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《中国农业大学》 2005年
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兔促减数分裂甾醇(MAS)合成酶CYP51及代谢酶Δ14-SR、C4MO的分子全长克隆及表达调控分析

王凤超  
【摘要】:促减数分裂甾醇(meiosis-activating sterol,MAS)是胆固醇合成途径中一个中间产物,体外实验证明,它能诱导培养的卵母细胞恢复减数分裂成熟。MAS包括FF-MAS(follicle fluid-meiosis activating sterol)和T-MAS(testis-meiosis activating sterol),FF-MAS由羊毛甾醇14α-脱甲基酶(CYP51)合成,然后被甾醇Δ14-还原酶(Δ14-SR)进一步转化为T-MAS,甾醇C4甲基氧化酶(C4MO)再将T-MAS进一步代谢,最后生成胆固醇。T-MAS主要累积于睾丸中,而卵巢中主要积累FF-MAS,其它组织MAS含量均在检测线以下。MAS在睾丸中的累积现认为是胆固醇合成途径中MAS上游和下游的代谢酶转录调控不协调的结果,但是卵巢中MAS的累积原因至今不明,我们试图从对MAS合成酶CYP51及其代谢酶Δ14-SR、C4MO在兔卵巢中的表达调控的研究来阐述卵巢中MAS可能的累积机制。 利用RT-PCR和RACE克隆得到了兔子上述三种酶的全长cDNA。兔MAS合成酶CYP51 cDNA的全长约2.7kb,它编码一个含有503个氨基酸的蛋白,推测分子量为57kDa,等电点PI8.79,含有六个保守的底物识别位点(SRS1-6)和保守的结合铁离子的半胱氨酸残基;Δ14-SR cDNA长1370bp,编码含417个氨基酸的蛋白,推测分子量为46kDa,等电点PI8.87,属于甾醇还原酶大家族;C4MO cDNA长1753bp,编码含292个氨基酸的蛋白,推测分子量为35kDa,等电点PI6.79,C4MO蛋白有三个富含组氨酸结构的单元:HX_3H,HX_2HH和HX_2HH。 以Northern Blot为主要研究手段,检测了MAS合成酶CYP51,代谢酶Δ14-SR、C4MO和甾醇转录调控因子SREBP在性腺发育中、卵泡生长过程中及激素作用后卵巢中的表达时空特异性。结果表明:在兔睾丸,随着发育进程,CYP51 mRNA表达增加,而代谢酶C4MO表达显著降低,进一步佐证了这种MAS上游和下游的代谢酶转录调控不协调性是睾丸中T-MAS累积的原因。在兔卵巢,促性腺激素(FSH/LH)处理后,有腔卵泡CYP51 mRNA水平比未处理的同级别卵泡显著升高,且随着卵泡直径的增加而增加;未经激素处理的卵泡中,代谢FF-MAS的Δ14-SR mRNA表达随着卵泡增大逐渐降低,激素处理后表达进一步降低,故推测在体内激素峰作用下,排卵前卵泡中CYP51 mRNA表达增加,同时代谢酶Δ14-SR mRNA表达降低,可能是卵巢中排卵前卵泡FF-MAS累积的原因。无论是否用促性腺激素处理,不同大小有腔卵泡和卵巢中SREBP1的表达量没有显著变化,提示促性腺激素对卵巢中CYP51、Δ14-SR、C4MO mRNA的表达调控不是通过SREBP1起作用。 为探究睾丸间质细胞是否参与了睾丸中MAS的累积,我们拟用二甲基磺酸乙烷(EDS)建立兔睾丸间质细胞破坏模型。结果显示,以20mg/kg剂量EDS处理兔子后,血清中睾酮水平呈现出先下降再上升的趋势。间质区内3β-HSD的活性受到抑制,在12h,3β-HSD活性降到最低,随后其活性逐渐得到恢复。电镜及DNA Ladder显示兔睾丸中间质细胞没有发生明显的细胞凋亡,说明该剂量EDS对兔间质细胞细胞毒作用微弱,不适合建立家兔睾丸间质细胞破坏模型。 为了从蛋白水平上进一步研究MAS在卵巢中累积的机制,本实验还制备了CYP51抗体。用兔CYP51为目的基因,以pGEX4T-3质粒为表达载体构建的CYP51-pGEX4T-3重组质粒,诱导表达GST-CYP51融合蛋白,经切胶纯化后,免疫昆明白(KM)小鼠,得到抗血清。经ELISA法检测,抗血清效价高于1:8192,能够特异识别融合蛋白,但还需进一步纯化。 综上所述,本实验获得了兔CYP51、Δ14-SR和C4MO基因的cDNA全长;发现随兔有腔卵泡生长,FF-MAS合成酶CYP51 mRNA表达增加,同时代谢酶Δ14-SR mRNA表达降低,推测这
【学位授予单位】:中国农业大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2005
【分类号】:Q789

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3 陈雪雁,陈实平,金淑敏,程凯,董红燕,陈克铨;雄激素受体和卵泡刺激素受体在成年大鼠睾丸中的期依赖性表达[J];解剖学报;2001年04期
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8 郭乃洲,马达,王万相,王惠民,张冬雷;荧光素和地高辛标记探针在聚合酶链反应-微孔板杂交检测TTV DNA中应用比较[J];陕西医学检验;2001年04期
9 黄海燕,王桂玉,王春梅,刘润梅,冯晓峰,李伟雄;精子发生相关CG14片段的组织特异性表达及其与杂交不育的关系[J];生殖医学杂志;2002年02期
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3 ;夏季养兔应抓啥[N];通辽日报;2005年
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