收藏本站
《北京协和医学院》 2010年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

端粒缩短影响原发性高血压及其并发症的发生

黄馨  
【摘要】:目的建立包括Q-FISH、Flow-FISH、Southern Blot和RT-PCR等多种检测细胞端粒长度的技术平台;并选择其中一种方法检测767例原发性高血压人群和正常对照人群5年前后外周血单个核细胞端粒长度,试图明确端粒长度与原发性高血压之间的关系。 方法制备mTerc-/-小鼠及正常野生型小鼠外周血单个核细胞悬液,用端粒特异的FITC-PNA探针标记后激光共聚焦显微镜观察荧光数目及强度;制备mTerc-/-小鼠及正常野生型小鼠外周血单个核细胞悬液,用端粒特异的FITC-PNA探针标记后流式细胞仪分析并计算细胞荧光强度;提取mTerc-/-小鼠及正常野生型小鼠外周血单个核细胞基因组DNA,以293T细胞基因组DNA为标准品,通过RT-PCR方法测定细胞端粒相对长度;提取人外周血单个核细胞基因组DNA, HinfⅠ和RsaⅠ酶切后经Southern Blot方法测定细胞端粒绝对长度;提取900例人外周血单个核细胞基因组DNA,通过RT-PCR方法测定细胞端粒相对长度。 结果Flow-FISH方法测得mTerc-/-小鼠外周血单个核细胞端粒相对长度为0.5345,RT-PCR方法测得mTerc-/-小鼠外周血单个核细胞端粒相对长度为0.5717,其结果基本一致;Southern Blot方法测得10例人外周血单个核细胞端粒绝对长度与RT-PCR方法所测端粒相对长度结果基本一致,经统计学分析具有高度相关性(P0.01);RT-PCR方法测得767例人外周血单个核细胞端粒相对长度,统计学分析表明原发性高血压组平均端粒长度(中位数=0.57,IQR=0.48 to 0.72)较正常对照组(中位数=0.67,IQR=0.53 to 0.93)短,两者有显著性差异(P0.001);所有研究对象端粒长度随年龄增加而下降,但原发性高血压组端粒长度下降速率较快(P=0.038);所有研究对象中在5年内发生冠脉疾病者平均端粒长度与未发病者相比较短(P0.001),原发性高血压组在5年内发生冠脉疾病者平均端粒长度与未发病者相比较短(P=0.031);正常对照组在5年内发生冠脉疾病者平均端粒长度与未发病者相比较短(P0.001)。 结论成功建立了检测细胞端粒长度的Q-FISH、Flow-FISH、Southern Blot和RT-PCR技术平台,其结果稳定可靠,具有高度相关性,适用于不同样本来源的细胞端粒长度的检测。对767例原发性高血压人群和正常对照人群5年前后外周血单个核细胞端粒长度的检测结果提示,人外周血单个核细胞的端粒缩短不但是原发性高血压发病的重要危险因素,而且还影响了高血压并发症的发生;端粒缩短可以作为生物衰老和发生衰老相关疾病的生物学标记之一。该部分实验首次验证了端粒缩短与高血压预后的因果关系。 目的构建可高效感染小鼠造血干细胞的shRNA重组慢病毒载体,并研究其在小鼠造血系统中的长期稳定表达。 方法用FsFv启动子更换p-cMv慢病毒载体中的cMv启动子,将p-cMv和重组并鉴定正确的p-SFFV慢病毒载体与辅助病毒载体PAXZ和PMDZG混合后,采用磷酸钙方法共转染293T包装细胞,获得具有感染能力的成熟慢病毒:经超速离心获得高滴度的病毒悬液,体外感染经流式细胞仪分选并体外培养的小鼠骨髓造血干细胞;流式分析其表达效率后,选取感染效率较高的p-sFFv慢病毒载体感染小鼠骨髓造血干细胞,并通过竞争性骨髓移植技术输入放射线照射后的免疫抑制小鼠体内;在移植后4周和9周分别获取小鼠外周血样本,移植后16周获取小鼠骨髓样本,分析供体细胞在小鼠体内的表达。 