收藏本站
《中国农业大学》 2005年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

苜蓿中华根瘤菌耐盐分子机制的研究

魏巍  
【摘要】:苜蓿中华根瘤菌(Sinorhizobium meliloti)042BM分离自新疆的和田苜蓿,能够在含0.6mol/LNaCl的FY基本培养基中生长。通过构建Tn5-1063插入突变体库,从20,000多株突变株中得到8株盐敏感突变株W2、W4、W8、W10、W11、W15、W19和E4。耐盐性试验表明,它们都不能在含有0.4mol/L NaCl的FY培养基中生长,在0.3mol/L LiCl的FY培养基中不能生长;其中,W15在含有0.1mol/L LiCl的FY培养基上不能生长;W8,W10在含有0.2mol/L LiCl的FY培养基上不能生长。除W4外,其余突变株在相同渗透压下,对葡萄糖所造成的渗透压不敏感,只对盐造成的渗透压敏感,进一步证明它们是盐敏感而非渗透压敏感,同时对温度和pH的耐受性没有改变。 以转座子内的基因luxAB为探针进行Southern杂交,发现Tn5在这8个突变株中都只有单一拷贝的插入,表明突变株的盐敏感表型是由于转座子插入诱变造成的。对Tn5插入位点侧翼序列进行克隆、测序,得到7个与耐盐有关基因,在Genbank的登录号为AY502026-AY502032。经分析,在W2中,Tn5插入在染色体基因greA中,此基因编码细菌转录切割因子;在W4中,Tn5插入在基因omp10内部,该基因编码细菌外膜蛋白:在W11中,Tn5插入在基因relA内部,该基因编码鸟苷五磷酸合成酶;在W15中,Tn5插入在基因nuoL内部,此基因编码NADH呼吸链L亚基蛋白;在W19中,Tn5插入在编码核酸酶、解旋酶基因的内部,该基因与DNA的复制和修复有关;在W8和W10中,Tn5插入在基因SMc02759内部,该基因功能未知:在E4中,Tn5插入在基因SMc00709内部,基因功能未知。 根据W2测序结果,PCR扩增得到包含greA基因启动子的全长区段,将其克隆至穿梭载体pBBR1MCS-5上,三亲本杂交将完整的greA基因转入突变株W2中,使突变株恢复耐盐性,证明greA基因是一种与耐盐有关的转录切割因子基因。 根据W11测序结果,PCR克隆了relA基因ORF,克隆到表达载体pET—28a,并转入E.coli的relA突变株中,实验表明,该基因有效地恢复了E.coli的relA突变株在选择性培养基上的生长,而空载体的对照则无法生长,从而有力地证明了relA基因的功能。同时,结瘤实验表明,relA基因的突变导致了042BM的结瘤缺陷。PCR扩增得到包含启动子的relA基因全长,将其克隆至穿梭载体pBBR1MCS-5上。三亲本杂交将完整的relA基因转入突变株W11中,使突变株恢复耐盐性,进一步表明relA基因是一种重要的与耐盐有关的基因。 根据实验结果,我们认为,S.meliloti 042BM的耐盐性涉及到:1)全细胞调控水平;2)大分子(如DNA)代谢水平;3)某些与抗逆有关的特殊物质的合成;4)能量代谢及离子转运系统;5)维持细胞整体结构的水平,反映出多基因的网络调控机制。
【学位授予单位】:中国农业大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2005
【分类号】:S154.381

手机知网App
【引证文献】
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
1 侯晓光;盐胁迫下耐辐射全局调控蛋白IrrE在大肠杆菌及其rpoS突变株中的功能研究[D];中国农业科学院;2010年
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前2条
1 于玲,王莱,牛吉山,陈佩度;植物抗病相关基因分离策略[J];西北植物学报;2002年06期
