收藏本站
《北京协和医学院》 2009年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

壳聚糖增强重组腺病毒转导效率及口服免疫效果初步研究

钟辉  
【摘要】:5型重组腺病毒载体(rAdv)因具有基因转导效率高、病毒载体滴度高及能感染非复制相细胞等多种优点而得到广泛应用,目前我国已经有两种基于腺病毒的抗肿瘤药物得到批准。但由于rAdv的基因转导主要是通过柯萨奇病毒-腺病毒受体(CAR)介导,导致rAdv对CAR受体表达缺失的细胞基因转导效率低下。因此研究非CAR受体依赖的、高效、低毒及简单易行的促进rAdv基因转导效率的方法十分必要。 壳聚糖是一种天然的阳离子多糖,具有无毒、生物相容性好、生物可降解及无免疫原性等多种优点。但是其在生理pH条件下(pH7.4)不溶的特性限制了其生物学应用。已有的壳聚糖促进rAdv基因转导效率的实验需要特殊的酸性pH条件(pH6.4),限制了其应用,需要开发新的方法。鉴此,本研究拟探索在生理pH条件下促进rAdv的基因转导效率新的壳聚糖溶解方法,阐明其促进基因转导能力,并在小鼠体内测试其促进口服rAdv免疫效果,为壳聚糖用于促进rAdv介导的基因治疗和疫苗免疫效果提供基础。 本研究首先建立了促进壳聚糖在pH7.4条件下溶解的方法。经过大量筛选,我们发现利用NaHCO3溶液可以实现壳聚糖在生理pH条件下的溶解。结果显示,该壳聚糖溶液具有明显的生物学效应,可以在生理pH条件下显著促进rAdv在多种细胞上的基因转导效率。在CAR受体缺陷的细胞(CHO、DC2.4、RD、B16细胞系)中,壳聚糖碳酸氢钠溶液可以将rAdv的基因转导效率提高8-20倍;而在CAR受体高表达的细胞系(A549和HepⅡ),壳聚糖碳酸氢钠溶液也可以将rAdv的基因转导效率提高1.5倍左右。壳聚糖碳酸氢钠溶液的促进转导作用不受培养基中血清及rAdv纯度的影响,对抗Ad5血清也有一定的耐受性。说明壳聚糖碳酸氢钠溶液可以非CAR受体依赖、高效、低毒及简便易行的促进rAdv基因转导效率。 在观察了壳聚糖碳酸氢钠溶液在体外促进rAdv基因转导效率之后,我们观察该新溶液是否具有在体应用的价值。我们发现在壳聚糖碳酸氢钠溶液基础上研制的壳聚糖制剂可以显著提高rAdv对模拟胃液环境的耐受性,且该作用可以被海藻糖进一步加强。相对于口服单独给予表达轮状病毒VP6基因的重组腺病毒(rAdv-VP6)疫苗,口服给予小鼠rAdv-VP6疫苗的壳聚糖制剂可以显著提高免疫后小鼠血清抗体阳转率以及抗体滴度,并可诱导粘膜器官抗原特异性IgA反应。轮状病毒攻击保护试验证实其能显著降低轮状病毒攻击后小鼠粪便中的排毒量。结果表明,该壳聚糖制剂可以显著提高口服rAdv-VP6的免疫效果及攻毒保护效果。 综上所述,本研究首次建立了一种能促进壳聚糖在生理pH条件下溶解的方法,该溶液不仅在体外可以促进rAdv的基因转导效率,其相应口服制剂还可以增强口服重组腺病毒的免疫效果及保护作用,为其在基因治疗和重组疫苗中的应用提供了基础。
【学位授予单位】:

知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 王爱勤,薛佐良,赵生敏,曹农,贾宝全;医用壳聚糖膜的制备与性能研究[J];北京生物医学工程;1996年01期
2 张卫国,吕德成,姜长明,吴春明,汤欣,孙立众;壳聚糖膜预防屈肌腱粘连的临床应用研究[J];医师进修杂志;2001年02期
3 杨丕山,庄昭霞,孙钦峰,李振玉;壳聚糖膜促进牙周骨再生的实验研究[J];山东医科大学学报;1998年03期
4 卢霞;应国清;应雪肖;;壳聚糖在药物缓释中的应用[J];药物生物技术;2006年03期
5 黄凌;许零;翟茂林;;甲壳素及其衍生物在生物修复材料中的应用研究[J];中华损伤与修复杂志(电子版);2007年06期