结果成功重组了p-SFFV慢病毒载体并使其在小鼠骨髓造血干细胞中高效表达(感染效率72.4%);骨髓移植实验表明携带外源性shRNA的慢病毒载体可在小鼠造血系统内长期稳定表达(骨髓移植61周后骨髓单个核细胞感染效率29%)。结论shRNA重组慢病毒载体在小鼠造血系统中可长期稳定表达。 目的扩增包含靶向人类1000个衰老相关基因对应的2400个shRNA克隆的慢病毒载体库,将其导入可被Dxo诱导发生二次重编程的iPS嵌合体小鼠皮肤成纤维细胞培养体系中,观察iPs克隆形成的效率。 方法将所选的慢病毒载体库随机分配到三个组合中,制备转化效率较高的超级感受态细菌,检测转化效率并扩增慢病毒载体库;分离并培养可被Dxo诱导发生二次重编程的PiS嵌合体小鼠原代皮肤成纤维细胞;通过239T包装细胞包装成熟慢病毒颗粒,体外感染细胞后加入Dxo连续诱导12天,使其去分化形成PiS克隆。利用SSEA-1荧光抗体表面标记PiS细胞,流式细胞仪分选后提取细胞DNA,进行深度测序,初步筛选目的基因。 结果成功制备转化效率较高的超级感受态细胞,分离并体外培养了可被Dxo诱导发生二次重编程的iPS嵌合体小鼠原代皮肤成纤维细胞;形成iPS克隆后流式细胞仪分选SSEA-1阳性、GFP阳性和SSEA-/lGFP双阳性的细胞群,提取细胞DNA后进行深度测序。 结论通过ShRNA慢病毒载体库体外感染iPS嵌合体小鼠皮肤成纤维细胞,诱导其发生二次重编程形成PiS克隆,并成功分选出SSEA-1阳性、GFP阳性和SSEA-1/GFP双阳性的细胞群。
【学位授予单位】:北京协和医学院
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:R544.1

【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 陈正玉;;甲巯丙脯酸与心得安在原发性高血压降压作用之比较[J];心血管病学进展;1981年04期
2 李永安;;甲硫丙脯酸长期治疗肾血管性和原发性高血压的疗效[J];心血管病学进展;1983年01期
3 钱永巍;加拿大心血管代表团学术报告纪要[J];上海第二医科大学学报;1984年02期
4 林三冬;;缺镁与高血压[J];国外医学.卫生学分册;1986年01期
5 贾刚田;有原发性高血压家族史的小儿在生理盐水负荷后心纳素增加[J];国际儿科学杂志;1987年06期
6 王宪衍;收缩期性高血压[J];上海第二医科大学学报;1988年01期
7 张叔诚;汪家瑞;于仲元;何士大;徐宝钢;洪方裕;;原发性高血压血浆心房肽水平的观察[J];首都医科大学学报;1988年01期
8 雷寒;陈运贞;;原发性高血压细胞膜离子转运学说与临床[J];心血管病学进展;1989年03期
9 向培斌;;老年人原发性高血压使用Dilevalol的经验[J];国外医学.老年医学分册;1989年05期
10 张以华;;钾、镁对原发性高血压的作用——双盲安慰剂对照交叉研究[J];国外医学.内科学分册;1991年11期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 杜婷婷;张子波;;原发性高血压遗传流行病学研究现状[A];东北三省及内蒙古地区遗传学研究进展学术研讨会论文汇编[C];2009年
2 郭亦杰;罗新林;陈小平;李元建;;DDAH1基因多态性与原发性高血压遗传易感性的关联研究[A];湖南省生理科学会2006年度学术年会论文摘要汇编[C];2007年
3 孟燕子;支邵册;卢中秋;薛凌;王燕;陈红;邱俏檬;吕建新;管敏鑫;;线粒体tRNAMet 4435A>G突变对一个中国汉族原发性高血压家系发病的影响[A];遗传学与社会可持续发展——2010中国青年遗传学家论坛论文摘要汇编[C];2010年
