收藏本站
《中国农业大学》 2005年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

植物次生物质对棉铃虫细胞色素P450s的诱导及CYP6B6基因的克隆与表达

刘小宁  
【摘要】:本论文以棉铃虫Heficoverpa armigera(Hubner)为对象,研究了槲皮素、2-十三烷酮、单宁酸等植物次生物质组合诱导对棉铃虫细胞色素P450s含量和活性的影响。明确了槲皮素和2-十三烷酮对棉铃虫P450s活性诱导的时间效应和剂量效应、槲皮素对棉铃虫不同组织总mRNA含量的影响以及植物次生物质对CYP686基因表达量的影响。对棉铃虫P450 CYP686基因进行了克隆和序列分析,并在原核细胞中进行了表达。 采用饲料添加法,用2-十三烷酮和槲皮素处理棉铃虫6龄幼虫48h后,两种植物次生物质对中肠P450s含量诱导具有累加效应,而对脂肪体P450s含量诱导表现为累加或拮抗作用。 利用毛细管气相色谱法灵敏度高,样品用量少,分辨率高的特点,建立了一个用于检测棉铃虫幼虫中肠和脂肪体细胞色素P450s O-脱甲基活性的小型反应体系(875μL),其中含0.1 mol/L,pH 7.8的Tris-HCl缓冲溶液,0.5μmol NADPH,7.5μmol MgCl_2,0.085% BSA,0.157mmol对硝基苯甲醚及2.08mg/mL酶液。 槲皮素和2-十三烷酮对棉铃虫中肠和脂肪体P450s O-脱甲基活性具有明显的诱导作用。组合诱导也得到相似的结果。当两种植物次生物质浓度为0.5 mg/mL时,对中肠和脂肪体P450s O-脱甲基活性诱导倍数均达到最大,分别为2.63和3.88倍。虽然两种植物次生物质对活性的诱导不存在互作增效关系,但是随浓度增加其活性有增加的趋势。 诱导的时间和剂量效应表明,当槲皮紊浓度为0.1 mg/mL时,中肠利脂肪体P450s的诱导活性随时间是先降低后增强,到48h达到最大(分别为对照的2.03倍和2.4倍),然后降低到正常水平;而槲皮素浓度为0.5 mg/mL时,诱导活性仅有一个高峰,发生在48 h,诱导倍数分别是2.8和2.79。2-十三烷酮对P450s诱导效应与槲皮素不同,2-十三烷酮对脂肪体P450s活性诱导与对照相比从4-48 h均为诱导增强,48 h后表现为诱导抑制。除2-十三烷酮浓度为0.1 mg/mL,处理时间为4 h和36 h时对中肠P450s活性为诱导增加之外,其余各处理时间点的活性和对照相比差异不显著。 研究了槲皮素对棉铃虫中肠利脂肪体总mRNA比含量影响的时间效应,结果表明在处理5 h、24 h和36 h时,槲皮素对中肠总mRNA含量具有明显的诱导增加作用。脂肪体总mRNA的量诱导组与对照相比没有显著差异。 用半定量RT-PCR检测植物次生物质对CYP686基因表达的影响,表明槲皮素对中肠和脂肪体的CYP686基因的表达量、单宁酸对脂肪体CYP686基因表达量没有明显的诱导作用。单宁酸对中肠CYP686基因的表达量具有明显的诱导作用。2-十三烷酮对中肠和脂肪体两个组织部位的CYP686基因表达量均具有明显的诱导作用。 依据已发表的棉铃虫CYP686基因设计2对引物,用RT-PCR的方法从棉铃虫中肠和脂肪体中分别克隆出P450的全长基因,生物信息学分析结果表明该基因为CYP686基因(注册号 AY950636和AY950637)。
【学位授予单位】:中国农业大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2005
【分类号】:S433.4;Q785

手机知网App
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 周国理,黄炯烈,詹希美;昆虫CYP6家族与抗药性及其转录调控[J];寄生虫与医学昆虫学报;2000年04期
2 于彩虹,高希武,郑炳宗;2-十三烷酮对棉铃虫细胞色素P450的诱导作用[J];昆虫学报;2002年01期
