收藏本站
《北京林业大学》 2011年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

青杨原生质体培养及叶片离体染色体加倍研究

蔡肖  
【摘要】:杨树三倍体品种在林业生产中的突出表现证明,杨树多倍体育种具有巨大的挖掘潜力。细胞融合和体细胞染色体加倍是获得杨树多倍体种质的有效途径之一。本文以小青杨(Populus pseudo-simonii Kitag.)、北京杨(P.×beijingensis)为材料,在建立离体再生体系以及悬浮细胞培养体系的基础上,开展了原生质体分离、培养,以及施加秋水仙碱处理诱导小青杨离体叶片细胞染色体加倍研究,为细胞融合途径获得杨树体细胞杂种以及诱导离体组织染色体加倍途径创造杨树四倍体新种质打下了一定的基础。主要研究结果如下: 1.研究了小青杨单芽茎段培养和愈伤组织再生技术,为进一步开展离体叶片细胞染色体加倍以及原生质体培养奠定了基础。小青杨单芽茎段在含NAA 0.05 mg/L的MS培养基中启动腋芽萌发,在含IBA0.5 mg/L的1/2MS培养基生根率达100%。用下胚轴和不带芽茎段为材料诱导愈伤组织,在MS附加2,4-D 2 mg/L, BA 0.05~0.1mg/L诱导效果最佳,愈伤组织颜色鲜黄,呈颗粒状;愈伤组织再分化的最适激素配比为BA1.0 mg/L和NAA 0.2mg/L,在此条件下8w即可分化出绿色不定芽。 2.建立了小青杨悬浮细胞培养体系,为原生质体培养奠定了基础。小青杨茎段来源的愈伤组织建立的悬浮细胞系,在含2,4-D 2 mg/L、BA0.1 mg/L、ME 500 mg/L谷氨酰胺1500 mg/L和4%蔗糖的MS液体培养基中细胞分裂旺盛,生长特性呈S型曲线,继代周期为12d;长期在含高浓度2,4-D的培养基上培养不利于保持细胞分化能力,应根据悬浮细胞生长状态定期调整2,4-D和BA浓度;采用固体-液体轮回培养法,可以对培养物进行长期保存。 3.研究建立了小青杨和北京杨叶肉和悬浮细胞原生质体分离技术体系。小青杨叶肉原生质体分离的最佳条件为将培养35 d的叶片置于含3.0%纤维素酶R-10、0.5%离析酶R-10、0.1%果胶酶Y-23和0.6 M甘露醇的混合酶液中酶解8 h,原生质体产量和活力分别达到2.44x 10~7个/g和78.7%。小青杨和北京杨悬浮细胞原生质体分离条件类似,适宜酶解液配比组合均为1.0%纤维素酶RS、0.5%离析酶R-10和0.6 M甘露醇,将培养6d的处于对数生长期的小青杨和北京杨下胚轴悬浮细胞分别酶解6h和4 h,可以获得产量和活力表现俱佳的原生质体。 4.研究了小青杨和北京杨原生质体培养技术,获得了再生植株。原生质再生与原始材料来源密切相关,源于叶肉的小青杨原生质体培养甚至难以获得愈伤组织,而源于下胚轴悬浮细胞的小青杨、北京杨原生质体培养均可以获得再生植株。在小青杨和北京杨悬浮细胞原生质体培养中,以2×10~5个/mL的密度培养在附加2,4-D 2 mg/L、BA 0.2 mg/L和0.6 M葡萄糖的液体MMS培养基植板率最高;原生质体愈伤组织经1-2次增殖培养后可进行分化诱导,其中小青杨原生质体愈伤组织在含BA 1.0 mg/L和NAA 0.1 mg/L的培养基上分化率最高,北京杨原生质体愈伤组织则在含BA 0.5mg/L和NAA 0.1 mg/L的培养基上分化率最高;原生质体再生植株均在含0.5 mg/LIBA的1/2MS培养基上生根良好。 5.首次通过施加秋水仙碱处理诱导小青杨离体叶片细胞染色体加倍获得了四倍体植株。诱导小青杨叶片再生植株的最适激素组合是BA0.4 mg/L和NAA0.2 mg/L,叶片分化率达75.2%;将预培养6d的叶片在秋水仙碱浓度为30 mg/L的液体培养基中处理3d后,转入叶片再生培养基培养,嵌合体比率低,可以获得源于单细胞染色体加倍的四倍体,四倍体植株诱导率最高达14.6%。对经过5次继代的36株四倍体进行倍性检测,其倍性水平仍表现稳定。
