杨树杂交亲本与子代遗传变异及其分子基础研究
【摘要】:本研究以杨属部分种及杂种为亲本,通过人工控制授粉获得杂种群体,在表型水平上,对子代进行数量性状遗传变异分析,经多性状综合评价选择优良杂交组合和优良单株;在DNA水平上,利用AFLP标记技术研究杂交亲本间遗传差异,并与其子代生长性状进行相关和回归分析,在基因组水平探讨杂交亲本选配和杂种优势预测的可行性;在RNA水平上,利用mRNA差异显示技术研究亲本和杂交种的基因表达差异,对差异片段克隆测序和同源性分析,并在此基础上预测其功能,为探讨杂种优势形成的分子机理积累资料。主要研究结果如下:
1.以杨属白杨派、黑杨派、青杨派中的25个无性系为亲本,组配了32个杂交组合,获得26个组合的苗木5000余株。对这些组合的种子和苗木性状进行数量遗传分析表明,种子性状、生长性状、分枝性状、叶片性状在组合间均达显著性差异,各性状的杂交组合遗传力在0.571-0.999间,属于高遗传力性状;在所测定的16个性状中有15个性状的单株遗传力在0.249-1.000之间,属中等或高遗传力性状。表明杂交组合间和组合内个体间存在的变异主要受遗传因素控制,进行优良杂交组合选择和优良单株选择是可行的。
2.综合主成分分析和聚类分析结果表明,大青杨4×T66、大青杨4×T26、1-69×大青杨3、I-69×D324为生长量高、叶片大的优良组合;毛新杨×84K、银毛杨×84K、银腺2号×鲁毛50为生长量较高、叶片较大的优良组合。在这7个优良组合中,大青杨4×T66、大青杨4×T26、I-69×大青杨3、毛新杨×84K、银毛杨×84K为首次选出的5个新杂交组合。并以生长性状为主要选择指标,兼顾分枝性状,选出123株优良单株,为进一步开展无性系测定和区域化试验提供了丰富材料。
3.利用13对AFLP引物对杨属4个派中21个种55个无性系进行遗传变异分析,共检测到858个标记,其中多态性标记为771个,多态性水平为89.9%,每对引物产生的多态性水平在80.7%-98.1%之间;标记片段大小范围为15bp-1000bp,平均片段长度是245bp。由此表明,杨属种间及无性系间在DNA水平上存在广泛变异。
4.首次计算了杨属派间、派内种间、种内无性系间AFLP分子遗传距离,并进行聚类分析,结果表明,杨属派间遗传距离派内种间遗传距离种内无性系间遗传距离;在派间遗传距离中,白杨派与胡杨派最大(0.5314),其次是白杨派与黑杨派(0.4781)、白杨派与青杨派(0.4732)、黑杨派与胡杨派(0.4706),这三个遗传距离较接近;再者是青杨派与胡杨派(0.4379);派间遗传距离最小的是黑杨派与青杨派(0.3263)。派内种间遗传距离大小依次为青杨派(0.2482)、黑杨派(0.2435)、白杨派(0.1856)。派间聚类分析结果与经典形态分类完全一致,派内种间及种内无性系间与形态分类基本相同。
【关键词】:杨树 杂交 遗传变异 分子基础 AFLP mRNA差异显示
【学位授予单位】:北京林业大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2005
【分类号】:S792.1
【目录】:
【学位授予单位】:北京林业大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2005
【分类号】:S792.1
【目录】:
- 摘要4-6
- ABSTRACT6-9
- 本文缩略词9-14
- 引言14-16
- 1 文献综述16-40
- 1.1 杨树杂交育种研究进展16-27
- 1.1.1 国外杨树杂交育种概况16-20
- 1.1.1.1 世界杨树种质资源16-17
- 1.1.1.2 派内种间杂交17-19
- 1.1.1.3 派间杂交19-20
- 1.1.2 国内杨树杂交育种研究进展20-27
- 1.1.2.1 中国杨树种质资源20-21
- 1.1.2.2 派内种间杂交21-23
- 1.1.2.3 派间杂交23-26
- 1.1.2.4 杂交育种存在的主要问题及采取对策26-27
- 1.2 植物杂种优势遗传机理研究进展27-38
- 1.2.1 杂种优势的普遍性及其利用27-28
- 1.2.2 杂种优势遗传机理研究进展28-38
- 1.2.2.1 杂种优势的遗传学基础28-29
- 1.2.2.2 遗传距离与杂种优势29-34
- 1.2.2.3 数量性状位点杂合度与杂种优势34-35
- 1.2.2.4 基因表达调控与杂种优势35-38
- 1.2.3 树木杂种优势分子机理研究进展38
- 1.3 立题依据与技术路线38-40
- 2 杨树不同杂交组合种子及苗期性状遗传变异分析40-70
- 2.1 材料与方法40-44
- 2.1.1 试验地概况40
- 2.1.2 杂交亲本40
- 2.1.3 杂交亲本交配试验设计40
- 2.1.4 杂交方法40-41
- 2.1.5 田间试验设计41
- 2.1.6 性状调查方法41-42
- 2.1.7 统计分析方法42-44
- 2.1.7.1 各性状均值、标准差、变异系数42-43
- 2.1.7.2 方差分析43
- 2.1.7.3 多重比较43
- 2.1.7.4 表型、遗传相关分析43-44
- 2.1.7.5 主成分分析44
- 2.1.7.6 聚类分析44
- 2.2 结果与分析44-66
- 2.2.1 各杂交组合的果序长度及种子性状44-47
- 2.2.1.1 果序长度44-45
- 2.2.1.2 每果序种子数45-46
- 2.2.1.3 千粒重46
- 2.2.1.4 种子发芽率46-47
- 2.2.2 各杂交组合一年生苗木的苗高、地径及分枝数47-49
- 2.2.2.1 各性状均值及标准差47-48
- 2.2.2.2 方差分析及遗传力估算48
- 2.2.2.3 多重比较48-49
- 2.2.3 各杂交组合二年生苗木的生长、分枝及叶片性状49-66
- 2.2.3.1 组合内单株间变异分析49-54
