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《中国农业大学》 2004年
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脂肪酸脱氢酶FAD2的原核表达及转基因小鼠的初步建立

王宇  
【摘要】: 哺乳动物体内能够自身合成饱和脂肪酸和单不饱和脂肪酸,但由于缺乏在第九位碳原子以上位置引入不饱和双键的去饱和酶(脱氢酶)。所以不能自身合成必需脂肪酸,需要从植物及海产品中摄取。本试验试图构建一个肌肉组织特性的ω-6脂肪酸去饱和酶(脱氢酶)真核表达载体,通过原核显微注射法把棉花的ω-6脂肪酸去饱和酶导入到小鼠体内,以小鼠为动物模型,建立动物体内的必需脂肪酸合成代谢通路。同时构建一个ω-6脂肪酸去饱和酶的原核表达载体,通过原核表达来生产ω-6脂肪酸去饱和酶。使用得到的蛋白来生产抗体用于下一步表达检测的Western印迹试验。 本实验以pEGFP-N1质粒为骨架载体,用酶切连接的方法构建一个顺序含有α-actin启动子、FAD2 cDNA、SV40 polyA加尾信号的真核表达载体,双切线性化后回收,使用回收的表达载体经原核显微注射生产转基因小鼠。采用聚合酶链式反应(PCR)和Southern印迹对阳性鼠进行检测。以PCR及酶切连接的方法构建一个含有FAD2 cDNA编码序列的原核表达载体,此蛋白的N端融合有S-tag标签,便于对表达的蛋白进行Southern印迹检测及纯化。 经受精卵原核显微注射后移植到受体母鼠,第一批移植受体后产仔34只,经PCR检测阳性为3只。 原核表达载体pETFAD2转化到表达菌株BL21(DE3)后,经IPTG诱导得到了目标蛋白。
【学位授予单位】:中国农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2004
【分类号】:Q953

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