3 姚洪渭,叶恭银,程家安;寄主植物影响害虫药剂敏感性的研究进展[J];昆虫学报;2002年02期
4 于彩虹,高希武;棉铃虫细胞色素P450 CO差光谱的测定[J];昆虫学报;2005年02期
5 高希武,赵颖,王旭,董向丽,郑炳宗;杀虫药剂和植物次生性物质对棉铃虫羧酸酯酶的诱导作用[J];昆虫学报;1998年S1期
6 董向丽,高希武,郑炳宗;植物次生物质诱导作用对杀虫药剂毒力影响研究[J];昆虫学报;1998年S1期
7 邱星辉,冷欣夫;昆虫细胞色素P450基因的表达与调控及P450介导抗性的分子机制[J];农药学学报;1999年01期
8 高希武,董向丽,赵颖,郑炳宗;槲皮素对棉铃虫体内一些解毒酶系和靶标酶的诱导作用[J];农药学学报;1999年03期
9 郑炳宗;高希武;王政国;梁同庭;曹本钧;高洪;;瓜-棉蚜对有机磷及氨基甲酸酯杀虫剂抗性机制研究[J];植物保护学报;1989年02期
10 王琛柱;;棉酚和单宁酸对棉铃虫幼虫生长和消化生理的影响[J];植物保护学报;1997年01期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 吴丛梅,黄天华,吴德生,谢庆东,徐小虎;pEgr-P16重组质粒的构建及其在EC9706细胞中的辐射诱导表达[J];癌变.畸变.突变;2003年04期
2 阮烨,王晓云,谢庆东,黄天华;外源DNA转染精子的实验研究[J];癌变.畸变.突变;2004年03期
3 欧阳松应,徐寿水,沈文律,周传香,李春艳,欧阳红生;人PTEN基因表达载体的构建及其在U_(251)细胞中的表达[J];癌变.畸变.突变;2004年04期
4 陈传德,吴中亮,陈家堃;乙酸镍诱导的人支气管上皮细胞系转化细胞基因组不稳定性分析[J];癌变.畸变.突变;2005年01期
5 熊小芳,黄天华,谢庆东,王晓梅,陈桂兰;精子携带的HBV DNA在小鼠早期胚胎中的复制与表达[J];癌变.畸变.突变;2005年03期
6 吕慧贞;张建朋;陈新;刘静;张元湖;;一种改进的鸭梨总RNA提取方法[J];山东农业科学;2007年05期
7 张秀华;王文锋;;微卫星DNA聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染技术的探讨[J];山东农业科学;2009年06期
8 边文范;王艳芹;张昌爱;田叶;曹德宾;李国生;姚利;袁长波;;气相色谱测定沼气成分的优化方法研究[J];山东农业科学;2011年04期
9 张学民,王金生;碱裂解法提取质粒DNA方法的改进[J];安徽大学学报(自然科学版);2000年04期
10 张满中;;苯绕蒽酮的高效液相色谱分析[J];安徽化工;2009年04期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 黄家强;卜夏;李卓娅;龚非力;;人TNFα分泌型、跨膜型和跨膜稳定型重组体的构建表达及杀瘤效应[A];生命科学与生物技术:中国科协第三届青年学术年会论文集[C];1998年
2 郭昱嵩;王中铎;刘楚吾;陈志明;刘筠;;勒氏笛鲷(Lutjanus russellii)线粒体DNA全序列的测定与分析[A];中国海洋学会2007年学术年会论文集(下册)[C];2007年
3 樊继德;孔庆国;张梅;于喜艳;;子房注射法获得转基因甜瓜植株[A];中国园艺学会第七届青年学术讨论会论文集[C];2006年
4 黄诚;卢丽明;刘国平;;内标法和外标法测定血液中乙醇含量的比较分析[A];2010广东省预防医学会学术年会资料汇编[C];2010年
5 李俊华;吴少庭;翁亚彪;甘燕;刘洪波;刘茂铃;张仁利;高世同;黄达娜;耿艺介;;弓形虫表面抗原SAG2基因体外扩增、克隆及在Mycobacterium smegmatis mc2155中的表达[A];全国寄生虫学与热带医学学术研讨会论文集[C];2006年
