收藏本站
《北京林业大学》 2005年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

日本结楼草(Zoysia japonica Steud.)植株再生体系建立与DREB1A基因转化研究

齐春辉  
【摘要】:本研究通过单因素实验和多因素正交实验探讨了多个因素对日本结缕草(Zoysia japonica Steud.)不同外植体愈伤组织诱导及生长的影响,建立了高效的离体植株再生体系。在此基础上,通过基因枪轰击和农杆菌侵染对日本结缕草的遗传转化进行了研究,确立了两种转化方法的技术路线,并且将DREB1A基因转入日本结缕草不同品种中,以期获得更为抗旱、耐寒、耐盐碱的日本结缕草转基因新品系。通过近4年的研究,在以下几个方面取得了进展: 1、建立了日本结缕草离体植株再生体系。以成熟种子诱导愈伤组织,单因素实验和正交实验结果表明,选用品种‘Zenith’,在MS培养基中以植物凝胶作为凝固剂,添加2,4-D 5mg/L、6-BA或KT 0.1mg/L及CuSO_4 2.5mg/L的组合效果最好。无菌实生苗各部分中,胚轴的胚性愈伤诱导培养基可选用2~3mg/L的2,4-D,添加0.05mg/L 6-BA;MS培养基添加2~4mg/L 2,4-D即可诱导芽尖获得较高的胚性愈伤率,但芽尖不易操作。胚性愈伤组织继代时要仔细挑选,继代周期为24~33d。植株再生率取决于愈伤组织的质量,1/2MS+KT 0.2mg/L培养基由于符合体细胞胚的发育,效果较好。 2、确立了日本结缕草转化子筛选方案。对于基因枪法,采用延迟筛选的方式,愈伤组织轰击后恢复培养5d,然后转入含有50mg/L潮霉素的愈伤组织继代培养基上,每月继代一次,筛选2个月,抗性植株再生培养基中,潮霉素浓度降至20mg/L;对于农杆菌介导转化法,转化子筛选过程中潮霉素用量与基因枪转化系统相同,但附加200mg/L头孢霉素作为抑菌剂。 3、建立了日本结缕草基因枪转化体系。其技术要点为:1100psi的轰击压力下,选用直径为1μm的金粉、每枪500μg金粉+1μg DNA、6cm的轰击距离、轰击两次的基因枪转化参数,选择诱导4个月、继代培养25d左右的胚性愈伤组织进行基因枪轰击,靶材料在轰击前4h至轰击后12h间,培养于含有甘露醇及山梨醇各0.2M的高渗培养基上。 4、建立了日本结缕草农杆菌介导转化体系。主要采用以OD_(600)为0.5的农杆菌LBA4404菌液侵染转化经过预培养的胚性愈伤组织20min(0.08MPa真空处理5min),共培养2d后洗去农杆菌,将愈伤组织转至含潮霉素和头孢霉素的筛选培养基上。在工程菌液及共培养基中均添加100μM乙酰丁香酮。 5、获得了转入DREB1A基因的日本结缕草。以基因枪转化‘Zenith’、‘Liaoning’和‘Qingdao’3个品种,获得移栽成活的潮霉素抗性株系16株,‘Zenith’、‘Liaoning’和‘Qingdao’3个品种的抗性植株获得率分别5.6%、7.62%和2.08%。农杆菌介导转化‘Zenith’,获移栽成活抗性植株2株,抗性植株
【学位授予单位】:

知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 张朝军;范术丽;武芝霞;张雪妍;王玉芬;李付广;;棉花大田植株叶柄组织培养体系的建立[J];西北植物学报;2011年06期
2 许东婷;王俊丽;刘名飞;毕凯丽;宋韵霏;;华北蓝盆花的组织培养与植株再生[J];植物学报;2011年04期
3 朱晓仙;胡海涛;杨玲;;金樱子的组织培养与快速繁殖[J];江西林业科技;2011年04期
4 吴康云;陶莲;李正丽;邓英;孟平红;赵大芹;;叶用芥菜游离小孢子的培养及其植株再生[J];贵州农业科学;2011年08期