2 王敖全;转座子在遗传分析和体内基因操作中的应用[J];微生物学通报;1985年04期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 刘立科;刘根齐;侯宁;刘春光;陈建南;张文会;樊颖伦;吴冰洁;;植物HSP70反义基因工程雄性不育表达载体的构建及鉴定[J];安徽农业科学;2008年16期
2 夏颖,吕正兵,张林普;一株耐盐细菌的鉴定及其耐盐性的初步研究[J];安徽师范大学学报(自然科学版);2001年01期
3 刘爱民;嗜盐菌的研究进展[J];安徽师范大学学报(自然科学版);2002年02期
4 吉爱玲,封青川,毕彩霞,徐存拴;HSP70单克隆抗体的制备[J];动物学报;2001年S1期
5 周钰钢;魏巍;;一株耐盐芽孢杆菌的分离与鉴定[J];北京科技大学学报;2007年S2期
6 李莉萍;陈明;唐章生;唐瞻杨;陈忠;张永德;苏世坤;曾兰;林勇;;两个尼罗罗非鱼品系Hsp70基因序列比对分析[J];大连水产学院学报;2009年S1期
7 陈观水;潘大仁;周以飞;高丽华;;三浅裂野牵牛NBS类抗病基因同源序列的克隆与分析(英文)[J];西北植物学报;2007年09期
8 赵云雷;叶武威;王俊娟;樊保香;宋丽艳;;DNA甲基化与植物抗逆性研究进展[J];西北植物学报;2009年07期
9 徐存拴,熊蕾,卢龙斗;热休克蛋白(HSPs)在胚胎发育中作用的研究进展(英文)[J];Developmental & Reproductive Biology;2000年01期
10 徐兵强,杜中军,黄俊生;RGA法克隆候选抗病基因的研究进展[J];分子植物育种;2004年03期
中国重要会议论文全文数据库 前2条
1 汪维红;于拴仓;张凤兰;余阳俊;赵岫云;张德双;;大白菜小孢子胚胎发生相关基因的克隆与表达分析[A];中国十字花科蔬菜研究进展 2009——中国园艺学会十字花科分会第七届学术研讨会论文集[C];2009年
2 赵娜娜;艾辉;王伟娜;陈冲;李神斌;王国秀;;棉铃虫HSP70基因cNDA片段的克隆与分析[A];华中昆虫研究(第6卷)[C];2010年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 郎亚军;Ectoines高效制备技术及其应用研究[D];大连海事大学;2010年
2 曾卫军;拟南芥(Arabidopsis thaliana)受胁迫因子诱导激活启动子的筛选及其应用研究[D];华东师范大学;2011年
3 刘凤楼;大麦成株叶锈病抗性基因的发掘、分子标记及遗传研究[D];西北农林科技大学;2010年
4 刘晨光;氧化还原电位调控的高浓度乙醇发酵及其机理研究[D];大连理工大学;2011年
5 杨丽红;柑橘全爪螨Panonychus citri(McGregor)对热胁迫的响应机制研究[D];西南大学;2011年
6 杜洋;相容性溶质结合蛋白OpuCC和粘蛋白结合蛋白Spr1345结构功能研究[D];中国科学技术大学;2011年
7 周正富;耐辐射异常球菌转录调节蛋白IrrE增强大肠杆菌盐胁迫抗性的全局调控机制[D];中国农业科学院;2011年
8 高建杰;苹果两个MYB转录因子基因的克隆与功能分析[D];南京农业大学;2011年
9 王忠;黄萎病菌侵染过程中野生茄子托鲁巴姆的响应机制及病程相关基因的分离与表达分析[D];南京农业大学;2009年
10 李守军;热休克对牛卵母细胞和IVP胚胎影响的研究[D];东北农业大学;2001年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 李炫丽;ms2Bnap同源序列在萝卜—芥蓝异源四倍体中的克隆及表观遗传变异分析[D];华中农业大学;2010年
2 路晓萌;Pseudomonas mediterranea G-229-21T铁载体相关基因purL的克隆及功能分析[D];山东农业大学;2010年