6 李俊华;吴少庭;翁亚彪;甘燕;刘洪波;刘茂铃;张仁利;高世同;黄达娜;耿艺介;;弓形虫致密颗粒蛋白GRA4基因体外扩增、克隆及在Mycobacterium smegmatis mc2155中的表达[A];全国寄生虫学与热带医学学术研讨会论文集[C];2006年
7 徐爱平;王富华;杜应琼;;高效液相色谱法测定粮食和蔬菜中的烯虫酯[A];首届中国中西部地区色谱学术交流会暨仪器展览会论文集[C];2006年
8 巨雪霞;刘茵;王琴;李丽丽;;高效液相色谱法测定3,5-二叔丁基-二羟基苯甲酸[A];甘肃省化学会第二十七届年会暨第九届甘肃省中学化学教学经验交流会论文摘要集[C];2011年
9 何小波;钟志京;刘秀华;杨宇川;;顶空固相微萃取-气相色谱联用技术测定饮用水中氯仿、四氯化碳[A];2010中国环境科学学会学术年会论文集(第三卷)[C];2010年
10 唐小江;马争;黄建勋;黄汉林;李来玉;牛侨;;正己烷引起红细胞膜血影蛋白交联的研究[A];中国环境诱变剂学会抗诱变剂和抗癌剂专业委员会第三次全国学术会议、中国毒理学会生化与分子毒理专业委员会第五届学术交流会、贵州省环境诱变剂学会成立大会暨首届学术交流会论文集[C];2004年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 毕明娟;B型烟粉虱诱导的烟草防御信号途径及B型烟粉虱和烟蚜对烟草防御反应的生理适应性差异[D];山东农业大学;2010年
2 王东;棉铃虫(Helicoverpa armigera)对多杀菌素的抗性机理及多杀菌素对其胁迫效应研究[D];山东农业大学;2010年
3 梁勇;白念珠菌高铁还原酶基因表达调控及Aft2p转录因子的功能研究[D];南开大学;2010年
4 于双妮;胰腺癌差异表达microRNAs的鉴定及功能研究[D];北京协和医学院;2008年
5 王飞;亚微米分子筛催化乙醇脱水制乙烯:失活、再生及动力学[D];华东理工大学;2011年
6 魏永刚;晶格氧部分氧化甲烷制取合成气的基础研究[D];昆明理工大学;2008年
7 黎继烈;金橘活性物质提取及生物活性研究[D];中南林业科技大学;2007年
8 陈其华;前癃通胶囊治疗良性前列腺增生症临床观察及其对间质细胞作用的实验研究[D];湖南中医药大学;2011年
9 马丽菊;云南宣威肺癌细胞系侧群细胞特征分析[D];昆明医学院;2011年
10 梁为;瑞香狼毒杀螨成分鉴定及其对草莓螨害的影响[D];北京林业大学;2011年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 吕桂贞;杀虫剂混配对小菜蛾毒力联合作用及生化机理研究[D];华中农业大学;2010年
2 林凤敏;不同棉花品种(系)对绿盲蝽的抗生性研究[D];华中农业大学;2010年
3 朱晓娟;重组免疫毒素抗c-Met/PE38KDEL的构建、表达、纯化及初步鉴定[D];南京医科大学;2009年
4 钱静;携带Apoptin双调控溶瘤腺病毒治疗肝癌的研究[D];浙江理工大学;2010年
5 辛宁;PDX-1真核表达载体构建及其在大鼠骨髓间充质干细胞中的表达[D];郑州大学;2010年
6 李明;2-氯-5-氯甲基吡啶合成工艺的改进[D];郑州大学;2010年
7 陆玉成;AMF基因在食管鳞癌细胞株中的表达及功能初步分析[D];郑州大学;2010年
8 吕文兵;杜氏盐藻异养转化藻株的鉴定及初步功能分析[D];郑州大学;2010年
9 李静;父源性HLA-A基因与子痫前期相关性研究[D];郑州大学;2010年
10 张燕松;肾移植术后患者PBMCs中NF-κB的活性和TNF-α mRNA的表达研究[D];郑州大学;2010年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 赵善欢,陈文奎,张兴,潘文亮,张金玉;杀虫剂田间毒理研究的新进展[J];华南农业大学学报;1991年04期
2 谭维嘉,赵焕香;取食不同寄主植物的棉铃虫对溴氰菊酯敏感性的变化[J];昆虫学报;1990年02期