5 孙安妮;张延龙;牛立新;王仙芝;崔雅静;王润丰;;宜昌百合体细胞胚诱导及植株再生[J];西北农业学报;2011年08期
6 刁英;吴金平;赵玲玲;胡中立;;莲胚性愈伤组织诱导研究初报[J];湖北农业科学;2011年14期
7 李勇;;杉木愈伤组织诱导及植株再生[J];林业勘察设计;2011年01期
8 周春娥;朱凤荣;蔡兆奎;王灵灵;谷燕燕;;怀地黄花药培养与再生植株体系的建立[J];河南农业大学学报;2011年04期
9 冀宇奇;张立军;弓雪;崔震海;胡凯;;粳型超级稻胚性细胞悬浮系的建立及植株再生[J];江苏农业科学;2011年03期
10 冀爱青;吴国良;;果树体细胞胚胎发生研究进展[J];北方园艺;2011年13期
11 潘超美;陈良坚;赖珍珍;夏静;梁钻姬;郑芳昊;;华南忍冬离体快繁与植株再生的研究[J];时珍国医国药;2011年08期
12 李莺;罗明志;罗雯;郭春林;刘艳妮;;黄精的组织培养与植株再生[J];西北农业学报;2011年08期
13 曾斌;何天明;吴玉霞;王新;童莉;;新疆野生核桃的组织培养和植株再生[J];新疆农业科学;2011年07期
14 潘英文;林明光;王安石;;红掌工厂化育苗关键技术研究[J];安徽农业科学;2011年14期
15 蔡小东;张金晶;;木立芦荟茎段离体培养再生植株的研究[J];湖北农业科学;2011年12期
16 何月秋;祝志勇;;大花萱草新品种“御衣黄”组织培养及植株再生[J];江苏林业科技;2011年03期
17 李惠华;赖钟雄;苏明华;林玉玲;;龙眼胚性愈伤组织ACC合成酶基因(DL-ACS1)的克隆及表达分析[J];热带作物学报;2011年05期
18 黄余磊;吕枷薪;蒋明;李温平;张徐俞;邹清成;;单叶铁线莲Clematis henryi愈伤组织诱导与植株再生[J];浙江农业学报;2011年04期
19 闫爱玲;张国军;孙磊;徐海英;;“爱神玫瑰”葡萄杂交胚胚性愈伤组织诱导与保持的研究[J];北方园艺;2011年15期
20 肖宇;张朝红;支玉玺;徐炎;李志谦;王跃进;;葡萄花器官体细胞胚的诱导和植株再生[J];果树学报;2011年05期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 林秀莲;赖钟雄;;龙眼离体保存胚性愈伤组织的体胚发生及其遗传变异[A];中国遗传学会第八次代表大会暨学术讨论会论文摘要汇编(2004-2008)[C];2008年
2 林秀莲;赖钟雄;徐清锋;蔡俊杰;;11个龙眼品种的体胚发生与植株再生[A];全国“植物生物技术及其产业化”研讨会论文摘要集[C];2007年
3 郑洋;王金刚;龚束芳;樊金萍;车代弟;;唐菖蒲体细胞胚的诱导及植株再生[A];2007年中国园艺学会观赏园艺专业委员会年会论文集[C];2007年
4 李雪;韩烈保;曾会明;;多年生黑麦草高频再生体系的建立[A];中国草学会草坪专业委员会第六届全国会员代表大会及第九次学术研讨会论文汇编[C];2004年
5 贾利敏;贾利欣;;玉米组织培养和植株再生的研究现状[A];2003年内蒙古自治区自然科学学术年会优秀论文集[C];2003年
6 张允刚;郭小丁;;大蒜悬浮培养及有效植株再生[A];全国作物细胞工程与分子技术育种学术研讨会论文集[C];2003年
7 詹园凤;王广东;程志英;;大蒜体细胞胚胎发生及植株再生[A];第二届全国植物组织培养、脱毒快繁及工厂化生产学术研讨会论文集[C];2004年
8 郭余龙;李名扬;罗小英;裴炎;;用基因枪法将外源基因导入棉花胚性愈伤组织[A];重庆市遗传学会第一届学术年会暨纪念孟德尔规律再发现100周年学术讨论会论文集[C];2000年
