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《中国农业大学》 2005年
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pf40基因产物的亚细胞定位以及其功能研究

夏玉凤  
【摘要】:植物的顶端优势是顶芽完全或部分抑制侧芽生长的现象。植物的分枝和株型在很大程度上受到顶端优势的影响。随着分子生物学的发展,人们有机会应用转基因植物和突变体从不同角度对顶端优势作用机理进行深入研究。 pf40是从谷子未成熟种子cDNA文库中得到的一个克隆。在GenBank中进行blast比对,发现其与编码离子通道蛋白及一些内膜蛋白基因的核酸序列相似性很高,并且蛋白产物的氨基酸序列也很相似。不仅如此,PF40与离子通道蛋白ZIP家族在跨膜拓扑结构上极其相似。由于PF40与ZIP家族在一级结构和高级结构上均非常相似,推测PF40可能属于ZIP家族。 PSORT软件预测PF40可能定位在内膜系统,具有跨膜区域,N端有信号肽序列。为了确定PF40的亚细胞定位,构建了含pf40与报告基因gfp的融合基因的表达载体,由农杆菌介导转化烟草,PCR、Southern杂交证明外源基因整合到基因组中。用荧光显微镜观察,发现PF40的亚细胞定位是在围绕核的内质网以及胞质网格状内质网上。免疫胶体金标记实验进一步证明PF40定位在内质网。 为了确定PF40的内质网定位区段,构建了pf40的4个不同长度的缺失片段(f12、f14、f56、f36)与报告基因gfp连接的植物表达载体,由农杆菌介导转化烟草。用Confocal及荧光显微镜观察,发现N端缺失造成蛋白不能正确定位到内质网上;而N端93个氨基酸的PF40片段与GFP形成的融合蛋白F12-GFP(包含跨膜区1-3)及N端187个氨基酸的PF40片段与GFP形成的融合蛋白F14-GFP(包含跨膜区1-5)的荧光主要存在于内质网,表明PF40的内质网定位信号存在于蛋白的N端,而C端缺失对其定位没有影响,N端93个氨基酸能够引导蛋白定位在内质网。 在获得的转PBI-PF40-GFP的烟草中,只有检测到荧光的烟草才发生表型改变,在营养生长时期,植株基部出现分枝;而未检测到荧光的烟草均未出现分枝。不同植株中基因整合位置不同,各植株是由不同的转化事件产生的。作为对照的转pBI-GFP的烟草,其表型与未转基因的烟草表型一致,只有一个主茎,未出现分枝。pf40基因的表达,可能是引起烟草表型变化的原因。PF40蛋白的C-端与GFP融合后未影响pf40基因功能。 将两个植物表达载体pBI-PF40S(含pf40正义基因)和pBI-PF40AN(含pf40反义基因)用浸泡法转化拟南芥,得到转基因植株。PCR、Southern杂交证明外源基因已经遗传至下一代。转pf40正义基因的拟南芥,出现分枝的时期比野生型早,而且主要在植株基部出现分枝并且分枝数量比野生型多;转pf40反义基因的拟南芥与野生型相比,表型差异不明显。 转pf40正义基因的拟南芥与未转基因的拟南芥相比,其生长素水平明显降低,而细胞分裂素水平增高不显著,IAA/ZR比值明显降低。由此推测PF40可能是通过影响激素的量而影响转基因植物的表型。转反义基因的拟南芥与未转基因的拟南芥相比,其激素的量变化不明显,表型也与未转基因的拟南芥差异不明显。检测还发现两种转基因植物的根对IAA的敏感性没有变化。 克隆了生长素合成途径两个关键酶基因:asb(邻氨基苯甲酸合成酶β亚基基因),tsb(色氨酸合成酶β亚基基因)。检测拟南芥的AS、TSβ酶活性,发现转pf40正义基因的AS酶活性明显降低,TSβ酶活性没有改变;转反义基因的拟南芥与未转基因的拟南芥相比,AS、TSβ酶活
【学位授予单位】:中国农业大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2005
【分类号】:Q943

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【引证文献】
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1 夏玉凤;;以gfp为报告基因研究蛋白亚细胞定位[J];生物技术通报;2006年02期