3 邹杨;丁酸钠对商品肉仔鸡的促生长机理和应用功效研究[D];山东农业大学;2010年
4 刘海霞;甘蓝Ogura细胞质雄性不育相关重要基因的克隆及表达特征分析[D];甘肃农业大学;2010年
5 杨晓宸;新疆阿克苏盐矿嗜盐(耐盐)微生物多样性研究[D];浙江大学;2011年
6 刘莹;类人弹性蛋白多肽基因表达条件的优化和纯化[D];西北大学;2011年
7 李岩强;克服水稻Xa32基因抗性的黄单胞杆菌Tn5-突变体的筛选及无毒基因鉴定[D];中国农业科学院;2011年
8 高树广;芝麻抗茎点枯病鉴定及抗病基因同源序列的克隆[D];郑州大学;2011年
9 李冬梅;西南稻区主要水稻育种亲本的稻瘟病抗性分析[D];四川农业大学;2011年
10 王昀;AIF、SUIVIVIN及HSP70在胃癌组织中的表达及临床意义[D];青海大学;2011年
【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 陈立;董俊兴;;耐辐射奇球菌抗辐射作用的研究进展[J];癌变.畸变.突变;2008年04期
2 唐坤甜;梁立娜;蔡亚岐;牟世芬;;高效阴离子交换色谱分离-脉冲安培检测法测定烟草料液中的糖、糖醇和醇类化合物[J];分析化学;2007年09期
3 田兵,徐步进,华跃进;耐辐射球菌清除活性氧自由基及对DNA的保护作用[J];核农学报;2004年05期
4 赵志华;岳田利;袁亚宏;王燕妮;;微波辅助提取酿酒酵母胞内海藻糖的优化技术研究[J];农产品加工(学刊);2007年03期
5 张锐;王远;孟志刚;孙国清;郭三堆;;国产转基因抗虫棉研究回顾与展望[J];中国农业科技导报;2007年04期
6 程序;美国孟山都公司作物基因工程研究开发的成就[J];世界农业;1997年09期
7 王正祥,诸葛健;酵母细胞渗透压调节与甘油代谢[J];生物工程进展;1999年05期
8 夏颖,闵航,吕正兵,张林普;耐盐细菌的渗透保护剂及其调渗机制[J];生物学通报;2002年12期
9 乐东海,高冠军,华跃进;耐辐射球菌pprI在大肠杆菌中表达增强细胞抗氧化能力的研究[J];微生物学报;2004年03期
10 李南羿;郭泽建;;转录因子OPBP1和OsiWRKY基因的超表达提高水稻的耐盐及抗病能力[J];中国水稻科学;2006年01期
中国博士学位论文全文数据库 前2条
1 何健;甜菜碱和四氢嘧啶提高Pseudomonas putida KT2440耐盐性的分子机理研究[D];南京农业大学;2005年
2 潘婕;转抗辐射总体调控基因irrE大肠杆菌的耐盐性及转录谱分析[D];中国农业科学院;2009年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前7条
1 刘军,杨金水;差异表达基因的分离策略[J];生物工程进展;1999年06期
2 杨琳,王金发;植物基因工程中的转座子标签[J];生物技术;2000年01期
3 李玉京,李子银,李振声;真核生物mRNA差显技术(Differential Display)的研究进展[J];生物技术通报;1998年05期
4 宁顺斌,王玲,宋运淳;一组基于RT-PCR的未知产物基因克隆技术及其在植物方面的应用[J];武汉植物学研究;1999年S1期
5 王敖全,陆德如;α-氨基苄青霉素抗性转座子Tn2在E.coli K12乳糖操纵子Z基因中的插入区域特异性[J];遗传学报;1979年04期
6 于玲,牛吉山,马正强,李新燕,陈佩度,刘大钧;小麦病程相关蛋白1基因的克隆及特征分析[J];遗传学报;2001年08期
7 牛吉山,于玲,马正强,陈佩度,刘大钧;小麦硫代硫酸硫转移酶类似基因的克隆与定位(英文)[J];遗传学报;2002年03期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 杜秉海,姜巨全,李小红,王磊,杨苏声;苜蓿中华根瘤菌042BMnoeA基因的克隆、敲除与功能的初步分析[J];微生物学报;2005年02期
