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《中国农业大学》 2005年
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牛羊毛甾醇14α-脱甲基酶(CYP51)的cDNA克隆、基因结构和表达的分析

沈玥  
【摘要】:MAS是胆固醇合成途径中羊毛甾醇之后普遍存在的中间产物。在FSH诱导的卵母细胞成熟的信号转导途径中起重要作用。羊毛甾醇14α-脱甲基酶(CYP51)将羊毛甾醇转化为MAS。尽管MAS最早从牛睾丸中提取出来,但是关于牛的CYP51基因表达的研究仍不清楚。本文确定了牛CYP51的cDNA序列以及基因表达特点。牛CYP51 cDNA包含1509bp的开放阅读框,和1119bp的3'-非翻译区,基因全长17kb,含有10个外显子。启动区无TATA-框,含有几个序列高度保守的调节元件,如GC-box,cAMP反应元件(cAMP-responsive elements,CRE),甾醇调节元件(sterol regulatory element,SRE),这提示了哺乳动物上的CYP51转录调节在进化中的保守机制。长片段PCR和Southern blot实验没有发现CYP51假基因。Northern blot分析结果显示,在牛全部组织上都有一个约2.7kb的长片段CYP51 mRNA表达,仅仅在成年牛睾丸上发现一个约1.8kb的短转录本,该转录本利用了上游的多聚腺苷酸位点加尾。免疫组化实验中,使用兔抗人-CYP51抗体,发现在牛睾丸中,间质细胞CYP51蛋白表达最强。在牛卵巢中,CYP51蛋白首先出现在卵母细胞上,在原始卵泡和初级卵泡上染色较深,随卵泡增大颜色变浅。各级卵泡的颗粒细胞上CYP51蛋白呈现背景水平的染色,但是在格拉夫卵泡上,朝向卵泡腔的粒层细胞和卵丘细胞上CYP51蛋白的染色很深。CYP51蛋白在黄体上的表达量最强。上述实验说明,牛卵巢卵泡发育过程中,CYP51蛋白的表达具有阶段性和细胞特异性。
【学位授予单位】:中国农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2005
【分类号】:Q78

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