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《北京林业大学》 2006年
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根癌农杆菌介导的PEAMT基因转化菊花的研究

吴月亮  
【摘要】: 菊花(Chrysanthemum morifolium Ramat.)是中国的传统名花,也是世界上最重要的观赏花卉之一。地被菊是菊花适于陆地栽培的一个品种群,其花色丰富,观赏性好,覆盖能力强,具有广阔的应用前景。但由于城市水资源的缺乏和盐渍化的日益严重,限制了地被菊的推广。通过根癌农杆菌介导的方法,将甜菜碱合成相关酶的基因PEAMT转入地被菊基因组中,培育出抗逆性更强的新品种,对地被菊在全国大面积推广,更好的为园林绿化服务具有重要意义。 本研究获得的主要结果如下: 1、建立了地被菊品种‘玉人面’、‘铺地金’的转化受体系统。以MS为基本培养基,采用6-BA和NAA两种激素9种不同配比的组合,从10个地被菊品种中筛选出‘玉人面’、‘铺地金’和‘北林红’3个高频再生品种,再生率分别为98%、96%和96%;‘玉人面’的再生培养基为:MS+6-BA1mg/L+NAA0.1mg/L;‘铺地金’的再生培养基为:MS+6-BA2mg/L+NAA1mg/L;‘北林红’的再生培养基为:MS+6-BA1mg/L+NAA0.5mg/L。同时还研究了不同的外植体类型,继代次数对再生的影响,叶片再生能力最高,但随着继代次数的增加,部分品种叶片再生能力有下降的趋势。研究了‘玉人面’和‘铺地金’对抗生素Kan的敏感性,结果表明7.5mg/L的Kan是菊花品种‘玉人面’叶片外植体筛选培养的临界耐受浓度,10mg/L的Kan是‘铺地金’叶片筛选培养的临界浓度;培养基中浓度为250mg/L的头孢霉素能够很好的抑制农杆菌的生长,且没有影响叶片外植体的再生率和不定芽数,可作为‘玉人面’和‘铺地金’的抑菌性抗生素。 2、建立了地被菊‘玉人面’的遗传转化体系:以预培养12h的叶片为转化材料,用浓度OD600为0.4的携带有PEAMT基因的农杆菌菌液侵染10min,24℃共培养2d,延迟培养4d,用选择压为7.5mg/L的Kan连续筛选直至有不定芽生成。待不定芽长至1cm左右时转入附加20mg/L Kan的1/2MS生根培养基中,继续筛选,并对生根抗性植株进行了PCR和Southern blotting检测,103株生根抗性苗中,有9株呈PCR阳性反应,获得特异性扩增条带,其中4个被检植株产生Southern杂交信号,证明PEAMT基因已整合到地被菊基因组中,外源基因主要是单拷贝插入。 3、从转入PEAMT基因的‘玉人面’株系中,选取生长正常的4个株系及非转
【学位授予单位】:北京林业大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2006
【分类号】:S682.11

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【引证文献】
中国期刊全文数据库 前4条
1 何俊平;陈发棣;陈素梅;房伟民;缪恒彬;罗火林;;石蒜凝集素基因转化切花菊及抗蚜性鉴定[J];西北植物学报;2009年11期
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中国重要会议论文全文数据库 前1条
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中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 孙磊;利用双T-DNA载体系统获得无选择标记转基因菊花[D];北京林业大学;2009年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 李君君;F3'5'H基因超表达载体构建及转化菊花的初步研究[D];河南大学;2011年
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8 王娟;农杆菌介导调节基因Lc转化菊花的研究[D];北京林业大学;2009年
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【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
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中国博士学位论文全文数据库 前2条
1 郑丽;根癌农杆菌介导SAG_(12)-ipt和3DN-iaaL基因转化切花菊及抗早衰研究[D];西南农业大学;2003年
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【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
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9 朱玉庆;唐薇;罗振;孙学振;董合忠;;转AhCMO基因棉花品系苗期耐盐性的比较研究[J];山东农业科学;2008年06期
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中国重要会议论文全文数据库 前10条
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4 任洪艳;孙霞;郑成淑;束怀瑞;;利用cDNA-AFLP技术筛选菊花开花相关基因[A];中国观赏园艺研究进展2011[C];2011年
5 景珊;李庆卫;;地被茶菊新品种选育研究初报[A];中国观赏园艺研究进展2011[C];2011年
6 袁慧红;陈菁珏;吴昀;郑日如;常乐;夏宜平;;五种野生宿根花卉的耐阴性研究[A];中国观赏园艺研究进展2011[C];2011年