2 喻国策;王建龙;;蓝细菌制氢研究进展[J];中国生物工程杂志;2005年12期
3 张丹;段茂华;孙军德;;耐高糖、高渗透压D-核糖高产菌株的选育及其发酵培养[J];氨基酸和生物资源;2007年01期
4 刘金林;郭毅;谭臣;陈砚;贝为成;陈焕春;;胸膜肺炎放线杆菌血清7型apxIV基因缺失突变株的构建和鉴定[J];畜牧兽医学报;2008年05期
5 刘小兰;刘剑潇;汤琳;钟华;刘智峰;傅海燕;徐祥民;曾光明;;诱变技术及其在获取生物表面活性剂高产菌中的应用[J];微生物学杂志;2008年03期
6 闵伟红;林小秋;冯琦;曲佳乐;胡耀辉;;抗蛋氨酸结构类似物突变株的筛选[J];吉林大学学报(理学版);2009年04期
7 胡森;郑孝辉;王加兰;张倩;刘文兴;王喜军;乔祖建;刘林涛;高红霞;王君伟;步志高;;马耳它布氏杆菌bp26基因缺失株的构建及鉴定[J];中国预防兽医学报;2009年08期
8 Paramesvaran J;陶源;;用两种不同的定向进化策略获得底物特异性提高的一些突变株的酶残基分布[J];中国医药工业杂志;2011年01期
9 覃玲灵;何钢;陈介南;;里氏木霉及其纤维素酶高产菌株的研究进展[J];生物技术通报;2011年05期
10 张用梅,陈宗胜;苏芸金杆菌的选育[J];遗传;1981年01期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 王艳尊;高媛媛;施巧琴;吴松刚;黄建忠;;酿酒酵母YS2-△adh2-△ald6突变株的构建及hxt1基因的过表达[A];华东六省一市生物化学与分子生物学会2009年学术交流会论文摘要汇编[C];2009年
2 田从魁;崔承彬;李长伟;;金灰青霉H4的链霉素抗性突变株新产抗肿瘤产物研究[A];中国化学会第八届天然有机化学学术研讨会论文集[C];2010年
3 田从魁;崔承彬;李长伟;;产紫青霉G59的链霉素抗性突变株新产抗真菌产物研究[A];中国化学会第八届天然有机化学学术研讨会论文集[C];2010年
4 古力孜拉;史博;热依汗古丽;吾甫尔·米吉提;;莱茵衣藻(Chlammydomonas reinhardtii)野生型和不同突变株对NaCl抗性检测分析[A];中国第六届海峡两岸菌物学学术研讨会论文集[C];2004年
5 王长军;董瑞萍;潘秀珍;王晶;唐家琪;;突变株的构建及其生物学特性研究[A];第二届全国人畜共患病学术研讨会论文集[C];2008年
6 何秀萍;刘增然;刘春秀;张博润;;酵母菌细胞自溶突变株的研究[A];首届中国青年学者微生物遗传学学术研讨会论文摘要集[C];2002年
7 贝为成;何启盖;方六荣;金梅林;周锐;陈焕春;;猪传染性胸膜肺炎放线杆菌毒素apxII基因无药物抗性标记突变株HBC~-/GFP~+的构建及其生物学特性研究[A];湖北省生物工程学会2004年年会学术报告及论文摘要汇编[C];2004年
8 张辉;肖少波;方六荣;赵骞;薛念波;陈焕春;;伪狂犬病毒UL14基因缺失影响病毒的增殖和细胞间扩散[A];中国畜牧兽医学会2006学术年会论文集(下册)[C];2006年
9 张金辉;窦颖;佘薇薇;赵耀;刘平;赵晓东;;人类偏肺病毒F蛋白糖基化位点对其体内外复制能力的影响[A];中华医学会第十五次全国儿科学术大会论文汇编(上册)[C];2010年
10 贝为成;何启盖;陈焕春;徐晓娟;洪文洲;方六荣;肖少波;宋云峰;;猪传染性胸膜肺炎放线杆菌武汉株apxⅡ~-/Amp~r突变株的构建及其安全性和保护性测定[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会成立20周年庆典暨第十次学术研讨会论文集(上)[C];2003年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 知陶;罂粟突变株新发现:强力镇痛不成瘾[N];医药经济报;2004年
