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《北京林业大学》 2011年
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普氏野马粪便DNA方法优化及应用的可行性研究

刘刚  
【摘要】:动物血液和肌肉等组织业已广泛用于遗传学研究,然而,采集动物组织会伤及动物且难以获得充足的样本数量,目前研究者积极探索非损伤采样方法并运用遗传学研究。迄今非损伤取样方法在濒危物种保护遗传学研究中仍面临DNA量少、DNA降解、PCR抑制物、背景DNA干扰等诸多问题,制约了该方法及其相关研究深入开展。普氏野马重引入是我国一项濒危物保护生物学的重大实践,亟待开展非损伤途径的保护遗传学研究。 鉴于此,本研究以三种粪便保存方法和2种粪便DNA提取方法为自变量,以PCR成功率为因变量,比较每种处理组合的PCR成功率,建立了一种适合普氏野马粪便DNA的保存方法、提取方法以及PCR扩增方法,并探讨该方法运用于普氏野马遗传多样性研究的可行性。本研究将近缘种家马的4个微卫星位点用于50匹普氏野马粪便DNA的扩增,并扩增了线粒体DNA的12SrRNA。主要研究结果如下: (1)三种保存方法的PCR成功率存在显著性差异(P0.05),采用酒精保存效果较好。源自保存方法与提取方法的显著交互作用(P0.05)表明,酒精保存和手工提取方法这种处理组合的PCR成功率最高(66.1%)。 (2)粪便DNA保存时效性研究表明,采用酒精保存粪样的PCR在9个月时成功率(30%)显著降低(P=0.016),而采用干燥保存方法(P=0.031)和冷冻保存方法(P=0.001)的粪便DNA的PCR成功率,则在6个月的时候显著降低。 (3)本研究建立的提取方法表明CTAB、马铃薯淀粉以及BSA对于去除粪便中PCR的抑制物具有重要的作用。 (4)4个微卫星位点在50个普氏野马个体中共检测到16个等位基因,等位基因最低为3个,最高为5个,平均为4个。所有检测个体中,4个微卫星微点的平均期望杂合度(He)为0.703,平均观测杂合度(Ho)为0.575。
【学位授予单位】:北京林业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2011
【分类号】:Q953

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【参考文献】
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