收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

拟南芥中两种动蛋白异型体KatB/KatC生化性质及组织分布研究

姜世玲  
【摘要】:动蛋白是一类依赖于微管的马达蛋白,它能利用ATP水解产生的能量沿微管运动。动蛋白具有依赖于核苷酸的微管结合特性和被微管激活的ATPase特性,这两个特性由动蛋白的头部马达区负责。动蛋白组成一个庞大的动蛋白超家族,广泛存在真核细胞,参与了众多的生物学过程,如细胞器运输、有丝分裂和减数分裂、微管的动态调节以及信号转导等。拟南芥中存在着61个动蛋白异型体。KatB和KatC是于1993年从拟南芥中最早克隆出的五个动蛋白基因中的两个,属于C端马达蛋白,它们所编码蛋白质的氨基酸同源性高达84%。虽然其基因很早就被克隆,但有关二者的生物化学特性和功能报道很少。深入研究KatB和KatC的体外生物化学特性和体内组织分布规律,对揭示植物动蛋白异型体的功能作用具有重要的理论意义。 本研究利用KatC的N-端尾部区域(128aa)的cDNA序列构建了原核表达载体,并在大肠杆凶中进行表达、纯化。与微管的共沉淀实验表明,KatC N-端尾部区域能与微管结合,而且这种结合不依赖于ATP。冷CCD荧光显微观察结果表明,KatC N-端尾部区域不能引起微管的成束。为了确定负责与微管结合的最小区域,我们构建了6段不同长度的原核表达载体,并进行了表达、纯化;纯化的各删除片段用来与微管进行共沉淀分析。结果表明,KatC N端尾部区域的第74-86aa肽段是负责与微管结合的区域,而且包含此区域的不同删除片段与微管的结合比不同,说明这一微管结合位点可能是构象依赖型的。点突变实验结果进一步表明,Arg77和Arg79在KatC的N-端尾部区域与微管结合的过程中起着关键性的作用。同时,我们构建、表达、纯化了KatB的除去马达区的385个氨基酸的片段,其与微管的共沉淀实验表明,KatB在尾部区域同样也存在着第二个微管结合位点。 将含有KatB、KatC杆区的KatB(1-383aa)和KatC(1-394aa)区段分别融合His、GST,各产生了两种带不同标签的融合蛋白,通过Pull down实验研究KatB、KatC各自及二者的相互作用。实验结果表明,KatB、KatC不但各自可以自己相互作用,形成同源二聚体,二者也可以相互作用形成异源二聚体。 用gus作为报告基因,对KatB和KatC启动子驱动的gus活性进行比较。结果表明:(1) KatB和KatC启动子在根部都有活性,但具体部位不同。KatC启动子的活性主要集中在根尖分生区及幼嫩的根毛中。而KatB启动子除了在分生区有活性外,在中柱内及不同发育时期的侧根内都有较强的活性。(2) KatB启动子驱动的gus在叶原基、叶脉、叶毛、花药、果荚中都有活性,但KatC启动子驱动的gus却只在果荚中有活性。 为了进—步了解KatB、KatC在植物体内的分布,我们分别选用KatB特异肽段(CAHRHVNARPLDY)及KatC的特异肽段(CPRRQTNIKPLEN)为抗原,制备抗血清。经亲和纯化的抗体能够特异地识别KatB、KatC而无免疫交叉反应。用免疫印迹对KatB、KatC在拟南芥中的组织分布进行了研究,结果表明:KatB在拟南芥中,除了果荚外,在幼苗、根、茎、叶和花中都有表达,但KatC在叶和花中表达很弱,却在果荚里表达较强。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 简令成;植物微管和微丝骨架研究的进展[J];细胞生物学杂志;1992年03期
2 崔洪波;集成微管路化学传感器检测系统研究[J];地球科学进展;1992年05期
3 徐是雄,黄炳权,叶秀麟;水稻胚囊发育过程中微管的变化(英文)[J];Acta Botanica Sinica;1997年10期
4 汤清秀,王隆华;植物微管研究进展[J];植物生理学通讯;2000年02期
