禽呼肠孤病毒半番鸭分离株单克隆抗体的制备

【摘要】：将在番鸭胚成纤维细胞上繁殖的两株从雏半番鸭和雏番鸭中分离的呼肠孤病毒进行了北京鸭胚成纤维细胞适应实验,适应后的病毒形态和血清学鉴定结果证实:病毒具有ARV的形态特征,与鸡源呼肠孤病毒存在抗原相关性。通过RT-PCR克隆出两株病毒的S3基因部分序列,长1104bp,与鸭、鹅分离株S3基因同源性在93%—95%之间。 选择半番鸭分离株制备单抗。北京鸭胚成纤维细胞适应毒经差速离心和蔗糖密度梯度离心法纯化,免疫8周龄小鼠,取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合。用间接ELISA方法筛选,有限稀释法三次克隆后,获得三株稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株1D_5、2D_8和3C_3。经间接ELISA检测1D_5株腹水效价为1:10~5,2G_8、3C_3株腹水效价达到1:10~7。单抗亚类鉴定结果表明:1D_5株为IgM,另两株为IgG1,三株单抗的轻链均为k型。免疫印迹实验表明,两株亚型为IgG1腹水均可和约为75KD的蛋白结合。