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我国副鸡嗜血杆菌新血清型的分子病原学和免疫原性的比较研究

卢冷轶  
【摘要】:2001年至2003年通过从不同地区的免疫失败鸡场分离到18株副鸡嗜血杆菌的血清型鉴定,有3株为B血清型,说明我国鸡传染性鼻炎的流行已经出现了新的特点。为解决临床上的问题,探讨免疫失败的原因,利用攻毒和血清HI抗体水平测定,观察不同A+C二价灭活疫苗二次免疫鸡群对B型分离株攻击的保护作用,结果表明:不同公司的疫苗的免疫效力有较大的差别,5个产品中有3个对A、C型保护较好,但不能对B型分离株的攻击提供有效的保护,且A、C型HI抗体阳性率、抗体滴度与对B型菌攻毒保护率无相关性,SD-1分离株可能是A型副鸡嗜血杆菌的变异株,其毒力已经有所加强。 鉴于B株流行和其他菌株毒力加强,为探求新菌株变异的分子病原学机制,本研究克隆了我国几个B型分离株和有代表性的A型株的血凝素基因,测定了其基因序列,从血凝素基因的水平上对国内的分离株进行了分析,并与已发表的标准株的序列进行了比较,结果表明,除Hp8株的基因与标准株极其类似外,SD-1、DL-1、TJ-1分离株的血凝素基因均多了一个氨基酸位点,与标准株的同源性也有所降低,进化树分析也完全属于一个新的进化支,说明我国的鸡传染性鼻炎的流行菌株在分子特性上出现了新特点,而多出的一个氨基酸位点,也极有可能是抗原性和菌株变化的重要原因。 为更好地控制B型菌的感染,为三价疫苗的研制提供依据,通过攻毒保护试验和HI抗体测定对我国不同地区的B型副鸡嗜血杆菌分离株进行了免疫原性的比较。分析结果表明:不同地区的分离株免疫原性存在一定的差异,在目前得到的分离株中,TJ-1免疫鸡对TJ-1和DL-1株的保护作用可达到90%和91.7%,对BJ-1株的保护率为63.6%,具有相对较好的保护作用,目前可以作为疫苗株使用。根据免疫原性的比较结果,选择抗原性较好的B型分离株TJ-1参与制备了鸡传染性鼻炎三价油乳剂灭活疫苗,并应用3批鸡传染性鼻炎三价油乳剂灭活疫苗进行了安全性和免疫效力检验,结果发现,超剂量注射疫苗鸡只食欲、精神未见异常,2周后观察,注射部位从外部观察未发现明显异常和病变。用该疫苗免疫后的鸡只对A型强致病力菌株的攻击保护率可达100%,对B型菌株的攻击保护率为94.4%,对C型高致病力菌株的攻击保护率为93.3%。采用阻断ELISA、HI和SPA对鸡群的抗体水平的评估表明该疫苗可激发产生较高的抗体水平。所有结果均表明,该疫苗具有良好的安全性和近期免疫效力。


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