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《北京林业大学》 2012年
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以pmi为安全选择标记的转基因地被菊研究

孙佳琦  
【摘要】:转基因技术由于能增强育种目的性和可预测性等优点,早已得到了广泛应用。但是其限制性因素也较为明显,其中之一就是选择标记基因的安全性问题。选择标记基因虽然提高了鉴别转化子的准确性,但是在完成转基因鉴定以后,标记基因不但失去了存在价值,而且对大体和环境还构成了一定的安全隐患。因此,开展安全转基因技术的研究,对保护人类健康和维护生态环境稳定性有着重要的价值和意义。本研究针对解决转基因菊花标记基因的安全性问题,开展了以磷酸甘露糖异构酶基因(pmi)为安全标记的研究,得到了如下几点主要结论: (1)构建了以磷酸甘露糖异构酶基因为安全标记的转基因表达载体pCAMBIA1301-pmi和对照载体pCAMBIA1301-pmi-hpt。将这两个载体分别转入了农杆菌EHA105菌株中,获得了可用于侵染植物的农杆菌工程菌株EHA105-p1301-pmi和EHA105-p1301-pmi-hpt;(2)优化了地被菊品种‘北林黄’的分化培养基配方:MS+6-BA1.5mg/L+NAA1.2mg/L,再生频率为83.3%:‘金顶红心’的优化分化培养基配方:MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.5mg/L,再生频率为66.67%;(3)建立了针对地被菊品种‘北林黄’的安全转基因受体体系:对零代组培苗的甘露糖筛选条件为先12g/L甘露糖+18g/L蔗糖,再6g/L甘露糖+24g/L蔗糖;对高代组培苗(继代多于5次)的筛选条件为先10g/L甘露糖+20g/L蔗糖后4g/L甘露糖+26g/L蔗糖。而地被菊品种‘金顶红心’对甘露糖极其敏感,不适合作为以甘露糖为筛选剂的安全转基因品种;(4)以pmi为安全标记的地被菊转化体系的PCR鉴定阳性率为12.7%,其中氯酚红鉴定阳性率为7.5%,而传统的潮霉素标记体系的PCR鉴定阳性率仅为3.2%,可见以pmi为安全标记的地被菊转化体系比潮霉素标记体系更高效。 本研究首次在地被菊品种‘北林黄’中构建了安全转基因体系,将对人和环境安全的磷酸甘露糖异构酶基因(pmi)作为选择标记基因,避免了传统抗生素或除草素的使用及其安全隐患的发生,同时提高了转化率,具有重要的理论价值和社会效益。
【学位授予单位】:北京林业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2012
【分类号】:S682.11

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