5 Ron Dagani ,徐肖云;碳微管能用来储存氢气吗?[J];世界科学;2002年08期
6 潘章;;驱动蛋白的结构及运动机制研究进展[J];科技信息;2009年05期
7 胡之德;分析化学中共沉淀离子和载体的统计分析[J];科学通报;1980年06期
8 甘思德;神经元胞浆转运和分子信息传递[J];基础医学与临床;1982年05期
9 甘思德;微管与轴突构筑重建[J];生命科学;1994年02期
10 李卓娅,冯新为;细胞骨架系统对TNF-α产生的影响[J];上海免疫学杂志;1995年05期
11 周文俊,胡韶楠,徐建光;肌动蛋白丝、微管与神经生长锥导向[J];国外医学.骨科学分册;2004年05期
12 王永功,范兴科,吴普特;微管沿程水头损失计算方法试验研究[J];灌溉排水学报;2005年03期
13 王一鸣;范小兵;杭晓敏;李堃宝;杨虹;;体外去除胆固醇菌株的筛选及其作用机理研究[J];微生物学通报;2006年06期
14 周希明,武维华,袁明,王学臣;气孔保卫细胞微管对质膜上钾离子通道的调节作用[J];科学通报;1999年09期
15 杨志平;李兴民;杨勇;李旭;李盼来;;共沉淀法制备Y_2O_2S∶Eu~(3+),Mg~(2+),Ti~(4+)红色长余辉材料[J];发光学报;2006年02期
16 安德煜;氢化物发生-ICP发射光谱法测定饮用水中痕量砷[J];华南师范大学学报(自然科学版);1994年02期
17 蔡雪,胡适宜;川百合花粉管的生殖细胞分裂过程中微管骨架的分布变化[J];植物学报;1996年10期
18 胡风庆;MAPK对高等植物细胞分裂和生长的调节[J];中国生物工程杂志;2002年05期
19 蒋蕾蕾;吴作基;王春光;;微管解聚型驱动蛋白的结构与功能(英文)[J];细胞生物学杂志;2008年02期
20 王秀珍,韩志强;花粉中微管与花粉管伸长及其胞质颗粒运动的关系[J];作物学报;1995年02期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 付玉彬;郑纪勇;;纳米生物微管和金属微管的制备及应用前景[A];纳米材料和技术应用进展——全国第二届纳米材料和技术应用会议论文集(上卷)[C];2001年
2 刘家源;江剑;王静;刘溪;;微管与天然抗肿瘤药物的研究进展[A];第十届全国药用植物及植物药学术研讨会论文摘要集[C];2011年
3 陈莹;邱锡钧;朱志远;;细胞骨架微管中的水与自由电子激光[A];Strong Field Laser Physics--Proceedings of CCAST(World Laboratory) Workshop[C];2002年
4 史惠萍;;微管微缆技术在接入网和城域网中的应用[A];中国通信学会2004年光缆电缆学术年会论文集[C];2004年
5 窦红静;许斌;陆蓉;宋晟;孙康;丁晶;李济宇;施伟斌;章东;郭霞生;;聚乳酸基磁性微纳米囊的新型“共沉淀-联合双乳化法”制备及其在增强MRI/超声双重显影中的应用研究[A];2011年全国高分子学术论文报告会论文摘要集[C];2011年
6 于慧鑫;贾永锋;;FeS与As共沉淀体系对As的固持作用研究[A];第六届全国环境化学大会暨环境科学仪器与分析仪器展览会摘要集[C];2011年
7 孙德兰;宋艳梅;朱传凤;潘革波;;用原子力显微镜观测植物细胞微管[A];中国植物学会七十周年年会论文摘要汇编(1933—2003)[C];2003年
8 卢燊;何静;王连英;;水滑石纳米棒的合成及形成机理研究[A];中国化学会第27届学术年会第04分会场摘要集[C];2010年
9 张毅奕;陶祖莱;;微管在细胞可变形性中的作用——抗拒微丝产生的张力[A];第七届全国生物力学学术会议论文集[C];2003年