6 李志宏;武继民;关静;黄姝杰;李瑞欣;郭勇;张西正;;壳聚糖共混改性对胶原蛋白GTR膜性能的影响[J];医用生物力学;2009年S1期
7 孙钦峰,庄昭霞,杨丕山,曹宗顺,卢凤琦,李振玉;壳聚糖膜促进牙周新附着的实验研究[J];山东医科大学学报;1998年04期
8 方华丰,周宜开,袁津玮,任恕;壳聚糖作为敏感膜材料的研究[J];同济医科大学学报;2000年03期
9 侯巍;冯世庆;孔晓红;张辉;陈家童;王沛;李晖;郭世绂;;转基因雪旺细胞与壳聚糖的相容性[J];中华实验外科杂志;2006年09期
10 曹晶;孙淑爱;卢凤琦;;壳聚糖复合膜降解性研究[J];中国公共卫生;2007年02期
11 陈百成,郭斌,赵振拴,高石军,邵德成,王飞;壳聚糖膜置入预防膝关节术后粘连的实验研究[J];中华骨科杂志;2002年12期
12 姚子昂,韩宝芹,吴海歌,刘万顺;壳聚糖相对分子量对壳聚糖膜与角膜基质细胞相容性的影响[J];中国生物医学工程学报;2005年04期
13 汪浩;;壳聚糖基生物医用材料研究新进展[J];云南中医中药杂志;2006年04期
14 周永国;杨越冬;侯文龙;于九皋;;化学修饰壳聚糖的血液相容性[J];高分子通报;2008年06期
15 李若慧;程艳玲;;以壳聚糖为载体的药物新剂型[J];北京联合大学学报(自然科学版);2008年03期
16 季娟娟;丁仲鹃;杨雪莲;贾伟;;壳聚糖膜对成骨细胞的毒性研究[J];实用口腔医学杂志;2008年05期
17 周静艳;孙卫斌;王娟;储成林;卢春;;壳聚糖对转染hBMP2基因的NIH3T3细胞相容性研究[J];南京医科大学学报(自然科学版);2006年09期
18 金中秋;商旭敏;周和政;周雄;张文强;陈华新;王百川;阎玉华;高玉香;;壳聚糖膜缓释给药系统在小梁切除术中的应用[J];眼科新进展;2007年01期
19 郑磊;崔慧斐;;壳聚糖在周围神经损伤修复中的应用[J];中国生化药物杂志;2009年03期
20 朱昌来;李惠芳;林琳;张天一;;壳聚糖-镁膜体外生物相容性的初步研究[J];中国病理生理杂志;2009年06期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 刘传刚;高林;;两种类型增塑剂对壳聚糖膜性能的影响[A];第七届中国功能材料及其应用学术会议论文集(第5分册)[C];2010年
2 吴昊;姚珍;;壳聚糖玻璃化转变温度的测定研究[A];“国际化学年在中国”——中国化学会第三届全国热分析动力学与热动力学学术会议暨江苏省第三届热分析技术研讨会论文集[C];2011年
3 郑静;杨俊玲;;壳聚糖液晶的制备及表征[A];“力恒杯”第11届功能性纺织品、纳米技术应用及低碳纺织研讨会论文集[C];2011年
4 吴俊红;王家俊;孙辉;许寅;郭丽;刘亚平;;增塑剂对壳聚糖/羟丙基甲基纤维素共混膜的改性研究[A];第十三届全国包装工程学术会议论文集[C];2010年
5 田京辉;徐建斌;王玮;钱佩佩;曹凯;李晓曼;;吡拉西坦体外透膜释放的研究[A];中国成人医药教育论坛[2010(3)][C];2010年
6 刘伯基;沙宪政;;植入式葡萄糖传感器膜材料组织相容性研究——壳聚糖与Nafion植入的比较[A];中国生物医学工程学会成立30周年纪念大会暨2010中国生物医学工程学会学术大会报告论文[C];2010年
7 贺庆;敖强;公衍道;张秀芳;;不同脱酸方法对壳聚糖膜纳米拓扑结构及细胞相容性的影响[A];第十一次中国生物物理学术大会暨第九届全国会员代表大会摘要集[C];2009年
8 刘小云;王华;王立生;;重组腺病毒介导的Spred-2过表达抑制K562细胞增殖[A];第12届全国实验血液学会议论文摘要[C];2009年
9 张雪;邬开朗;乐鑫;朱应;吴建国;;重组腺病毒表达siRNA抑制SARS病毒基因的研究[A];2006年度学术研讨会论文摘要汇编[C];2006年