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 高文;马铃薯晚疫病水平抗性相关的小G蛋白基因克隆与功能分析[D];华中农业大学;2012年
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前2条
1 许智宏;生长素的极性运输及其在植物发育调控中的作用[J];生命科学;1998年02期
2 倪迪安,许智宏;生长素的生物合成、代谢、受体和极性运输[J];植物生理学通讯;2001年04期
【共引文献】
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1 魏国芹;戴洪义;孙玉刚;梁美霞;安淼;;榅桲离体培养繁殖的研究[J];山东农业科学;2010年01期
2 刘媛媛;张春庆;吴承来;;LeJA2基因沉默表达载体导入番茄转化系统的建立[J];山东农业科学;2010年02期
3 张璐;张倩;叶宝兴;;盐胁迫下丛枝菌根真菌(AMF)对紫花苜蓿生长的影响[J];山东农业科学;2010年03期
4 吴志平;植物转基因方法在桑树上的应用[J];安徽农学通报;2003年04期
5 张宝琼;范眸天;屈云慧;于丽霞;李涵;;利用卡那霉素筛选非洲菊转基因植株的技术研究[J];安徽农学通报(上半月刊);2009年03期
6 夏珣;闫明旭;李名扬;眭顺照;;Metallothionein克隆载体及表达载体的构建及转化矮牵牛的初步研究[J];安徽农学通报(上半月刊);2009年07期
7 张霞;刘敦菊;徐立;眭顺照;李名扬;;白兰叶挥发油提取方法及工艺条件研究[J];安徽农学通报(上半月刊);2011年03期
8 张希太;;高粱DNA导入小麦“矮早8”引起后代变异的研究及SSR分析[J];安徽农学通报(上半月刊);2011年05期
9 张希太;;牛胸腺DNA导入“藳优9415”后代变异及SSR分析[J];安徽农学通报(上半月刊);2011年07期
10 刘可杰,吕淑霞,沈世华;FaDREB1基因RNAi的植物表达载体的构建[J];安徽农业科学;2005年07期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 黄月琴;薛建平;;植物抗病分子机制及抗病基因工程研究进展[A];现代农业理论与实践——安徽现代农业博士科技论坛论文集[C];2007年
2 尹钧;任江萍;李志岗;李磊;周苏玫;卫丽;宋丽;;转基因抗穗发芽小麦的获得[A];中国作物学会2007年全国作物遗传育种学术研讨会论文集[C];2007年
3 吴洁;周宇;张雪梅;阎文昭;;幽门螺杆菌热休克蛋白基因HspB-C对甘薯遗传转化的研究[A];中国核科学技术进展报告——中国核学会2009年学术年会论文集(第一卷·第8册)[C];2009年
4 齐靖;申连英;毛永民;曹柳青;兰海波;陈亮;;枣转基因研究前景展望[A];第五届全国干果生产、科研进展学术研讨会论文集[C];2007年
5 马艳芝;张玉星;;梨属植物基因组DNA提取部位对RAPD扩增的影响[A];第二届全国果树分子生物学学术研讨会论文集[C];2009年
6 来琳琳;黄婷婷;张景海;宋永波;;转基因植物生产药用蛋白研究概述[A];2007年全国生化与生物技术药物学术年会论文集[C];2007年
7 燕丽萍;夏阳;梁慧敏;王珍珍;李双云;刘翠兰;庞彩红;;紫花苜蓿转BADH基因及其后代耐盐性分析[A];中国草学会饲料生产委员会第15次饲草生产学术研讨会论文集[C];2009年
8 李芹;谭伏美;苏翠;;朝鲜蓟组织培养研究初报[A];中国热带作物学会2007年学术年会论文集[C];2007年
9 张胜利;侯书国;王会志;李彦军;;马铃薯转基因的研究进展[A];2006年中国作物学会马铃薯专业委员会年会暨学术研讨会论文集[C];2006年
10 袁鹰;刘德璞;郑培和;郝文媛;;玉米遗传转化研究进展[A];“振兴吉林老工业基地——科技工作者的历史责任”吉林省第三届科学技术学术年会论文集(下)[C];2004年
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1 李惠华;龙眼体胚发生过程中激素代谢和信号转导相关基因的克隆与表达[D];福建农林大学;2010年
2 吴春勇;富锌水稻锌营养生理特性的研究[D];浙江大学;2010年
3 刘霞;花生花针期生长素的运输与分布及相关基因表达分析[D];湖南农业大学;2010年