10 高金珉;孙蕾;霍丽红;刘敏;李登文;周军;;CYLD对微管动态性、细胞迁移及血管新生的调节[A];遗传学与社会可持续发展——2010中国青年遗传学家论坛论文摘要汇编[C];2010年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 姜世玲;拟南芥中两种动蛋白异型体KatB/KatC生化性质及组织分布研究[D];中国农业大学;2005年
2 胡炯宇;缺氧通过MAP4和Op18调控细胞微管结构的作用及其机制研究[D];第三军医大学;2010年
3 高金珉;肿瘤抑制因子CYLD调节微管组装及微管相关细胞活动的分子机制[D];南开大学;2010年
4 张群;拟南芥磷脂酶D和磷脂酸对微管形态和NADPH氧化酶活性调控机制的研究[D];南京农业大学;2009年
5 吴睿;微管靶点药物Combretastatin A-4及其衍生的抗肿瘤药效学及其机制研究[D];浙江大学;2012年
6 李建农;新型微管蛋白配体3-溴代丙酰胺苯甲酰脲(JIMB01)的抗肿瘤作用与分子机理[D];中国协和医科大学;2003年
7 降雨强;激光的生物学效应[D];山西大学;2004年
8 熊善新;采用模板法制备有序排列的聚苯胺复合微管和微丝的研究[D];四川大学;2004年
9 生欣;腹毛类纤毛虫阔口游仆虫微管类细胞骨架及γ-微管蛋白的研究[D];华东师范大学;2011年
10 陈长军;禾谷镰孢菌(Fusarium graminearum)对多菌灵抗药性基因的克隆[D];南京农业大学;2004年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 张学英;HEK293细胞中GABA_B受体同源或异源二聚体介导的ERK/MAPK信号通路的初步研究[D];华中科技大学;2007年
2 张彩华;分子马达对反平行微管交叠区长度的控制[D];西北农林科技大学;2012年
3 刘娜;GABA_B受体运动机制的初步研究[D];华中科技大学;2006年
4 刘萍;Alzheimer病与血管性痴呆皮肤基底细胞微管研究[D];暨南大学;2001年
5 雷芳明;微管的力学性能:连续体描述与分子模拟[D];兰州大学;2010年
6 安乐;微管的屈曲行为以及振动的电场效应[D];兰州大学;2011年
7 范小兰;拟血管性痴呆鼠空间记忆能力、TPA、微管等相关性研究[D];福建医科大学;2002年
8 李爱群;JWA,一种新的微管相关蛋白,对细胞内氨基酸平衡有重要调节作用[D];南京医科大学;2003年
9 余小菁;逆转录病毒介导的Bystin基因表达及其功能探讨[D];华东师范大学;2004年
10 王亚超;蛋白激酶A作为微管亲和调控蛋白激酶2新型上游激酶调节微管稳定以及神经元极化[D];华东师范大学;2011年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 顾日升 陈鸿昌 宋桂祥;兴化大棚微管增氧养虾[N];江苏农业科技报;2008年
2 记者 顾日升通讯员 陈鸿昌 宋桂祥;兴化大棚微管综合养虾获成功[N];泰州日报;2008年
3 记者 毛黎;美科学家揭示人体微管结构原理[N];科技日报;2007年
4 顾日升;兴化养殖户探索微管增氧法高密度养殖获高效[N];江苏农业科技报;2007年
5 陈德耕;池塘微管增氧技术[N];中国渔业报;2008年
6 顾日升陈鸿昌 宋桂祥;陈来春大棚微管法养虾效益大增[N];农民日报;2008年
7 记者 顾日升;纳米微管增氧 养殖密度大增[N];泰州日报;2009年
8 龚新 亚丽;工行推进电子信息化建设[N];金融时报;2003年
9 记者 陶洪;“小白龙”为节水农业作出贡献[N];兵团日报(汉);2006年
10 ;微缆系统技术竞争优势[N];人民邮电;2003年
中国知网广告投放
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978