2 丹正;功能性大米基尔米实现产业化生产[N];粮油市场报;2005年
3 岳梅;海正药业诱变育种使阿卡波糖产量增加[N];中国医药报;2005年
4 新欣;乙肝表面蛋白有望“预告”肝癌发生率[N];医药经济报;2004年
5 刘士敬;怎样治疗“小三阳”[N];健康报;2005年
6 记者 张月亭;TG生产菌空间育种效果显著[N];中国食品质量报;2003年
7 庄愉 编译;卡介苗 日见失效 防结核 谁能担纲[N];医药经济报;2002年
8 ;核苷类三剑客比试乙肝用药市场[N];医药经济报;2005年
9 胡建和 陈永耀 王自良 谢庆阁;新型猪瘟疫苗的研究和应用前景[N];中国畜牧报;2005年
10 中国农业大学农业部饲料工业中心 陆文清 北京中农博特生物工程有限公司 钟佳新;微生物生产菌种的退化、纯化和复壮[N];中国畜牧报;2003年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 魏巍;苜蓿中华根瘤菌耐盐分子机制的研究[D];中国农业大学;2005年
2 姜巨全;费氏中华根瘤菌RT19与耐盐有关基因的克隆和功能研究[D];中国农业大学;2005年
3 杜秉海;苜蓿中华根瘤菌042BMnoeAB基因的克隆、表达调控和功能分析[D];中国农业大学;2004年
4 罗利;苜蓿中华根瘤菌(Sinorhizobium meliloti)LysR家族转录因子的功能研究[D];中国科学院研究生院(上海生命科学研究院);2005年
5 马占强;苜蓿中华根瘤菌CCNWSX0020抗铜基因的克隆与功能验证[D];西北农林科技大学;2011年
6 夏静;猪链球菌2型fbps基因突变株的构建及其生物学特性的研究[D];华中农业大学;2011年
7 杨雪欣;木质纤维的降解及L-乳酸发酵技术的研究[D];东北林业大学;2012年
8 郭东春;多杀性巴氏杆菌兔体内差异表达基因及其突变株构建的研究[D];中国农业科学院;2012年
9 李红权;固氮斯氏假单胞菌四碳二羧酸转运基因的功能鉴定及表达调控研究[D];中国农业科学院;2005年
10 向淑利;neuB1基因失活空肠弯曲菌突变株的构建及其临床意义[D];重庆医科大学;2004年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 解利石;苜蓿中华根瘤菌042BM与耐盐有关基因的克隆和初步分析[D];中国农业大学;2004年
2 程本亮;青枯雷尔氏菌(Ralstonia solanacearum)致病力分化的研究[D];福建农林大学;2010年
3 胡琳琳;胸膜肺炎放线杆菌双组份调控系统QseB/QseC突变株构建功能研究[D];华中农业大学;2011年
4 李红;苏云金芽胞杆菌YBT1520杀虫晶体突变株的蛋白质组学分析[D];华中农业大学;2010年
5 王毅;苜蓿中华根瘤菌(Sinorhizobium meliloti)Rm1021中GntR家族转录因子功能的初步研究[D];福建农林大学;2006年
6 林榕姗;XJ96077根瘤菌株的分类地位和结瘤特性的研究[D];山东农业大学;2002年
7 张春;L-苏氨酸生产菌的选育及其发酵条件的优化[D];吉林农业大学;2011年
8 王永宝;苜蓿中华根瘤菌中参与丙二酸代谢的matPQMAB操纵子的研究[D];石河子大学;2009年
9 陈葙南;多抗逆性婴儿双歧杆菌优良菌株的选育及其微胶囊化研究[D];东北林业大学;2010年
10 克热木江·阿布都热合曼;一株产谷胱甘肽啤酒酵母菌株的选育研究[D];兰州大学;2012年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026