【学位授予单位】:北京林业大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2011
【分类号】:S792.113

手机知网App
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 刘铁冬;许大为;高宇;庞颖;朱磊;吴妍;胡远东;龚文峰;;五味子愈伤组织培养及醇甲含量分析[J];北方园艺;2011年16期
2 王丹丹;郭文坛;蒋健;李志新;;蓝莓叶片原生质体的制备[J];辽东学院学报(自然科学版);2011年02期
3 马伟明;刘效瑞;王春明;尚虎山;;黄芪愈伤组织的诱导及分化培养[J];甘肃农业科技;2011年06期
4 曲芬霞;;桂东大山楂愈伤组织诱导初探[J];中国南方果树;2011年04期
5 邵红;李秀霞;李修平;薛春梅;;杂交榛抗寒变异愈伤组织的选择[J];林业科技;2011年04期
6 段晓姗;田先华;;蓝堇草离体快繁和植株再生研究[J];安徽农业科学;2011年19期
7 袁云香;;秦美猕猴桃高频遗传转化再生体系的建立[J];湖北农业科学;2011年14期
8 王和飞;梁柳;张燕;刘进平;;胆木愈伤组织与悬浮细胞培养研究[J];热带农业科学;2011年06期
9 黄玉超;董虎;徐晨阳;任凭;钟连进;;黄瓜植株与愈伤组织对铜的耐受及其铜积累研究[J];热带作物学报;2011年05期
10 李朝婵;周凤娇;巫华美;陈训;;野生大白杜鹃无菌苗愈伤组织诱导研究[J];种子;2011年06期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 李伯林;莫斯慧;;罗汉果原生质体培养研究[A];中国植物生理学会第十次会员代表大会暨全国学术年会论文摘要汇编[C];2009年
2 刘晓光;刘孟军;宁强;;冬枣嫩茎和幼叶愈伤组织的诱导[A];第四届全国干果生产、科研进展研讨会论文集[C];2005年
3 傅经国;吴鸣建;何娟;尚玉俊;赵天增;宋立新;;RP-HPLC法测定苦皮藤愈伤组织中苦皮素A的含量[A];中国制药工业药理学会20周年学术会议论文集[C];2002年
4 曾小美;王凌健;夏镇澳;沈允钢;;烟草光自养型愈伤组织的光合特性研究[A];中国植物生理学会全国学术年会暨成立40周年庆祝大会学术论文摘要汇编[C];2003年
5 翟晓巧;;二乔刺槐愈伤组织超低温保存研究[A];第六届全国林木遗传育种大会论文集[C];2008年
6 朱向涛;王雁;彭镇华;律春燕;郑宝强;;牡丹愈伤组织扫描电镜观察[A];中国观赏园艺研究进展(2010)[C];2010年
7 孙震晓;刘传召;郭善利;马清温;;植物愈伤组织超低温保存的实验研究[A];第七届全国系统与进化植物学青年学术研讨会论文摘要集[C];2002年
8 周安莲;余茂德;;桑子叶愈伤组织的诱导培养[A];中国蚕学会第三届青年学术研讨会暨浙江省第二届青年学术论坛——蚕桑分论坛论文集(上册)[C];2001年
9 许鸿源;蒙爱东;李春霞;邓锡青;杨美纯;周歧伟;黄春燕;许鸿章;;灵发素(LFS)对三七愈伤组织发生和增殖的影响[A];2003年广西植物生理学年会论文汇编[C];2003年