4 冯守千;红梨着色机理的研究[D];山东农业大学;2011年
5 马进;水稻条纹病毒(RSV)RNA3、RNA4的克隆与抗RSV转基因水稻的培育[D];山东农业大学;2011年
6 郝金凤;无载体无选择标记转基因耐贮藏甜瓜的培育[D];内蒙古大学;2010年
7 王新超;茶树越冬芽休眠与萌发相关基因的分离与表达分析[D];中国农业科学院;2011年
8 杜振国;三种水稻病毒基因沉默抑制子的鉴定和研究[D];福建农林大学;2011年
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1 张庆福;枳精氨酸脱羧酶基因(PtADC)转化烟草提高抗脱水研究[D];华中农业大学;2010年
2 魏礼玲;MYB转录因子家族相关EST干涉载体构建及遗传转化的研究[D];华中农业大学;2010年
3 张鲁军;离子束诱导普通小麦小偃81 HMW-GS 1Ax1缺失突变家系突变机制研究[D];郑州大学;2010年
4 刘无双;拟南芥种子特异表达基因启动子分析[D];山东农业大学;2010年
5 于军伟;苹果α-法尼烯合成酶基因转化番茄研究[D];山东农业大学;2010年
6 王京梅;叶籽银杏叶生雌性生殖器官发育相关基因的克隆与序列分析[D];山东农业大学;2010年
7 郭梁;甜樱桃实生后代品质性状的遗传变异及远缘杂种根癌病抗性鉴定[D];山东农业大学;2010年
8 赵云霞;马铃薯L-半乳糖-1,4-内酯脱氢酶基因在番茄中的功能分析[D];山东农业大学;2010年
9 洪艳艳;黄瓜液泡膜H~+-PPase基因的cDNA克隆与表达分析[D];山东农业大学;2010年
10 王晓菡;中国芍药品种遗传多样性SRAP分析和核心种质的初步构建[D];山东农业大学;2010年
【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 张志铭,李玉琴,田世民,朱杰华,王军,宋伯符;中国发生马铃薯晚疫病菌(Phytopthora infestans)A_2交配型[J];河北农业大学学报;1996年04期
2 杨静静;李星;李亚宁;刘大群;;小G蛋白Rab2基因参与小麦抗叶锈病反应的研究[J];华北农学报;2010年04期
3 李汝刚,伍宁丰,范云六,宋伯符;马铃薯抗晚疫病研究进展[J];中国马铃薯;1997年04期
4 宋伯符,王军,张志铭,谢从华,王胜武,王仁贵;我国马铃薯晚疫病研究的进展和建议[J];马铃薯杂志;1996年03期
5 徐建飞;辛翠花;黄三文;;利用田间抗病基因近等混合系防治马铃薯晚疫病[J];中国农业科技导报;2006年04期
6 樊俊蝶,王伟,梁爱华;Rab蛋白的结构、功能及进化[J];生命的化学;2004年01期
7 李定琴;汪萌;张家明;;玉米Rab1B基因功能的初步研究[J];生命科学研究;2006年04期
8 赵志坚,何云昆,李成云,张志铭,朱杰华,李先平,邓纪新;云南省发现马铃薯晚疫病菌(Phytophthora infestans)A2交配型[J];西南农业学报;1999年03期
9 黄泽军,黄荣峰,黄大昉;ERF转录因子及其在植物防卫反应中的作用[J];植物病理学报;2004年03期
10 王晓华;郝怀庆;王钦丽;郑茂钟;林金星;;花粉管细胞结构与生长机制研究进展[J];植物学通报;2007年03期
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 王冰林;马铃薯晚疫病水平抗性相关基因诱导表达谱及水平抗性机制初探[D];华中农业大学;2005年
【二级引证文献】
中国期刊全文数据库 前2条
1 刘琳;张富春;曾幼玲;;盐爪爪Na~+/H~+逆向转运蛋白和焦磷酸酶的亚细胞定位[J];西北植物学报;2009年03期
2 戴爱琴;常国斌;陈蓉;张颖;阴彦辉;马腾;李建超;陈国宏;;鸡Piwi蛋白的亚细胞定位研究[J];畜牧兽医学报;2013年01期
中国博士学位论文全文数据库 前4条
1 麻鹏达;基因沉默抑制子P1/HC-Pro和P25在瞬时体系中的作用[D];东北师范大学;2007年
2 郑霞;水稻OsSIZ1和OsAPX2基因的克隆和功能分析[D];中国农业科学院;2008年
3 徐海荣;高通量筛选肿瘤预防药物技术平台的建立及中医药应用研究[D];扬州大学;2010年