7 胡昊;熊威;毛静;王彩云;;蚜虫高感大菊品种叶片离体再生体系的建立[A];中国观赏园艺研究进展2011[C];2011年
8 王蕾;苏媚;郑必平;谈建中;;菊花花色嵌合体Su-07的腋芽培养与植株再生[A];中国球根花卉研究进展2011[C];2011年
9 翟红;刘庆昌;;甘薯及其近缘野生种遗传转化的研究[A];作物科学研究理论与实践——'2000作物科学学术研讨会文集[C];2001年
10 刘录祥;赵林姝;梁欣欣;郑企成;刘强;王晶;郭会君;赵世荣;陈文华;;基因枪法获得逆境诱导转录因子DREB1A转基因小麦的研究[A];2003年全国作物遗传育种学术研讨会论文集[C];2003年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 王庆莲;苹果多胺和脯氨酸合成代谢相关基因的功能鉴定[D];山东农业大学;2009年
2 张俊忠;东祁连山高寒草地土壤真菌多样性研究[D];甘肃农业大学;2010年
3 李瑛;延迟荧光信息处理技术在植物光合及逆境生理检测中的应用[D];大连海事大学;2010年
4 李玉华;高山离子芥再生苗响应低温和干旱的生理机制研究[D];兰州大学;2010年
5 王俊峰;氮、水和温度对羊草有性生殖及克隆生长的影响[D];东北师范大学;2010年
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7 梁勇;白念珠菌高铁还原酶基因表达调控及Aft2p转录因子的功能研究[D];南开大学;2010年
8 李瑞利;两种典型盐生植物耐盐机理及应用耐盐植物改良盐渍土研究[D];南开大学;2010年
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中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 张庆福;枳精氨酸脱羧酶基因(PtADC)转化烟草提高抗脱水研究[D];华中农业大学;2010年
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3 高胡静;百合离体条件下的耐盐性评价和EMS诱变育种初步研究[D];华中农业大学;2010年
4 朱晓娟;重组免疫毒素抗c-Met/PE38KDEL的构建、表达、纯化及初步鉴定[D];南京医科大学;2009年
5 钱静;携带Apoptin双调控溶瘤腺病毒治疗肝癌的研究[D];浙江理工大学;2010年
6 辛宁;PDX-1真核表达载体构建及其在大鼠骨髓间充质干细胞中的表达[D];郑州大学;2010年
7 陆玉成;AMF基因在食管鳞癌细胞株中的表达及功能初步分析[D];郑州大学;2010年
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9 李静;父源性HLA-A基因与子痫前期相关性研究[D];郑州大学;2010年
10 张燕松;肾移植术后患者PBMCs中NF-κB的活性和TNF-α mRNA的表达研究[D];郑州大学;2010年
【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 范志强,杜希华,蹇兆忠,李景涛,解孝满;辣椒组织培养中褐变问题的研究[J];山东农业科学;2000年06期
2 李春贺;阴祖军;刘玉栋;沈法富;;盐胁迫条件下不同耐盐棉花miRNA差异表达研究[J];山东农业科学;2009年07期
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4 于敏,袁萍萍,章莹莹;植物凝集素的部分生物学作用分析[J];安徽农业科学;2002年01期
5 孙海燕,罗兵,喻德跃;次生代谢抗虫基因工程研究进展[J];安徽农业科学;2005年10期
6 李凤玲;徐培洲;肖祎;张红宇;汪旭东;吴先军;;植物凝集素及其在抗虫基因工程中的应用[J];安徽农业科学;2006年03期
7 孙磊;张启翔;;地被菊‘北林黄’再生体系的建立及其抗生素敏感性研究[J];安徽农业科学;2006年19期
8 李新玲;杨传平;徐香玲;曲敏;;与逆境胁迫相关的rd29A启动子和CBF2基因的克隆及其表达载体构建[J];安徽农业科学;2007年13期
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10 王琳;王林嵩;王丽;孙向东;宗秀征;李芳军;高雅;;Hg~(2+)胁迫对小麦幼苗POD、CAT和SOD同工酶的影响[J];安徽农业科学;2008年35期
中国重要会议论文全文数据库 前2条
1 黄河;王琳琳;王顺利;曹华雯;戴思兰;;适于cDNA-AFLP的甘菊RNA快速高效提取方法[A];中国观赏园艺研究进展 2009[C];2009年
2 孙宪芝;郑成淑;王秀峰;梁芳;;高温胁迫下外源Ca~(2+)对菊花叶片光合机构与活性氧清除酶系统的影响[A];中国园艺学会十届二次理事会暨学术研讨会论文摘要集[C];2007年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 郑丽;根癌农杆菌介导SAG_(12)-ipt和3DN-iaaL基因转化切花菊及抗早衰研究[D];西南农业大学;2003年
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3 洪波;逆境诱导转录因子DREB1A基因转化地被菊花的研究[D];中国农业大学;2005年
4 左志锐;百合耐盐机理及其遗传多样性研究[D];中国农业大学;2005年
5 吕晋慧;根癌农杆菌介导的AP1基因转化菊花的研究[D];北京林业大学;2005年
6 刘振林;甘菊BADH基因启动子的克隆及瞬时表达分析[D];北京林业大学;2006年
7 孟丽;蓝色花形成关键基因的分离及其表达分析[D];北京林业大学;2006年