3 高希武;寄主植物对棉蚜羧酸酯酶活性的影响[J];昆虫学报;1992年03期
4 高希武,董向丽,郑炳宗,陈青;棉铃虫的谷胱甘肽S-转移酶(GSTs):杀虫药剂和植物次生性物质的诱导与GSTs对杀虫药剂的代谢[J];昆虫学报;1997年02期
5 冯国蕾,赵章武,李梅,何凤琴,金莹,李宗清,杜善学;不同寄主植物与棉蚜酯酶活性的关系[J];昆虫学报;2001年03期
6 高希武,赵颖,王旭,董向丽,郑炳宗;杀虫药剂和植物次生性物质对棉铃虫羧酸酯酶的诱导作用[J];昆虫学报;1998年S1期
7 董向丽,高希武,郑炳宗;植物次生物质诱导作用对杀虫药剂毒力影响研究[J];昆虫学报;1998年S1期
8 邱星辉,冷欣夫;昆虫细胞色素P450研究:P450酶系的可诱导性[J];昆虫知识;1999年01期
9 吴峻,庄佩君,唐振华,潘华,吴祥甫;中国棉铃虫P450家族的CYP6B2基因与抗药性关系[J];生物化学与生物物理学报;1999年01期
10 邱星辉,冷欣夫;细胞色素P450的多样性[J];生命的化学(中国生物化学会通讯);1997年06期
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 姚洪渭;白背飞虱抗药性机理的研究——药剂敏感性变化的生物学与生理生化基础[D];浙江大学;2001年
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 陈南云;刘思平;;可爱的马蜂[J];大自然;1981年04期
2 戴万德,唐立业;1992年棉铃虫爆发成灾原因及今后减灾对策[J];山东气象;1993年01期
3 陈荣海;沿江棉区棉铃虫可持续治理的认识与实践[J];科学中国人;1999年11期
4 张建华,李迎春;新疆棉铃虫越冬气候指标的分析[J];气象;2000年08期
5 杨燕涛,张洪进,杨慕林,朱明华,王东华;江苏沿江棉区棉铃虫世代增殖规律及主害代预测技术[J];昆虫知识;2001年01期
6 张建华,李迎春;新疆棉铃虫越冬的三个气候阶段[J];中国农业气象;2001年01期
7 陈凤菊,高希武,雷明庆,郑炳宗;单宁酸对棉铃虫谷胱甘肽S-转移酶的影响[J];昆虫学报;2003年06期
8 盛承发;1992年华北棉区北部棉铃虫出现不完全第五代[J];昆虫知识;1993年01期
9 华尧楠,王厚振,肖云丽;气象因素对棉铃虫种群数量变动的影响[J];中国农业气象;1996年01期
10 沈进松;苏北盐垦区棉铃虫发生特点初探[J];昆虫知识;1997年02期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 陈齐信;;生物农药Bt防治棉铃虫效果的研究[A];棉花重大病虫统一防治的理论与实践[C];2004年
2 刘定忠;王荣龙;余昌喜;;赣北棉铃虫抗药性及其治理对策的研究[A];棉花重大病虫统一防治的理论与实践[C];2004年
3 李权生;朱世华;范爱华;罗国平;;望江县棉花棉铃虫发生特点、爆发因子及防治对策[A];棉花重大病虫统一防治的理论与实践[C];2004年
4 梁光浙;郑大宽;;江西棉铃虫世代划分的研究[A];棉花重大病虫统一防治的理论与实践[C];2004年
5 董利霞;芮昌辉;谭晓伟;;棉铃虫对甲氨基阿维菌素苯甲酸盐的抗药性风险及交互抗性研究[A];公共植保与绿色防控[C];2010年
6 ;棉铃虫防治工作总结[A];植病、昆虫学会通讯3[C];2002年
7 王增君;张福远;韦国庆;宋宪玉;张青;谢来泉;;棉铃虫抗药性监测及综合治理技术研究[A];棉花重大病虫统一防治的理论与实践[C];2004年
8 杨秋萍;何永垠;李瑛;丁志宽;;苏北沿海棉区棉铃虫抗药性监测及治理技术初探[A];棉花重大病虫统一防治的理论与实践[C];2004年
9 刘爽;姚平;宋毅;许四元;李骏;刘烈刚;;槲皮素酒精性肝损伤的防护作用及其与Ⅰ型血红素氧化酶关系的研究[A];中国营养学会第十次全国营养学术会议公共营养分会论文集[C];2008年