4 杨小玲;SeNHX1耐盐分子机制与耐盐洋桔梗培育[D];天津大学;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前7条
1 冯国兴;山羊Toll样受体2基因的克隆及过量表达[D];黑龙江八一农垦大学;2011年
2 吴静;香蕉小G蛋白基因MuArf1的组织结构分析及其在果实采后成熟中的表达研究[D];华南热带农业大学;2007年
3 吴玉娟;构建转基因细胞模型筛选小球藻糖蛋白预防肿瘤作用的研究[D];扬州大学;2007年
4 黄萍;灰绿藜NHX1基因的功能鉴定及CgNHX1与OsNHX1 C端K~+/Na~+转运调控区的功能比较[D];新疆大学;2007年
5 余红梅;拟南芥AtPRGL基因表达模式及功能的初步研究[D];华南师范大学;2007年
6 汪月凤;尤氏泰勒虫Tu88基因的特性分析及初步应用[D];中国农业科学院;2012年
7 张婷;盐藻促有丝分裂活化蛋白激酶基因DsMAPK的克隆与表达[D];大连海洋大学;2013年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前6条
1 倪迪安,王凌健,许智宏,夏镇澳;转正义和反义abp基因烟草原生质体质膜超极化特性及其培养[J];中国科学C辑:生命科学;1998年05期
2 许智宏;生长素的极性运输及其在植物发育调控中的作用[J];生命科学;1998年02期
3 陈永宁,倪迪安,王凌健,李文安,许智宏;生长素极性运输抑制剂(TIBA)对烟草离体花柄花芽分化的影响[J];实验生物学报;1997年01期
4 邢惕;周嘉槐;埃尼沃德;;生长素运输载体[J];植物生理学通讯;1988年05期
5 倪迪安,王凌健,陈永宁,许智宏,夏镇澳;生长素极性运输的抑制对叶生长发育模式的影响[J];植物学报;1996年11期
6 倪为民,陈晓亚,许智宏,薛红卫;生长素极性运输研究进展[J];植物学报;2000年03期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 孙威,高洁,李继耕,孔繁瑞;油菜叶绿体基因组雄性不育特异DNA片段的定位[J];遗传学报;1992年01期
2 张荣庆,李亚萍,黄威权,新宇;人胎盘绒毛白介素-6的定位及定量研究[J];科学通报;1998年11期
3 熊永清;GPS相位观测值中的周跳改正自动化[J];中国科学院上海天文台年刊;1998年00期
4 何大凯,张冬妮,黄星平,顾伟宏;高校实验室与设备管理机构改革浅议[J];实验室研究与探索;2000年01期
5 陈清,申洪,王雅贤,俞守义;产毒性大肠杆菌毒素在豚鼠肠道定位的免疫组织化学研究[J];中国组织化学与细胞化学杂志;2001年01期
6 刘颖,王树勋,梁应敞;自适应参数型多径时延估计方法的研究[J];高技术通讯;2001年09期
7 李银香;关于系统科学定位的思考[J];系统辩证学学报;2001年02期
8 杨传金;GPS在森林资源连续清查中的应用[J];中南林业调查规划;2001年04期
9 刘坤祥,薛黔,李名扬;阔筋膜张肌神经入肌点定位研究[J];遵义医学院学报;2001年05期
10 吴广华,胡稳才,黄丽卿,陈强;一按按钮就知船位的电子六分仪[J];集美大学学报(自然科学版);2002年04期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 薛欣;李玉梅;张立石;;TNFα信号通路与内质网应激的相关性研究[A];第十届全国抗炎免疫药理学学术会议论文集[C];2010年
2 姚树桐;桑慧;杨娜娜;康莉;田华;张颖;宋国华;秦树存;;CD36介导氧化低密度脂蛋白对巨噬细胞内质网应激的诱导作用[A];中国病理生理学会第九届全国代表大会及学术会议论文摘要[C];2010年
3 李宝宗;叶林柏;吴正辉;佘应龙;郜金荣;;乙肝病毒X蛋白在肝细胞系中激活内质网压力反应[A];湖北省暨武汉市生物化学与分子生物学学会第八届第十七次学术年会论文汇编[C];2007年
4 王旭;王绿娅;;内质网应激与高胆固醇血症[A];第四届全国血脂分析与临床学术研讨会暨第九届全国脂蛋白学术会议论文汇编[C];2008年
5 曾薇;罗志锋;齐伟;郭艳红;庞琦;张均;王宗前;牟娇;冯兵;;内质网应激在尿毒症血清致内皮细胞增殖和炎症激活中的作用[A];第十一届全国中西医结合肾脏病学术会议论文汇编[C];2010年