9 张颖;柳玉晶;车代弟;;唐菖蒲胚性愈伤组织的诱导与观察[A];中国观赏园艺研究进展2008——中国园艺学会观赏园艺专业委员会2008年学术年会论文集[C];2008年
10 王江波;王毓美;贾敬芬;;海边香豌豆胚性愈伤组织的诱导和体细胞胚发生[A];中国细胞生物学学会第七次会议论文摘要汇编[C];1999年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 张福耀;新型饲草高粱——晋草1号[N];中国畜牧报;2005年
2 高明书;高羊茅草坪的老化与管理[N];中国花卉报;2005年
3 路凤鸣;辉煌的历程 灿烂的明天[N];山西经济日报;2009年
4 省农科院蔬菜所 刘广勤 邱孟斌;蔬菜受灾 及早补救[N];江苏农业科技报;2006年
5 史俊庭 谭永江;构筑抗小麦穗发芽育种体系[N];江苏农业科技报;2004年
6 省农科院粮油作物所(050031)王淑芳;甘薯翻蔓是帮倒忙[N];河北科技报(农村版);2000年
7 慈万辛;林经理谈健宝牧草[N];农民日报;2001年
8 环爱华;稻田寄种黑麦草[N];农民日报;2002年
9 姜山;高羊茅草坪老化原因及复壮措施[N];中国花卉报;2009年
10 王丰;大豆长期连作根腐病发生重[N];江苏农业科技报;2011年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 齐春辉;日本结楼草(Zoysia japonica Steud.)植株再生体系建立与DREB1A基因转化研究[D];北京林业大学;2005年
2 杜丽;香樟体胚发生途径的植株再生体系的建立以及农杆菌介导遗传转化的初步研究[D];华中农业大学;2005年
3 阳永学;地锦体胚发生和遗传转化体系的建立及离体筛选耐盐植株的初步研究[D];华中农业大学;2007年
4 孙丽芳;玉米胚性愈伤组织形成相关基因克隆及功能分析[D];吉林大学;2012年
5 谢德意;棉花体细胞胚胎发生能力比较及ipt基因的遗传转化[D];华中农业大学;2007年
6 吴慎杰;陆地棉农杆菌介导遗传转化体系的优化与利用[D];南京农业大学;2006年
7 汪静儿;棉花原生质体培养与体细胞杂交研究[D];浙江大学;2007年
8 张学英;草莓(Fragaria ananassa Duch.)原生质体培养及植株再生研究[D];河北农业大学;2004年
9 付莉莉;棉花原生质体“供—受体”融合及遗传转化研究[D];华中农业大学;2009年
10 曹雅君;草坪遗传改良基因资源的发掘及草坪型高羊茅抗逆基因工程的初步研究[D];复旦大学;2006年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 牛遇达;北五味子体细胞胚发生的研究[D];东北林业大学;2007年
2 韩改英;陆地棉抗病品种中521植株再生的研究[D];河北农业大学;2005年
3 赵小强;草地早熟禾原生质体培养及体细胞杂交[D];甘肃农业大学;2009年
4 华梅;多花相思离体培养与再生体系的建立[D];福建农林大学;2009年
5 唐蜻;日本结缕草成熟胚愈伤诱导及植株再生的研究[D];华中农业大学;2003年
6 安佰义;牡丹组培离体再生系统的建立[D];东北林业大学;2005年
7 张建康;爱沙木组织培养与植株再生研究[D];四川农业大学;2005年
8 任华;川滇金丝桃组织培养及植株再生研究[D];四川农业大学;2007年
9 杨敏;流苏相思组织培养与再生体系的建立[D];福建农林大学;2008年
10 臧萌;流苏相思优良无性系离体培养与快速繁殖技术研究[D];福建农林大学;2009年
中国知网广告投放
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978