- 2.2.3.2 组合间变异分析54-56
- 2.2.3.3 性状方差分析56-57
- 2.2.3.4 生长性状多重比较57-58
- 2.2.3.5 性状遗传力分析58-59
- 2.2.3.6 性状间相关分析59-61
- 2.2.3.7 主成分分析61-64
- 2.2.3.8 聚类分析64-65
- 2.2.3.9 优良单株选择65-66
- 2.3 小结与讨论66-70
- 2.3.1 小结66-68
- 2.3.2 讨论68-70
- 3 杨树杂交亲本AFLP标记遗传变异分析70-94
- 3.1 材料与方法70-79
- 3.1.1 试验材料及其来源70-72
- 3.1.2 试剂及配制72-73
- 3.1.2.1 试剂来源72
- 3.1.2.2 配制提取DNA所需溶液72-73
- 3.1.3 DNA提取和检测73-74
- 3.1.3.1 DNA提取和纯化73-74
- 3.1.3.2 DNA检测74
- 3.1.4 AFLP分析74-79
- 3.1.4.1 接头和引物74
- 3.1.4.2 模板DNA准备74-75
- 3.1.4.3 DNA的双酶切和连接75
- 3.1.4.4 预扩增75-76
- 3.1.4.5 选择性扩增76
- 3.1.4.6 变性聚丙烯酰胺凝胶电泳76-78
- 3.1.4.7 结果记录78
- 3.1.4.8 数据统计分析78-79
- 3.2 结果与分析79-91
- 3.2.1 引物筛选79
- 3.2.2 标记多态性分析79-80
- 3.2.3 杨属种间及无性系间遗传变异80-87
- 3.2.3.1 白杨派种间和种内无性系间86-87
- 3.2.3.2 黑杨派种间和种内无性系间87
- 3.2.3.3 青杨派种间和种内无性系间87
- 3.2.4 杨属派间遗传变异87-89
- 3.2.4.1 白杨派与黑杨派、青杨派及胡杨派间88
- 3.2.4.2 黑杨派与青杨派、胡杨派间88
- 3.2.4.3 青杨派与胡杨派间88-89
- 3.2.5 杨属种及无性系聚类分析89-91
- 3.2.5.1 各派内种间聚类结果89-91
- 3.2.5.2 派间聚类过程91
- 3.3 小结与讨论91-94
- 3.3.1 小结91-92
- 3.3.2 讨论92-94
- 4 杨树杂交亲本分子遗传距离与子代生长性状相关性研究94-105
- 4.1 材料与方法95-96
- 4.1.1 试验地概况95
- 4.1.2 试验材料95-96
- 4.1.2.1 杂交亲本及来源95
- 4.1.2.2 杂交亲本交配设计95-96
- 4.1.3 试验方法96
- 4.1.3.1 生长性状调查96
- 4.1.3.2 DNA提取及AFLP分析96
- 4.1.4 统计分析96
- 4.2 结果与分析96-102
- 4.2.1 杂交组合苗木生长性状均值、标准差及变异系数96
- 4.2.2 亲本间遗传距离及聚类分析96-99
- 4.2.3 亲本间遗传距离与子代生长性状相关分析99-100
- 4.2.4 遗传距离与生长性状的一元线性回归分析100-101
- 4.2.5 遗传距离与生长性状的二次抛物线回归分析101-102
- 4.3 小结与讨论102-105
- 4.3.1 小结102-103
- 4.3.2 讨论103-105
- 5 杨树杂交亲本与子代基因差异表达研究105-123
- 5.1 材料与方法105-112
- 5.1.1 试验材料及其生长量调查105-106
- 5.1.2 试剂106
- 5.1.3 DEPC处理水及器皿106
- 5.1.4 溶液配制106
- 5.1.5 锚定引物与随机引物106
- 5.1.6 RNA提取106-107
- 5.1.7 RNA样品中微量DNA去除107-108
- 5.1.8 mRNA差异显示108-112
- 5.1.8.1 cDNA第一链合成108
- 5.1.8.2 PCR扩增108-109
- 5.1.8.3 变性聚丙烯酰胺凝胶电脉109
- 5.1.8.4 差异cDNA片段的回收、再扩增和检测109-110
- 5.1.8.5 PCR产物的克隆和测序110-112
- 5.2 结果与分析112-121
- 5.2.1 杂交亲本及子代生长差异比较112-113
- 5.2.2 引物筛选113
- 5.2.3 杂交种间及杂交种和亲本间基因差异表达类型113-114
- 5.2.4 差异表达条带的二次扩增、克隆、测序、同源比较和功能推断114-121
- 5.3 小结与讨论121-123
- 6 结论及研究展望123-126
- 6.1 结论123-125
- 6.2 研究展望125-126
- 参考文献126-142
- 作者简介142-143
- 导师简介143-145
- 博士期间发表的论文及获奖成果145-146
- 致谢146
| 【引证文献】 | ||
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| 【参考文献】 | ||
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| 【共引文献】 | ||
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| 【同被引文献】 | ||
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| 【二级引证文献】 | ||
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| 【二级参考文献】 | ||
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| 【相似文献】 | ||
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