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《中国农业大学》 2005年
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贯叶连翘植株再生体系的建立及Hyp基因表达的初步研究

张娜  
【摘要】:贯叶连翘(Hypericum perforatum L.)是一种药用植物,具有抗病毒、抗抑郁等作用,金丝桃素是其中的主要活性成分。本论文以贯叶连翘为材料,进行了组织培养、再生体系的研究,建立了较为稳定的贯叶连翘植株再生体系,为利用细胞培养大规模提取金丝桃素奠定了基础。同时,在已建立的再生体系的基础上,进行了Hyp基因(贯叶连翘中金丝桃素代谢途径关键酶的基因)表达的初步研究,以期为金丝桃素的大量获取增添一条新的途径。 本论文的主要结果如下: 研究了基本培养基、生长素、分裂素对组织培养及快速繁殖的影响,建立了贯叶连翘的快繁体系。结果表明:MS培养基中添加0.1mg/LIBA和0.1mg/L6-BA最适合贯叶连翘组培苗的继代增殖;MS培养基中添加0.05~0.08mg/L的IAA可使生根率达90%以上;经过检测,贯叶连翘组培苗和愈伤组织中金丝桃素含量分别为0.769‰和0.012‰。 以贯叶连翘快速繁殖所得到的组培苗的茎段、叶片、根段为外植体,对再生体系进行了研究。结果表明:在MS(1/2N)培养基中添加0.5mg/L的TDZ或0.5~1.0mg/L的6-BA,茎段不定芽再生效果最好;在MS培养基中添加1.0~2.0mg/L的ZT比较利于叶片的分化;MS(1/2N)培养基添加0.1mg/L的TDZ或0.1mg/L的6-BA比较利于根段不定芽再生。通过本研究,建立了较为稳定的贯叶连翘植株再生体系。 将目的基因Hyp克隆到双元表达载体pBI121上,构建出pBI121-Hyp表达载体;采用农杆菌介导法及基因枪法进行Hyp基因表达的初步研究,得到6个Km抗性愈伤组织,5个Km抗性不定芽。
【学位授予单位】:中国农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2005
【分类号】:S567.19

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