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《中国农业大学》 2005年
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拟南芥扩张蛋白AtEXPA1基因的表达特性及其启动子顺式作用元件的初步分析

李宏  
【摘要】:真核基因表达的调控是分子生物学研究的热点和前沿,基因表达的程序、时间和位置在不 同层次上受不同的调节因素控制,这种控制机制不仅决定基因表达的水平,也决定基因表达的 时空顺序。 本论文通过RT-PCR的方法,研究了拟南芥扩张蛋白AtEXPA1基因的表达,发现AtEXPA1 基因在叶片中的表达量远远高于根和花中,在不同胁迫处理下,AtEXPA1基因的应答不同,其 中,干旱,低温(4℃)可以负调控基因表达。而水淹处理结果是随时间表达量增加,到5小时 为最高峰。同时发现随着盐和脱落酸处理的时间增加,AtEXPA1基因表达量下降。 在研究AtEXPA1基冈表达特性的基础上,克隆了AtEXPA1基因的启动子(翻译起始密码子 的上游897bp)。首先将启动子在不同位置缺失,得到不同长度的片段,再连接报告基因 GUS,构建了一系列缺失表达载体质粒。通过PEG介导法转化烟草原生质体。结果表明翻译起 始密码子上游287bp长的启动子活性最强。转化原生质体后,不同条件和试剂处理原生质体, 再定量检测GUS蛋白的活性,发现AtEXPA1基因的启动子上AAAG或CTTT与光调控有关, 可能与Dof转录因子结合,在启动子上游-897到-626之间存在受冷负调控的元件,在-626bp 和-282bp之间含有与NaCl调控有关的元件。-626bp和-444之间有与脱落酸负调控有关的元件。 综上所述,扩张蛋白AtEXPA1基冈的表达受时空和外界因素调控,这可能与它参与植物生 长有关,并且在其启动子上存在与调控相关的顺式作用元件。结果为进一步研究调控的机制奠 定了基础,我们下一步的工作是得到AtEXPA1基因启动子与报告基因融合子的转基因植物,进 一步确定其转录及表达特性,确认核心元件,揭示基因之间的调控关系。
【学位授予单位】:中国农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2005
【分类号】:Q943

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【引证文献】
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【参考文献】
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【共引文献】
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【同被引文献】
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