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毛白杨无性系耐盐性比较与转耐盐基因的研究

于海武  
【摘要】:本研究以八个毛白杨优良无性系植株为试验材料。在盐胁迫条件下,调查了八个毛白杨优良无性系的存活状况,受害症状及苗高等生长性状,同时测定了植株叶片内叶绿素,脯氨酸,MDA的含量等理化指标。进而,利用农杆菌介导的基因工程方法将mtlD基因导入毛白杨中,获得了转基因植株。经研究获得如下主要结论: 1.经盐胁迫处理后,毛白杨各个无性系的耐盐能力存在差异,主要表现在苗木存活状况,受害特征出现的时间和受害程度,以及高生长量等方面。 2.经盐胁迫处理后,随着盐浓度的升高,毛白杨无性系植株的叶片内叶绿素含量逐渐降低,MDA含量逐渐升高,脯氨酸含量先上升后下降。 3.根据盐胁迫后毛白杨优良无性系植株的生长表现,再辅以生理生化指标,评定八个毛白杨优良无性系的耐盐性,由强到弱可分为三个类型:L5和L16耐盐能力较强;L11、L14和L27耐盐能力中等;L12、L13和L24对盐胁迫敏感。 4.建立了毛白杨优良无性系的最佳再生体系:最佳增殖培养基是MS+6—BA0.3mg/L+NAA0.1mg/L附加糖3.0%和琼脂0.5%;最佳叶片分化培养基是MS+6—BA3.0mg/L+NAA0.1mg/L附加糖3.0%和琼脂0.5%;最佳生根培养基是1/2MS基本培养基附加NAA0.3mg/L,另加入糖2.0%和琼脂0.5%。 5.同龄同代的无根组培苗叶片和生根组培苗叶片作外植体,不定芽生成率有差异;不同类型培养基(WPM、MS)对毛白杨叶片再生率的影响无显著差异;在培养基中加入不同浓度梯度的AgNO_3溶液,结果发现4mg/L的AgNO_3能够提高叶片产生不定芽的数量。 6.按照以下优化的转化体系:菌液OD_(600)=0.3-0.5;侵染时间为10—20min;叶片在黑暗下共培养2-3天;卡那霉素的临界浓度是50mg/L,对筛选出的抗性植株进行PCR及PCR-Southern检测。结果表明,成功获得了转入mtlD基因的毛白杨植株。


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