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《中国农业大学》 2005年
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PRRSV对猪肺泡巨噬细胞天然免疫功能影响的分子机制

蒲静  
【摘要】:猪繁殖与呼吸综合征是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)引起的以母猪繁殖障碍和仔猪呼吸道疾病为特征的病毒性疾病。本研究通过分析PRRSV感染后肺泡巨噬细胞(PAM)的模式识别受体、干扰素激活相关基因及细胞因子的mRNA转录动态,从天然免疫的角度系统分析了PRRSV感染对PAM免疫功能的影响。 用RT-PCR技术从PAM中扩增和克隆了猪模式识别受体(PRR)CD16、CD18、TLR2、TLR4和SR,天然免疫功能相关分子Nramp1、SP-A,干扰素激活相关基因(ISG)OAS、PKR、Mx1,以及猪细胞因子IFN-α和IL-6基因,经测序鉴定后,利用反向PCR技术构建了相应的缺失cDNA竞争分子。通过竞争PCR方法,建立了各种分子的标准竞争曲线和直线回归方程。 用竞争定量RT-PCR技术检测PRRSV感染后PAM模式识别受体CD16、CD18、SR、TLR2、TLR4和天然免疫功能相关分子SP-A、Nramp1 mRNA的转录动态。体外感染试验结果显示,PAM的PRR和SP-A、Nramp1的mRNA均在感染后4h急剧下降到最低转录水平,随后逐渐升高,到感染后48h全部恢复正常,表明各功能分子在PRRSV感染早期mRNA的转录受到抑制,造成PAM天然免疫功能下降。体内感染试验结果表明,在PRRSV感染前期(3~14天),肺泡巨噬细胞PRR和SP-A、Nramp1 mRNA转录受到不同程度的抑制,说明PRRSV感染早期可导致PAM天然免疫功能下降;在感染后期(28~42天),各功能分子的mRNA转录水平恢复正常或表达上调,提示PAM天然免疫功能有所恢复并提高。 采用竞争定量RT-PCR检测PRRSV感染后PAM的干扰素激活相关基因OAS、PKR、Mx1的mRNA转录动态。体外感染试验结果显示,OAS、PKR、Mx1 mRNA转录水平始终低于对照组,表明在PRRSV感染过程中干扰素激活相关基因的转录始终受到抑制,导致PAM的抗病毒能力降低;体内感染试验结果显示,ISG在接种后3~7天没有明显变化,在接种后14天mRNA转录水平迅速下降到最低点,表明PRRSV感染后2周ISG基因转录受到严重抑制,导致PAM抗病毒功能下降;到接种后28~42天,ISG恢复正常并略有升高。 利用竞争定量RT-PCR检测PRRSV感染后PAM中细胞因子IFN-α、IL-6、IL-1β、TNF-α、IL-8、MCP-1、IL-10、IL-12p40、IL-18、GM-CSF及IEN-γ的mRNA转录动态,同时,采用定量ELISA检测PAM培养上清中IFN-α、IL-6、IL-10和IL-12的蛋白浓度。体外试验结果表明,在感染早期促炎性细胞因子表达上调,各细胞因子的上调幅度和形成转录高峰时间有所不同,表明PRRSV体外感染可引起PAM的炎症反应。体内试验结果表明,在感染早期(3~7天),促炎性细胞因子IFN-α、IL-6、IL-1β、TNF-α、IL-8等mRNA转录有不同程度的下降;在感染中期(14天),IL-10的mRNA转录持续升高,而Th1型细胞因子IL-12、IL-18和GM-CSF转录下调,表明PRRSV感染后PAM的免疫调节功能受损,引起免疫抑制;在感染后期(28~42天),IFN-α、IL-6、IL-12、IL-18和IFN-γ等转录升高,表明PAM免疫调节功能有所恢复。对PAM培养上清中IFN-α、IL-6、IL-10和IL-12的蛋白检测结果表明这些因子的蛋白表达变化与mRNA转录动态基本一致。
【学位授予单位】:中国农业大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2005
【分类号】:S852.4

【引证文献】
中国期刊全文数据库 前5条
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6 梁大明;;关于防控猪繁殖与呼吸综合征的反思[A];中国畜牧兽医学会养猪学分会2009年学术年会“回盛生物”杯全国养猪技术论文大赛论文集[C];2009年
