鸡传染性法氏囊病间接ELISA抗体检测试剂盒的研究

【摘要】： 本研究将IBDV(CJ801)囊毒在鸡胚上盲传4代而后在鸡胚成纤维细胞上连传7代得到了CEF适应毒，大量繁殖细胞毒，经0.1％甲醛灭活，经蔗糖梯度密度离心法将其纯化。用纯化的IBDV作为包被抗原，建立了一种检测血清中IBDV抗体的间接ELISA方法。 通过对ELISA反应条件的系列摸索，确定了各组分的最适工作条件，并初步组装成试剂盒。试验结果表明，Costar公司生产的酶标板的变异系数为3.7％，达到ELISA的要求；IBD抗原最适包被浓度为0.0128微克／微升，最适包被条件为4℃过夜，血清稀释度为1：200，HRP-兔抗鸡IgG的最适工作浓度为1：800，待检血清和酶标二抗的反应时间均为37℃1小时，底物在室温显色20分钟。根据已经建立的ELISA方法及反应条件，确定阴阳性临界值为0.17。用本试剂盒检测已知的IBDV的BJ836、CJ801、2512、Cu和Harbin株单因子血清呈阳性反应。而与已知的SPF鸡血清呈阴性反应。用本试剂盒检测IBV，EDS’76，ND lasota，H9亚型AIV等单因子血清无交叉反应，说明建立的ELISA具有很好的特异性。本试剂盒与西班牙HIPRA公司IBDV抗体检测试剂盒的比较结果表明：两者共同检测60份血清，阴阳符合率达到96％；平行检测44份血清样品，两者检测结果呈线性关系，且相关系数为0.900。对包被好的反应板、酶标二抗、阴阳性血清和试剂盒的保存条件进行摸索，由于时间关系，只做到3个月。通过引入质控血清进行试剂盒的批内、批间重复性测试的方法，达到了试剂盒质量控制的目的。 本研究建立了一种快速、准确的检测方法，为我国IBD的免疫监测和血清学调查提供了行之有效的技术手段。