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《中国农业大学》 2004年
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农杆菌介导小麦非组培转化方法的探讨

王成杰  
【摘要】: 根癌农杆菌是广泛应用于植物转基因的载体系统,是转化双子叶植物最常规的方法,近些年利用农杆菌介导单子叶植物的转化发展较快,在水稻、玉米上已经有比较成熟的转化方法,对于小麦来说,虽然在1997年就获得了突破,但经过近七年的发展,农杆菌介导法依然没有成为小麦基因转化的主导方法。原因之一是由于小麦组织培养难度高、品种依赖性强,其二是受体材料单一、方法单一。 本实验选取了小麦生长发育过程的两个时期:种子萌发期和开花期,系统的研究了利用农杆菌非组培转化小麦的方法。通过实验发现,在小麦穗中部第一小穗发育到授粉完成到成小半粒的时期进行花器浸沾接种,可以得到很高的GUS瞬时表达效率。在利用农杆菌转化小麦萌芽的实验中我们发现,难以转化的主要原因是由于农杆菌无法渗透至生长点部位、vir基因表达效率低。本实验通过在接种菌液中加入表面活性剂和真空渗透的方法促进了受体材料对农杆菌的吸收,并且在接种菌液中加入AS诱导vir基因的表达,并且在生长点部位检测到了GUS的瞬时表达。 通过实验,花器浸沾处理小麦的花器,染色频率可达到61%,对萌芽处理中生长点的染色频率也可达到22%,对染色材料的切片观察,也可以看到组织内层细胞的GUS染色现象。 本实验还尝试了一种新的利用潮霉素筛选小麦转化体的方法,通过筛选在692株经种子萌芽处理后再生的植株中筛选到6株明显呈阳性的植株。但对植株后来产生的新叶进行PCR鉴定时却没有扩增出特异性条带。
【学位授予单位】:中国农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2004
【分类号】:S512.1

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