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《中国农业大学》 2005年
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利用ICSI技术生产转基因小鼠

李明  
【摘要】:在前期成功生产ICSI小鼠的基础上,本文尝试了ICSI技术生产转基因小鼠的研究。来自成年KM小鼠附睾尾的精子,使用未加抗冻剂的HEPES-CZB溶液,在液氮中冻融1次后,用于本实验。室温解冻的精子与pEGFP-N1环状DNA混匀1 min后,直接将精子头显微注射到B6D2F1小鼠卵母细胞质中,CZB溶液体外培养4天后,有39.1%(9/23)的囊胚表达GFP蛋白。另外,ICSI后6h,将部分受精的ICSI胚胎直接移植至受体小鼠的输卵管中进行体内发育。妊娠的7只受体一共产仔30只,效率为23.8%(30/126)。用Southern blot分析了其中的16只后代,结果有3只(18.8%)同时整合了GFP和Neomycin基因,而且全部来自混合线性DNA的实验组(阳性效率为33.3%,3/9),环状DNA组生产的7只后代的基因组中没有发现外源基因。同时,Souther blot分析也说明:整合到基因组上的外源基因可以通过生殖细胞遗传。本文结果说明,利用ICSI技术可以高效地生产转基因小鼠;线性化的DNA可能比环状的DNA更容易整合到小鼠的基因组上。
【学位授予单位】:中国农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2005
【分类号】:Q789

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