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《中国农业大学》 2005年
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利用转基因苜蓿生产轮状病毒可食用疫苗研究

董江丽  
【摘要】:增加抗原基因在转基因植株中的表达量是研制安全高效的轮状病毒可食用疫苗的关键,为此,我们对人A组轮状病毒VP6基因进行了密码子优化和全人工合成,合成的基因被命名为“sVP6基因”。分别将病毒来源的VP6基因和sVP6基因连接到原核表达载体pGEX-4T-1中,获得的重组质粒pGVP6和pGsVP6在大肠杆菌BL21细胞中表达的GST-VP6和GST-sVP6融合蛋白大小一致,均为65kDa;SDS-PAGE结果表明,经谷胱苷肽—琼脂糖树脂层析柱纯化、凝血酶酶切、快速蛋白液相色谱系统分离纯化后获得的sVP6蛋白在变性条件下大小为42kDa,在非变性条件下形成三聚体,大小为130kDa,这一特性和未改造的VP6蛋白相同;Western杂交结果证实单体sVP6蛋白和它的三聚体形式都能够和抗VP6的兔抗血清特异性反应,说明密码子改造的sVP6蛋白和未改造的VP6蛋白在结构和免疫反应性上是一致的。 sVP6基因和病毒来源的VP6基因分别以农杆菌介导法转化烟草(Nicotiana tabacum L),Western blot分析结果证实,转基因烟草植株表达了sVP6蛋白和VP6蛋白。在sVP6基因转化的烟草叶片中,sVP6蛋白的最高含量达到植物总可溶性蛋白的0.34%,密码子优化使得抗原蛋白的表达量提高了3.8—34倍。 在用模式植物烟草建立了高效表达抗原蛋白的平台的基础上,我们以农杆菌介导法将sVP6基因整合到紫花苜蓿(Medicago sativa L)的基因组中,在转基因苜蓿叶片中,sVP6蛋白的最高含量达到植物总可溶性蛋白的0.28%。 用10mg转基因苜蓿总可溶性蛋白(含有24μg sVP6蛋白)辅以10μg CpG免疫佐剂灌胃免疫6—8周龄的BALB/c母鼠4次,母鼠体内产生了高水平的抗VP6的血清IgG和粘膜IgA抗体。用猿轮状病毒SA-11对免疫后母鼠所生育的乳鼠攻毒,结果表明,与对照组相比,转基因苜蓿免疫的母鼠所生育的乳鼠的腹泻症状明显减轻,腹泻持续时间明显缩短,腹泻比率明显降低,在攻毒后第五天,所有的乳鼠不再腹泻。这些研究结果表明转基因苜蓿表达的轮状病毒VP6抗原免疫母鼠所产生的特异性抗体能够诱导乳鼠产生被动免疫,并为乳鼠提供异源交叉保护。本项研究为利用紫花苜蓿作为生物反应器生产轮状病毒可食用疫苗保护儿童和幼畜免受病毒性腹泻的侵染奠定了基础。
【学位授予单位】:中国农业大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2005
【分类号】:Q943.2

【引证文献】
中国期刊全文数据库 前1条
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【参考文献】
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【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
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4 杨明贵;甘蓝型油菜GRAS家族基因BnLAS的分离和功能分析[D];华中农业大学;2010年
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8 刘明;大豆子房原位转化法的建立与应用[D];大连理工大学;2011年
9 师守国;苹果APX和GLDH转化兰州百合及兰州百合抗旱性研究[D];西北农林科技大学;2011年
10 彭志强;霍乱肠毒素B亚单位在转基因番茄植物中表达的研究[D];第一军医大学;2001年
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1 张帆;dsRNA介导的番木瓜环斑病毒(PRSV)的抗病性研究[D];华中农业大学;2010年
2 周勇;草鱼出血病转基因植物疫苗表达载体的构建[D];华中农业大学;2010年
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7 康雪燕;猪传染性胃肠炎病毒S蛋白在毕赤酵母中的分泌表达及免疫原性分析[D];山东农业大学;2010年
8 胡一飞;里氏木霉纤维素酶基因的克隆及在水稻中的过表达研究[D];安徽农业大学;2010年
9 张菲菲;重组甜蛋白Brazzein和MBLⅡ基因植物表达载体构建及人参果再生体系的建立[D];甘肃农业大学;2010年
10 刘满杏;人源轮状病毒在胡萝卜中的表达[D];甘肃农业大学;2010年
【同被引文献】
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1 程娜;姚大年;张文明;王晓军;赵民安;;农杆菌介导的薰衣草愈伤组织遗传转化[J];安徽农业科学;2007年11期
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中国重要会议论文全文数据库 前2条
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中国博士学位论文全文数据库 前9条
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1 黄剑;紫花苜蓿高频再生体系的建立及农杆菌介导的甜菜碱醛脱氢酶基因转化的研究[D];甘肃农业大学;2002年
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【二级引证文献】
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中国博士学位论文全文数据库 前1条
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3 李静;玉米ABP9基因转化紫花苜蓿及其抗旱性分析[D];兰州大学;2012年
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【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
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中国重要报纸全文数据库 前10条
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6 高明;宝宝秋冬腹泻千万不可大意[N];农村医药报(汉);2008年
7 文文;严把婴幼儿“入口”卫生关[N];广东科技报;2008年
8 本报记者 郭静 实习生 贾亚敏 王诗霖 通讯员 肖金;严把“入口关”防秋季小儿腹泻[N];广东科技报;2008年
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