10 魏国树;张青文;蔡青年;周明牂;;灯光诱蛾量与棉铃虫自然种群数量的关系及影响因子分析[A];走向21世纪的中国昆虫学——中国昆虫学会2000年学术年会论文集[C];2000年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 省植保总站测报科 席建英;第四代棉铃虫要来了[N];河北科技报;2006年
2 记者 高燕;防治棉铃虫措施要到位[N];新疆科技报(汉);2007年
3 耿挺;让棉铃虫失去解毒能力[N];大众科技报;2007年
4 沈瑞;棉铃虫对菊酯类农药的抗性及对策[N];瓜果蔬菜报.农业信息周刊;2007年
5 徐生海;玉米棉铃虫进入危害高峰期[N];武威日报;2007年
6 通讯员 尚松华;精河县全力防治棉铃虫[N];博尔塔拉报;2008年
7 ;如何提高棉铃虫防治效果[N];瓜果蔬菜报.农业信息周刊;2008年
8 通讯员 杨奇德 李采弟;疏勒县牙甫泉镇采取措施防治棉铃虫害[N];喀什日报(汉);2008年
9 徐云海;棉铃虫冬防三法[N];中华合作时报;2005年
10 通讯员 李红梅 迟浩;认真做好棉铃虫发生预测预报及防治工作[N];喀什日报(汉);2006年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 刘小宁;植物次生物质对棉铃虫细胞色素P450s的诱导及CYP6B6基因的克隆与表达[D];中国农业大学;2005年
2 郑明奇;棉铃虫细胞色素P450的诱导、纯化及其性质研究[D];中国农业大学;2003年
3 陈凤菊;棉铃虫谷胱甘肽S-转移酶的诱导表达及其基因克隆[D];中国农业大学;2003年
4 吕昭智;棉铃虫网络监测预警信息系统关键技术的研究[D];中国农业大学;2004年
5 李素云;槲皮素及其糖苷在Caco-2细胞模型上的吸收和代谢研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2010年
6 吴健全;槲皮素抗疲劳作用及其相关机制的实验研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2010年
7 任晓霞;棉铃虫Helicoverpa armigera (Hübner)对有机磷杀虫剂靶标抗性机制的研究[D];南京农业大学;2002年
8 梁革梅;棉铃虫Bt毒素受体蛋白生化特性、基因克隆及其与抗性的关系[D];中国农业科学院;2002年
9 魏海峰;单宁酸对实验性糖尿病大鼠肾脏病变的改善作用及其机制的研究[D];吉林大学;2010年
10 王桂荣;棉铃虫气味结合蛋白的分子结构及对气味的识别[D];中国农业科学院;2002年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 陈法军;蛹期土壤水分状况对棉铃虫生长发育和繁殖的影响[D];南京农业大学;2001年
2 杨燕涛;降雨对棉铃虫化蛹和羽化的影响机制及对发生程度的抑制作用研究[D];南京农业大学;2000年
3 高宇;棉铃虫Cry1A新受体蛋白的鉴定及与抗性的关系[D];东北林业大学;2010年
4 魏巍;棉铃虫几丁质酶cDNA克隆及表达研究[D];中国农业科学院;2002年
5 张欣;棉铃虫甾醇载体蛋白2(SCP-2)基因的鉴定和功能研究[D];华中师范大学;2010年
6 李杰;棉铃虫中肠靶标蛋白的分离与鉴定[D];河北农业大学;2010年
7 刘慕兰;棉铃虫卵上抑卵物质的化学组成和生物活性[D];南京农业大学;2004年
8 宋萍;Bt Cry1Ac毒蛋白对棉铃虫和粘虫作用机理研究[D];河北农业大学;2003年
9 杨鸿波;槲皮素/银杏磷脂复合物的研究[D];武汉大学;2004年
10 刘小宁;新疆寄生棉铃虫的赤眼峰品系筛选[D];新疆农业大学;2001年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026