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《中国农业大学》 2005年
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白头翁汤有效成分对内毒素诱导的RIMEC分泌功能及黏附分子表达失调的影响

段慧琴  
【摘要】:本试验以体外培养的肠黏膜微血管内皮细胞(rat intestinal microvascular endothelial cell, RIMEC)为模型,探讨了细菌脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)对RIMEC分泌功能和黏附分子表达的影响,并观察了白头翁汤中主要有效成分(小檗碱、七叶亭、白头翁素)对LPS诱导的RIMEC分泌功能及黏附分子(Cell adhesion molecules, CAMs)表达失调的影响,以期从调节微血管内皮细胞功能方面,从细胞水平进一步揭示白头翁汤的抗炎机制。 1.利用组织块贴壁法从大鼠空肠分离培养了RIMEC,并采用第Ⅷ因子相关抗原表达和硝酸银染色以及形态学观察等方法进行了鉴定,证实RIMEC已分离培养成功,为研究RIMEC相关的病理生理反应奠定了基础。 2.本实验在成功分离培养RIMEC的基础上,观察了浓度为1μg/ml、5μg/ml和10μg/ml LPS在不同时间点对RIMEC泌功能及其CAMs表达的影响。结果LPS刺激后上清液中NO、ET-1和sICAM-1的水平及E-selectin表达均显著高于对照组(p0.05)(NO测定采用还原酶法,ET-1、sICAM-1测定利用ELISA法,E-selectin表达检测利用免疫组化法),本试验有助于进一步揭示LPS在肠道大肠杆菌病发生发展过程中的作用机制。 3.观察了小檗碱、七叶亭、白头翁素对LPS诱导的NO、ET-1和sICAM-1的水平及E-selectin表增加的影响。结果如下: ① 10μg/mL小檗碱单独作用12h后,ET-I水平显著高于对照组(p0.01)、NO和sICAM-1水平及E-selectin表达,与对照组比较均无显著差异;10μg/mL、5μg/mL、lμg/mL的小檗碱预孵2h后用1μg/mL LPS刺激12h,ET-I水平均显著高于对照组(p0.01),与LPS刺激组比较均无显著差异,NO和sICAM-1水平及E-selectin表达均极显著低于LPS组(p0.01),与对照组比较无显著差异。 ② 10μg/mL白头翁素单独作用12h后,ET-I、NO和sICAM-1水平及E-selectin表达与对照组比较均无显著差异;10μg/mL、5μg/mL、1μg/mL的白头翁素预孵2h后用1μg/mL LPS刺激12h,白头翁素组NO水平均极显著低于LPS组(p0.01),1μg/ml白头翁素组ET-1水平显著低于LPS组(p0.05),5μg/ml,10μg/ml白头翁素组ET-1水平极显著低于LPS组(p0.01),1μg/ml白头翁素组sICAM-1水平与LPS组比较无差异,5μg/ml、10μg/ml白头翁素组sICAM-1水平极显著低于LPS组(p0.01)、10μg/ml白头翁素组E-selectin表达极显著低于LPS组(p0.01)。 ③ 10μg/mL七叶亭单独作用12h后,ET-I和NO水平与对照组比较均无显著差异、sICAM-1水平显著高于对照组(p0.05);10μg/mL、5μg/mL、1μg/mL的七叶亭预孵2h后用1μg/mL LPS刺激12h,ET-I水平均显著高于对照组(p0.01),与LPS刺激组比较均无显著差异、NO和sICAM-1水平均极显著低于LPS组(p0.01),与对照组比较无显著差异。 本试验表明白头翁素对LPS诱导的NO、ET-1、sICAM-1分泌增加及细胞表面ICAM-1和E-selectin表达均有显著的抑制作用,小檗碱主要是下调LPS诱导的ICAM-1和E-selectin的表达,七叶亭主要是下调LPS诱导的NO分泌增加和ICAM-1表达增强。结果提示下调LPS诱导的RIMEC NO和ET-1分泌增加及ICAM-1、E-selectin表达增强可能是白头翁汤实现其抗炎作用的机制之一。
【学位授予单位】:中国农业大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2005
【分类号】:S853.7

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