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梨抗黑星病基因的AFLP分子标记

刘成  
【摘要】:梨黑星病(Venturia nashicola Tanak et Yamamota)是世界性的梨树重要病害之一,已遍及世界上所有梨产区。近几年来,随着我国梨树生产的发展,梨黑星病不断蔓延,危害逐年加重,成为影响我国梨生产的主要限制因子,因此选育抗病品种是控制病害最经济、最有效和最安全的方法之一。DNA分子标记是随着分子生物学技术的发展出现的一类重要的遗传标记,近年来发展非常迅速,已在果树遗传育种研究的各个方面得到广泛的应用,但对梨黑星病分子生物学方面的研究尚未见报道。 本研究利用抗病品种新苹梨为母本,感病品种雪花梨为父本配制的杂交组合,对其杂交后代进行了田间自然感病和棚内接种梨黑星病病菌后的抗性调查,并进行了AYLP分子标记的研究,建立了用于梨AYLP的分子标记体系,基本找到了与梨黑星病抗性基因相关的分子标记,为最终掌握梨黑星病抗性遗传规律,梨黑星病抗性育种早期选择提供了理论依据。 试验建立了适合梨AYLP分析的技术体系,以改良CTAB法提取基因组DNA,去除RNA后经双酶切、接头连接,将连接产物稀释10倍用引物组合EcoRI+0/MseI+C进行预扩增,预扩增产物稀释20倍后用引物组合EcoRI+3/MseI+3所组成的64对引物进行选择性扩增,扩增条带清晰、多态性高,适合梨基因组分析。 采用群体分离分析法(BSA法,Bulked Segregant Analysis),对由抗病后代和感病后代组成的抗病和感病两个混合基因库进行分析,对64对引物组合进行筛选,结果表明引物组合EcoRI+ACG/MseI+CAG扩增出的条带在后代群体中符合抗感病的性状分离规律,最终获得了2个AFLP分子标记。


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