10 佘建明;张保龙;陈志一;倪万潮;;草坪型高羊茅成熟种子离体培养植株再生技术研究[A];全国作物细胞工程与分子技术育种学术研讨会论文集[C];2003年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 ;俄罗斯培育出更耐涝小麦[N];新华每日电讯;2010年
2 唐山市丰南区林业局 汪林华 魏文娟 贾久正;这是杨树破腹病[N];河北科技报;2006年
3 濮阳市世锦现代农业发展有限公司 张晖 王绪月;花卉无性系的快速繁殖[N];中国花卉报;2006年
4 容城县农牧局 赵会芳 容城县八于乡农技服务站 沈山林;大棚西瓜嫁接育苗十注意[N];河北科技报;2007年
5 曹涤环 刘建武;影响苗木嫁接成活的因素[N];中国绿色时报;2008年
6 山东 吴建民 田俊华;硫磺在花木栽培上的妙用[N];中国花卉报;2005年
7 河南省三门峡市园林科学研究所 许冬丽 高秀云 李艳杰;春植树木夏亡原因及防范[N];中国花卉报;2010年
8 青县职教中心 刘恩祥;枣树蘸蜡插皮接效果好[N];河北科技报;2006年
9 山东 吴建民 田俊华;草木灰的应用[N];中国花卉报;2005年
10 正定县林业局 安建会;枣树开甲后不愈合的补救措施[N];河北科技报;2007年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 蔡肖;青杨原生质体培养及叶片离体染色体加倍研究[D];北京林业大学;2011年
2 吴顺;籼稻成熟胚再生体系的建立及反义waxy基因转化籼稻的研究[D];湖南农业大学;2005年
3 伍碧华;小麦离体培养的营养器官与花器官发育研究[D];四川农业大学;2003年
4 钟原;紫斑牡丹分生结节的诱导与培养[D];北京林业大学;2011年
5 宋建英;邓恩桉微体快繁技术和耐寒性的研究[D];南京林业大学;2008年
6 何铁剑;菠萝组织与细胞培养及其诱导产酶研究[D];华南理工大学;1994年
7 朱向涛;凤丹体胚发生及愈伤组织诱导芽分化研究[D];中国林业科学研究院;2010年
8 秦磊;牡丹分生结节诱导、发生与发育及细胞组织学观察[D];北京林业大学;2012年
9 潘增光;苹果原生质体培养再生及融合研究[D];华中农业大学;1998年
10 姚娜;竹子组织培养与毛竹愈伤组织分化中基因表达分析[D];中国林业科学研究院;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 莫小强;罗汉果原生质体培养[D];广西师范大学;2005年
2 王惠珍;穗冠花愈伤组织的诱导和花色素苷积累的研究[D];华南师范大学;2002年
3 张清梅;中小型苹果再生体系的研究[D];内蒙古农业大学;2005年
4 高兵;不同培养条件对嘎拉苹果愈伤组织遗传变异的影响研究[D];南京农业大学;2005年
5 赵莉;不同营养条件对大苞景天愈伤组织诱导及植株再生的影响研究[D];四川农业大学;2005年
6 刘晓光;枣愈伤组织诱导和原生质体分离研究[D];河北农业大学;2006年
7 王辉;香榧的组织培养及快繁技术的研究[D];浙江大学;2006年
8 赵世萍;蝴蝶兰组织培养过程中特异蛋白表达差异的研究[D];东北师范大学;2006年
9 胡楠;魔芋浅层液体组织培养及多倍体诱导研究[D];西南大学;2011年
10 袁秀平;红王子锦带组培再生植株体系的研究[D];西北农林科技大学;2004年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026