚慢性毒性试验,评价RR抗草甘膦转基因豆粕的饲用价值和安全性。RR大豆(粕)的常规概略养分、氨基酸组成、微量元素、脂肪酸组成及胰蛋白酶抑制因子等抗营养因子含量在正常范围值内,RR豆粕对断奶仔猪的生产性能和血生理生化无明显影响。生长猪回肠末端安装T型瘘管试验显示,RR转基因豆粕粗蛋白质、氨基酸的回肠表观消化率及回肠真消化率与常规豆粕相近;外源cp4 epsps基因在生长猪肝脏、肌肉、脾脏和胸腺组织中未被检出,在食糜和粪便中的检出率均仅为6.7%。在80只Sprague-Dawley大鼠13wks的亚慢性安全性试验中,饲喂60%常规非转基因或RR转基因豆粕日粮的大鼠生长与采食无显著性差异(P>0.05);饲喂90%高含量RR豆粕的大鼠血液学、血清生化和尿液参数在生理值范围内;试验期内无大鼠死亡,大体剖检和组织病理学检验并未发现体组织有病理学变化特征;另外,在大鼠咬肌组织未发现有外源或内源DNA残留。常规与RR抗草甘膦转基因大豆(粕)营养组成具有等价性,对断奶仔猪和生氏猪有相同的营养生物学效价,对大鼠的饲用安全具有实质等同性。
【学位授予单位】:中国农业大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2004
【分类号】:S816

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