6 何善述;;细胞凋亡的内质网途径[A];湖北省暨武汉生物化学与分子生物学学会第八届会员代表大会和第十五次学术年会论文摘要汇编[C];2004年
7 谢加力;李俊;黄成;黄艳;章圣朋;林珍;;内质网应激与TRAIL在HSC-T6细胞凋亡中的相互关系探讨[A];中国药理学会第十一次全国学术会议专刊[C];2011年
8 褚少游;汤雪明;;大鼠粒细胞内质网的电镜细胞化学反应[A];第四次全国电子显微学会议论文摘要集[C];1986年
9 段淑荣;王君;王海涛;董力芹;王德生;张黎明;;人脑缺血后内质网伴侣蛋白GRP78和Caspase-9的表达变化[A];第十一届全国神经病学学术会议论文汇编[C];2008年
10 范小芳;龚永生;毛孙忠;黄萍;胡良冈;吴东红;陈醒言;;慢性低氧性肺动脉高压大鼠肺组织内质网应激性凋亡的变化[A];浙江省生理科学会2008年学术年会论文汇编[C];2008年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 杨旭;豫酒找准定位才能“豫满中国”[N];华夏酒报;2010年
2 王东京;政府职能如何定位[N];经济日报;2001年
3 本报记者 于新春;“借会造会”靠定位[N];国际商报;2001年
4 孙路弘麦肯特企业顾问有限公司;怎么可以不知道“定位”[N];中华工商时报;2002年
5 记者 殷曾宏;明确三个定位定好发展规划[N];运城日报;2010年
6 澄江县人民政府县长 苏绍华;找准定位科学谋划[N];玉溪日报;2010年
7 记者 李明胜 高国伟;找准优势 明确定位[N];塔城日报(汉);2011年
8 刘耀宗;外向型定位[N];山西经济日报;2001年
9 本报记者 鞠贵芹;找准定位谋跨越[N];台州日报;2011年
10 周围围;王老吉:定位造就成功[N];中国企业报;2009年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 夏玉凤;pf40基因产物的亚细胞定位以及其功能研究[D];中国农业大学;2005年
2 熊宇芳;LOX-1介导ox-LDL导致eNOS去磷酸化的新机制:内质网应激的作用[D];华中科技大学;2010年
3 高小玲;内质网应激在双氢青蒿素诱导人肝癌HepG2细胞凋亡中的作用研究[D];重庆医科大学;2010年
4 张爱梁;依达拉奉对脊髓缺血再灌注损伤保护作用的机制研究[D];南京医科大学;2011年
5 王凤;拟南芥内质网上的Profilin2蛋白结合蛋白的分离与纯化[D];中国农业大学;2005年
6 曹献英;纳米羟基磷灰石诱导肝癌细胞死亡的作用靶点及机理研究[D];武汉理工大学;2005年
7 李长菲;一种新型凋亡相关蛋白EAPF的克隆及功能研究[D];浙江大学;2005年
8 李杰;天花粉蛋白诱导人白血病细胞株K562和HL-60凋亡的信号机制的研究[D];中国科学院研究生院(上海生命科学研究院);2007年
9 陈瑶;特异性下调内质网分子伴侣GRP94对人大肠癌细胞生物学特性影响的研究[D];中国医科大学;2003年
10 叶中德;RFP13诱导细胞凋亡的调控[D];中国人民解放军军事医学科学院;2005年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 秦亮;内质网应激通过AKT-TSC-mTOR信号通路调控自噬[D];中国协和医科大学;2010年
2 侯丽丽;Bim在黑色素瘤细胞内质网应激状态中的异常调控及作用[D];安徽医科大学;2011年
3 奚丹;小分子化合物S1诱导B16细胞凋亡机制的研究[D];吉林大学;2011年
4 张宇;硫化氢对高肺血流性肺动脉高压大鼠内质网应激的调节作用[D];吉林大学;2011年
5 张英;大连会展旅游发展之探析[D];辽宁师范大学;2005年
6 杨倩之;社会转型背景下的妇联组织定位研究[D];中南大学;2006年
7 赖运生;论我国公司机会法律制度的完善[D];南昌大学;2008年
8 肖海华;泉州经济技术开发区发展战略研究[D];厦门大学;2009年
9 唐明云;基于温度场法的采空区火源定位技术研究[D];安徽理工大学;2005年
10 袁华兵;成都物流基地发展战略研究[D];电子科技大学;2005年
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