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《中国农业大学》 2005年
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拟南芥AtPLC5特异性抗体的制备及启动子活性的初步分析

曹志翔  
【摘要】:磷酸肌醇特异性磷脂酶C(简称PI—PLC)广泛存在于真核生物中,是真核生物细胞信号转导途径的重要组分之一。PI—PLC可特异的水解4,5—二磷酸肌醇(简称PIP-2),产生两个第二信使,即1,4,5—三磷酸肌醇(简称IP_3)和1,2—二酰基甘油(简称DAG)。PI—PLC在植物对于诸如渗透压的改变、生长素及ABA的处理、光和重力的变化、病原菌的侵染等胞外刺激的响应,及授粉等发育过程的信号转导中发挥重要的作用。Ca~(2+)是植物PI-PLC的重要调节因子。 模式植物拟南芥基因组中,存在9个推测的PI-PLC基因(其中At3g55940和At2g40116两个基因到目前为止,尚未发现cDNA序列)。已报道的PI-PLC有AtPLC1S、AtPLC1F、AtPLC2和AtPLC6。在拟南芥第V染色体的一段13kb大小的DNA序列中,存在一个与AtPLC1S和AtPLC6顺序排列的基因序列,推测其编码PI-PLC。本实验室克隆到了这个基因的全长cDNA,并命名为AtPLC5。推测的氨基酸序列分析结果表明,其具有典型的植物PI-PLC的结构,既具有1个EF-Hand,1个X和Y结构域及C2结构域。结构上类似与动物细胞中的PI-PLCζ异型体。 选择保守性较差的AtPLC5N端序列融合Flag-tag后原核表达作为抗原,通过免疫兔子,获得抗AtPLC5的多克隆抗体。该抗体只识别AtPLC5而不识别拟南芥中的其他6个PI-PLC异型体的原核表达产物。证明我们获得了AtPLC5的特异性多克隆抗体。用两相法分离质膜后,以该抗体进行的免疫印迹结果表明,AtPLC5存在于质膜组织和可溶性胞质中。即在拟南芥细胞中,AtPLC5以质膜结合蛋白和胞质可溶性蛋白两种形式存在。 在AtPLC5启动子后融合GUS报告基因,得到转基因植株后的GUS染色发现,AtPLC5启动子驱动的GUS在叶柄、花药、柱头和荚端表达;经ABA等胁迫诱导后在根部和叶脉中表达。
【学位授予单位】:中国农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2005
【分类号】:Q943.2

【引证文献】
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1 张学成;郭楠;宋晓金;;藻类基因启动子结构与功能研究进展[J];中国海洋大学学报(自然科学版);2008年03期
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1 马文文;拟南芥AtPLC5在植株对病原菌胁迫响应中的作用[D];中央民族大学;2006年
2 郭楠;钝顶节旋藻Arthrospira platensis FACHB341藻蓝蛋白基因上游序列功能研究[D];中国海洋大学;2007年
【共引文献】
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1 兰敏娟;杜娟;刘海浩;潘延云;;拟南芥磷酸肌醇特异性磷脂酶CAtPLC15亚型基因的组织表达定位[J];河北农业大学学报;2010年06期
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2 马文文;拟南芥AtPLC5在植株对病原菌胁迫响应中的作用[D];中央民族大学;2006年
3 隋镇华;玉米磷脂酰肌醇信号途径部分基因的cDNA克隆及表达分析[D];山东大学;2007年
4 刘海龙;拟南芥AtPLC3和AtPLC4参与盐胁迫应答的功能研究[D];河北农业大学;2008年
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【同被引文献】
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9 杨予涛,杨国栋,刘石娟,郭兴启,郑成超;一个光合组织特异表达强启动子的分离及功能分析[J];中国科学(C辑:生命科学);2003年04期
10 任茂智,陈全家,李丽,张锐,郭三堆;一个棉花生殖器官优势表达基因的启动子功能分析[J];中国科学C辑:生命科学;2005年01期
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2 苗红梅;小麦淀粉合成关键酶基因启动子的克隆与特征[D];河南农业大学;2004年
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2 曹克浩;水稻Osg6B启动子的序列和功能分析及大肠杆菌argE基因的克隆和对烟草的转化[D];中国农业大学;2003年
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【二级引证文献】
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3 王蕾;烟草磷脂酶C基因的表达模式和过表达NtPLC4转基因烟草提高抗病性研究[D];山东农业大学;2011年
4 刘丽;鱼腥藻PCC7120裂合酶相关基因的启动子及表达调控的研究[D];中南民族大学;2010年
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