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《中国农业大学》 2004年
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无内源逆转录病毒中国实验用小型猪的筛选鉴定和猪抑肌素基因敲除载体构建

陆泉枝  
【摘要】: 第一部分 无内源逆转录病毒中国实验用小型猪的筛选与鉴定 内源逆转录病毒(endogenous retrovirus,ERV)是一类以前病毒形式整合在生物基因组内的一类逆转录病毒,其本身对宿主没有任何病理作用。ERV大约在约1.2亿年前入侵动物细胞并在动物体内定居,其在哺乳动物的进化中扮演了非常重要的角色。从目前研究来看,几乎所有的哺乳动物包括人类在内都含有这类病毒。 猪内源逆转录病毒(Porcine Endogenous Retrovirus,PERV)是以前病毒形式整合在猪基因组内并垂直传递的一类C型γ病毒,在进化上与长臂猿白血病病毒(GALV)、鼠白血病病毒(MLV)和猫白血病病毒(FeLV)属于同一个分支。从遗传角度推算,猪内源逆转录病毒大约在3千万年前整合到了猪的基因组内。 猪作为异种器官移植的供体有许多优点,但分布在其基因组内的PERV以及猪细胞表面的半乳糖-α-(1,3)-半乳糖(Gal-α-1,3-Gal)残基抗原却是制约猪作为异种器官移植供体的主要因素。研究发现,PERV的拷贝数在不同品种不同个体的猪中存在较大差异,有些品种如我国香猪的基因组内PERV的拷贝数相对较低,而有些品种如南美野猪基因组内甚至不含PERV。 本文通过在实验中选取中国农业大学畜牧实验站的3~6月龄、健康的雌性中国实验用小型猪67头,首先通过PCR进行大规模的筛选检测,对中国实验用小型猪体内的PERV负载情况进行调查,找到了两头不含猪内源逆转录病毒的个体。然后又通过Southern杂交的方法进一步对检测结果予以验证,其结果与PCR检测的结果相符合。 实验中同时还选取含有猪内源病毒的中国实验用小型猪和长白猪各40头,分别对每个猪种基因组内PERV的囊膜蛋白类型进行分析。结果表明从囊膜蛋白类型来看,长白猪和中国实验用小型猪之间没有明显的差异,但在两个猪种中,同时含有两种囊膜蛋白基因(env-A and env-B,记为env-AB)的个体所占比例明显高于仅含一种囊膜蛋白基因(env-A or env-B)的个体比例。 本实验采用PCR和Southern杂交的方法首次在中国实验用小型猪中发现了2头内源病毒负载阴性的个体,其他个体的内源病毒基因拷贝数也相对较低,在10~20个拷贝之间。这充分说明了中国地方猪种的遗传多样性以及中国实验用小型猪作为异种器官移植供体的可行性,同时,也为异种器官移植研究提供了很好的实验材料。
【学位授予单位】:中国农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2004
【分类号】:S852.65

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【引证文献】
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