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《中国农业大学》 2005年
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新孢子虫NcSRS2 DNA疫苗的研究

赵占中  
【摘要】:新孢子虫(Neospora caninum)是引起犬运动神经系统疾病的一种顶复合体寄生原虫,并且是世界范围内造成奶牛流产的主要原因。目前,还没有防治新孢子虫病的有效措施。一般认为疫苗免疫是预防奶牛流产和降低经济损失的可行性措施。为此,我们进行了新孢子虫NcSRS2DNA疫苗的研究。 根据新孢子虫NcSRS2基因序列,设计了一对含有Kozak序列、Pst Ⅰ和Xba Ⅰ酶切位点的引物。以含有NcSRS2基因的质粒P43为模板,利用聚合酶链反应(PCR)扩增获得NcSRS2 ORF基因片段,用Pst Ⅰ和Xba Ⅰ双酶切该片段,回收得到含有以上两个酶切位点粘端的NcSRS2 ORF基因,将此基因片段克隆至相同酶切回收后的pcDNA3.1(+)真核表达载体中,获得重组质粒PcNCSRS2。经PCR鉴定、限制性内切酶分析和克隆片段序列测定、比较,证实了重组质粒的正确性。 纯化无内毒素的重组真核表达质粒pcNcSRS2,脂质体介导方法转染哺乳动物细胞Vero。RT-PCR和western-blot方法鉴定目的基因在Vero细胞中的表达。RT-PCR和western-blot证实,先前构建的犬新孢子虫NcSRS2基因的真核表达载体能够在哺乳动物细胞中表达NcSRS2抗原,为新孢子虫NcSRS2基因DNA疫苗的研究奠定了基础。 分别用生理盐水、空质粒pcDNA3.1(+)、重组质粒pcNcSRS2、福氏完全佐剂和pcNcSRS2的混合物免疫BALB/c小鼠。ELISA、LPA、Griess试剂和半定量RT-PCR检测免疫效果。动物试验结果提示核酸疫苗诱导小鼠产生了强烈Th1型细胞免疫应答和较弱的体液反应,并且福氏完全佐剂对免疫反应有一定的促进作用。
【学位授予单位】:中国农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2005
【分类号】:S852.5

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