Hsa-mir-217在胰腺导管腺癌中的表达及功能的初步验证

【摘要】：胰腺导管腺癌是一种常见的恶性肿瘤,预后差,5年生存率小于5%。阐明其发病机制和寻找新的治疗靶点,是众多学者研究的热点。MicroRNA (miRNA)是一种具有转录后调节作用的内源性非编码RNA分子,肿瘤中差异表达的1miRNA可起到癌基因或抑癌基因的作用,胰腺导管腺癌中hsa-mir-217表达显著下调,分析其可能在胰腺癌发生发展过程中发挥作用,但结果不清。本研究以人胰腺导管腺癌组织及细胞系为研究材料,检测hsa-mir-217的表达并探讨其功能及靶基因,旨在为胰腺导管腺癌的治疗寻找新的靶点。采用锁定核酸原位杂交及realtime RT-PCR的方法对胰腺导管腺癌组织及细胞系中hsa-mir-217表达进行检测,发现在64.3%(9/14)癌组织及所有7例细胞系中hsa-mir-217的表达都显著下调；采用构建的hsa-mir-217表达载体、合成的pre-mir-217前体和anti-mir-217抑制剂进行细胞转染,发现hsa-mir-217体外可抑制胰腺导管腺癌细胞PANC-1及MIA PaCa-2的增殖及非锚着依赖性生长,体内可抑制PANC-1移植瘤的生长,hsa-mir-217体内外均发挥抑癌基因的作用；用生物信息学软件对hsa-mir-217的靶基因预测及进一步验证发现：7种胰腺癌细胞系中hsa-mir-217表达与KRAS蛋白表达呈负相关；同时在PANC-1及MIA PaCa-2中恢复hsa-mir-217的表达可抑制KRAS蛋白表达及下游p-AKT活性,而在MIAPaCa-2中降低hsa-mir-217的水平则升高KRAS蛋白的表达及细胞的非锚着依赖性生长能力；报告基因实验进一步证实KRAS是hsa-mir-217的直接靶基因。这些结果提供了一种潜在的以miRNA为基础的胰腺癌治疗方法。

【关键词】：胰腺癌 microRNA hsa-mir-217 KRAS 报告基因
【学位授予单位】：北京协和医学院
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R735.9
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