8 赵飞;小菊锌指蛋白基因的表达分析及耐盐差异蛋白的分离鉴定[D];东北林业大学;2007年
9 孙磊;利用双T-DNA载体系统获得无选择标记转基因菊花[D];北京林业大学;2009年
10 曹华雯;甘菊BADH基因启动子功能鉴定及诱导型启动子的分离[D];北京林业大学;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 晁岳恩;根癌农杆菌介导的菊花遗传转化体系的建立及ipt基因的导入[D];西南农业大学;2002年
2 任永霞;利用农杆菌介导法将类胡萝卜素合成酶基因LycB导入番茄、菊花的研究[D];中国人民解放军军需大学;2003年
3 刘彦泓;雪花莲凝集素基因转化菊花及转基因植株抗蚜性研究[D];辽宁师范大学;2003年
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10 梁慧;菊花高频再生体系建立及根癌农杆菌介导遗传转化体系的优化[D];西南大学;2006年
【二级引证文献】
中国期刊全文数据库 前8条
1 张文;李振萍;王艳;徐娜;姜长阳;;泥胡菜的组织培养及高效无性系建立的研究[J];安徽农业科学;2009年06期
2 于红芳;许刚;李永华;张丽英;;菊花品种唐宇金秋组织培养研究[J];河南农业科学;2009年11期
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中国重要会议论文全文数据库 前1条
1 牛雅静;李青;戴思兰;;切花菊‘神马'和‘黄秀芳'成熟花瓣再生体系的建立[A];中国观赏园艺研究进展(2010)[C];2010年
中国博士学位论文全文数据库 前1条
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中国硕士学位论文全文数据库 前10条
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6 陈琳;切花菊转DdICE1基因研究[D];南京农业大学;2011年
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9 孙佳琦;以pmi为安全选择标记的转基因地被菊研究[D];北京林业大学;2012年
10 石晓;抑制菊花DgLsL基因表达的RNAi载体构建及其遗传转化[D];中国农业科学院;2012年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
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中国重要会议论文全文数据库 前1条
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【相似文献】
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中国重要报纸全文数据库 前10条
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6 武深秋;菊花管护技术[N];福建科技报;2006年
7 王媛;让奥运之菊尽情盛开[N];人民日报海外版;2006年
8 孙建兵;菊花春节绽放栽培技术[N];山西科技报;2006年
9 刘军;盆栽菊花的插芽儿方法[N];中国花卉报;2006年
10 本报记者 郭金凤;中山小榄菊更香[N];中国花卉报;2007年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 吴月亮;根癌农杆菌介导的PEAMT基因转化菊花的研究[D];北京林业大学;2006年
2 陆一鸣;短芒大麦盐胁迫相关基因的克隆及其功能分析[D];中国人民解放军军需大学;2003年
3 方连玉;盐胁迫对欧洲赤松光合作用的影响及耐盐性评价[D];东北林业大学;2011年
4 于中连;烟草NADPH氧化酶在Na~+、Cu~(2+)胁迫中的活性变化及其作用[D];中国农业大学;2005年
5 杜伟;诱导型激活拟南芥突变体库的构建以及AtCRK3生化、表达分析[D];武汉大学;2005年
6 严顺平;水稻响应盐胁迫和低温胁迫的蛋白质组研究[D];中国科学院研究生院(上海生命科学研究院);2006年
7 史仁玖;多枝赖草(Leymus multicaulis)盐胁迫应答相关基因的克隆及表达分析[D];南京农业大学;2005年
8 刘永霞;硅对金丝小枣盐胁迫的缓解效应及其机理[D];南京林业大学;2007年
9 吴雪霞;外源一氧化氮对盐胁迫下番茄幼苗生理特性影响的研究[D];南京农业大学;2007年
10 王俊生;延迟荧光检测技术及其在光合能力与胁迫检测中的应用[D];哈尔滨工业大学;2007年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 蔡智军;盐胁迫下转耐盐基因(betA基因)小黑杨的生理指标检测及耐盐性分析[D];东北林业大学;2004年
2 周俊山;NaCl对二色补血草光合作用的影响[D];山东师范大学;2007年
3 白杰英;盐胁迫短芒大麦cDNA文库的构建及其甜菜碱醛脱氢酶基因的克隆[D];中国人民解放军军需大学;2003年
4 王玉清;NO提高黄瓜耐盐性的生理机制研究[D];浙江大学;2005年
5 徐保红;盐胁迫下灰绿藜生理生化特性的研究[D];新疆大学;2008年
6 李金华;利用基因工程技术改良水稻耐盐性的初步研究[D];四川农业大学;2003年
7 崔利辉;盐碱胁迫下山葡萄嫁接苗生理生化特性研究[D];吉林农业大学;2007年
8 康浩;互花米草生理生化特性对盐胁迫的响应[D];广西师范大学;2010年
9 玉云祎;转基因菊花遗传分析和杂交育种的研究[D];北京林业大学;2003年
10 刘晓红;菊花无土栽培研究[D];北京林业大学;2004年
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