7 李俊;王金宝;张祯涛;周顺;;猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)分子生物学研究进展[A];山东畜牧兽医学会养猪专业委员会第一届学术研讨会论文集[C];2007年
8 周婷;曾三杰;文心田;肖驰;;猪繁殖与呼吸综合征病毒重庆株的分离鉴定[A];第六届全国会员代表大学暨第11次学术研讨会论文集(上)[C];2005年
9 赵永刚;王志亮;王君玮;萨仁高娃;陈继明;童光志;;我国猪繁殖与呼吸综合征的流行现状与研究现状[A];中国畜牧兽医学会2006学术年会论文集(下册)[C];2006年
10 李志杰;丁壮;高恩鹏;;猪繁殖与呼吸综合征病毒JL/07/SW株的分离鉴定及变异分析[A];中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第三届猪病防控学术研讨会论文集[C];2008年
中国重要报纸全文数据库 前6条
1 邹争春;我国科学家发现创伤感染免疫新机制[N];中国医药报;2010年
2 通讯员 邹争春 记者 赵雪;我科学家首次发现创伤感染免疫新机制[N];科技日报;2010年
3 记者 谭嘉 通讯员 邹争春;体内常驻细菌及其毒素是导致创伤后感染要因[N];健康报;2010年
4 刘霞;植物的抵抗力可由基因“传递”[N];科技日报;2010年
5 壳寡糖与人类未来健康工程专家委员会委员、主任医师 李玲如;壳寡糖的免疫调节之旅[N];保健时报;2010年
6 廖洋 建高;水产养殖研究进入基因组时代[N];科技日报;2010年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 蒲静;PRRSV对猪肺泡巨噬细胞天然免疫功能影响的分子机制[D];中国农业大学;2005年
2 磨美兰;PRRSV感染对猪肺泡巨噬细胞外源性抗原加工递呈功能的影响[D];中国农业大学;2005年
3 杨嘉龙;栉孔扇贝关键模式识别受体介导的免疫应答机制研究[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2011年
4 高志强;猪繁殖与呼吸综合征病毒全基因组分子遗传特征分析[D];中国农业大学;2003年
5 仇华吉;猪繁殖与呼吸综合征病毒CH-la株基因组解析及其囊膜蛋白结构与功能分析[D];东北农业大学;2001年
6 薛强;猪繁殖与呼吸综合征病毒双基因多组合DNA疫苗的构建及其免疫效力评价[D];中国农业科学院;2003年
7 周艳君;猪繁殖与呼吸综合征病毒结构蛋白单克隆抗体的制备及其抗原表位的鉴定[D];东北农业大学;2005年
8 唐勇;猪伪狂犬病鉴别诊断研究与猪繁殖与呼吸综合征病毒基因组序列的测定[D];华中农业大学;2004年
9 田志军;表达PRRSV GP5蛋白的重组伪狂犬病毒的构建及其免疫效力的研究[D];东北农业大学;2005年
10 冯凯;18个重要炎症相关基因SNP分析及TLR4基因5’区SNP功能研究[D];第三军医大学;2004年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 邵蕾;猪繁殖与呼吸综合征病毒单克隆抗体的制备及初步应用[D];吉林农业大学;2007年
2 周盛华;快速检测猪繁殖与呼吸综合征病毒免疫胶体金诊断试纸条的研制[D];东北农业大学;2008年
3 袁婧;猪繁殖与呼吸综合征直接免疫荧光诊断方法的建立及其应用[D];东北农业大学;2008年
4 郭海龙;猪繁殖与呼吸综合征病毒感染猪体内细胞因子与病毒的定量检测[D];中国农业科学院;2002年
5 安同庆;利用噬菌体展示技术鉴定猪繁殖与呼吸综合征病毒抗原表位[D];中国农业科学院;2004年
6 刘伍梅;PRRSV感染Marc-145细胞的病毒形态发生学、细胞超微结构变化及细胞凋亡的研究[D];四川农业大学;2005年
7 鲁韦韦;猪繁殖与呼吸综合征病毒实时荧光RT-PCR检测方法的建立[D];南京农业大学;2008年
8 王娜;猪繁殖与呼吸综合征病毒感染细胞的差异蛋白组学研究[D];福建农林大学;2009年
9 崔盟;猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体的间接ELISA检测方法的建立及初步应用[D];扬州大学;2009年
10 许立华;猪繁殖与呼吸综合征病毒N基因及其原核表达产物的检测应用[D];南京农业大学;2003年
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