10 贾红宇;卢安卫;徐世国;蒋建文;;CTLA-4基因重组腺病毒的构建及其免疫活性的研究[A];2007年浙江省器官移植学术会议论文汇编[C];2007年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 聂柳慧 韩永生;用壳聚糖膜作保鲜包装材料的研究[N];中国包装报;2011年
2 吴一福;重组腺病毒核糖核酸酶载体问世[N];中国医药报;2007年
3 吴一福;重组腺病毒核糖核酸酶载体问世[N];中国医药报;2005年
4 记者 应洪舒;我专家发现 Adp53基因对肿瘤治疗有热增效作用[N];中国医药报;2006年
5 李定纲 大红;打破门户之见多兵种作战[N];健康报;2006年
6 余运西 王雪飞;“自杀基因”让癌细胞转移“停步”[N];健康报;2005年
7 王玲 韩霁;科技创新成果惠及亿万人民[N];经济日报;2006年
8 肖绍文 张珊文;肿瘤基因治疗聚焦p53基因[N];中国医药报;2005年
9 青锋;HSV-2疫苗针对性强[N];医药经济报;2002年
10 习文;华神集团在“大转折”前夜[N];医药经济报;2005年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 钟辉;壳聚糖增强重组腺病毒转导效率及口服免疫效果初步研究[D];北京协和医学院;2009年
2 俞丹;壳聚糖对金属钯的吸附机理研究及在电磁屏蔽用导电织物制备中的应用[D];东华大学;2011年
3 刘也卓;壳聚糖改性及壳聚糖基膜色谱材料的设计与开发[D];复旦大学;2012年
4 李友良;基于碱性溶剂体系制备壳聚糖新材料的研究[D];浙江大学;2012年
5 冯永巍;壳聚糖的化学改性及其衍生物的抑菌活性研究[D];江南大学;2011年
6 刘鹏;淀粉/聚乳酸/壳聚糖共混抗菌材料制备中若干基础科学问题的研究[D];华南理工大学;2010年
7 林军;诱导型复合壳聚糖骨引导膜的生物学性能评价[D];浙江大学;2011年
8 王永亮;壳聚糖水凝胶诱导合成纳米Fe_3O_4及同心层状磁性水凝胶构建[D];哈尔滨工业大学;2011年
9 丁珊;胆固醇改性壳聚糖的生物学评价及其矿化性能[D];暨南大学;2012年
10 崔军;壳聚糖/β-甘油磷酸钠复合GBR屏障膜的制备及其性能研究[D];山东大学;2011年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 魏现航;壳聚糖在印染废水处理中的应用[D];青岛大学;2010年
2 赵振拴;壳聚糖膜预防膝关节术后粘连的实验研究[D];河北医科大学;2002年
3 李浩;N-琥珀酰壳聚糖的制备及其应用研究[D];浙江大学;2011年
4 涂智峰;壳聚糖透明质酸复合物止血粉在鼻腔止血应用的可行性研究[D];暨南大学;2010年
5 鄂玮;海藻酸钠—壳聚糖生物膜在引导骨再生中的实验研究[D];大连医科大学;2010年
6 赵朋;关节软骨修复用壳聚糖-PEG水凝胶的制备及其性能研究[D];武汉理工大学;2010年
7 卢娟;壳聚糖基药物缓释材料的制备及性能研究[D];西南大学;2011年
8 李爱珍;明胶—壳聚糖可食性复合膜的制备与应用研究[D];山东轻工业学院;2010年
9 吴清华;TGF-β3基因转染MSCs复合壳聚糖的组织工程支架构建的实验研究[D];重庆医科大学;2011年
10 李洁;非穿透性滤过手术联合壳聚糖膜植入的动物实验研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2005年
中国知网广告投放
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978