4 张晓晖;王硕仁;高颖;谢颖桢;;90例原发性高血压患者生存质量评定[A];第六次全国中西医结合心血管会学术会议论文汇编[C];2002年
5 刘振东;路方红;赵颖馨;王舒健;孙尚文;潘慧;胡小亮;李俊;寇学俊;;原发性高血压患者脉搏波波速与Th17细胞特征因子的相关性[A];第十三次全国心血管病学术会议论文集[C];2011年
6 孙兆青;;氢氯噻嗪治疗辽宁省阜新地区原发性高血压疗效分析[A];中华医学会心血管病学分会第十次全国心血管病学术会议汇编[C];2008年
7 冯洪;李琴书;;生物反馈放松训练治疗原发性高血压的临床观察[A];中国心理卫生协会第四届学术大会论文汇编[C];2003年
8 沈冲;王海茹;陈金凤;杨松;赵彦平;赵祥海;陈燕春;刘思浚;沈洪兵;王学才;汤俊明;;TGFBR2基因启动子区单核苷酸多态性与原发性高血压的关联研究[A];中国心脏大会(CHC)2011暨北京国际心血管病论坛论文集[C];2011年
9 张菊红;李南方;罗文利;王红梅;周玲;常建航;;FURIN基因变异与原发性高血压的关联研究[A];第十三次全国心血管病学术会议论文集[C];2011年
10 马伟红;卜培莉;王秀玲;刘榕;刘军妮;李昌军;;原发性高血压患者尿蛋白/尿肌酐比与股动脉僵硬度的相关性[A];第十届全国超声心动图学术会议论文[C];2010年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 赵连友 (中国医师协会高血压专业委员会主任委员 第四军医大学唐都医院心内科教授);原发性高血压用药“分水岭”[N];医药经济报;2011年
2 孙兰;妊娠合并原发性高血压的治疗[N];农村医药报(汉);2008年
3 复旦大学医学院 谢萍;从中医论原发性高血压(上)[N];上海中医药报;2010年
4 陈康远;六味地黄汤加味治疗原发性高血压[N];中国医药报;2004年
5 中国医学科学院 黄洁 等;伊贝沙坦较苯那普利治疗原发性高血压疗效好[N];医药经济报;2001年
6 邹志东 仲英;中医治疗阳虚型原发性高血压概况[N];中国医药报;2003年
7 内蒙古 元登;蒙医药治疗原发性高血压[N];民族医药报;2002年
8 ;氟西汀及心理治疗对原发性高血压伴抑郁症患者的作用[N];中国医药报;2003年
9 ;母子降压汤治疗原发性高血压[N];中国中医药报;2003年
10 杨声瑞 刘亚欣;高血压病研究有新进展[N];中国医药报;2002年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 韦烨;基因改造骨髓造血干细胞靶向抑制结直肠癌新生血管形成的实验研究[D];复旦大学;2010年
2 黄馨;端粒缩短影响原发性高血压及其并发症的发生[D];北京协和医学院;2010年
3 俞晓岚;过表达CXCR4的骨髓间质干细胞移植治疗大鼠脑梗死的疗效观察[D];福建医科大学;2010年
4 刘瑜;BTBD10在人脑胶质瘤中的表达及其对U251细胞株增殖和凋亡的影响[D];第二军医大学;2010年
5 林恒;线粒体转录因子A在重组人肝再生增强因子对梗阻性黄疸大鼠肝功能保护中的作用机制研究[D];第三军医大学;2009年
6 林文平;脑红蛋白基因修饰的骨髓间充质干细胞对兔脊髓损伤保护作用的实验研究[D];福建医科大学;2011年
7 王鹏;依赖p53的癌基因Wip1在人脑胶质瘤细胞恶性增殖机制中的作用研究[D];华中科技大学;2010年
8 吕学军;Caveolin-1在LPS诱导AT-1细胞和小鼠肺部急性损伤中的作用及机制研究[D];第三军医大学;2010年
9 苏冠华;肝细胞生长因子基因修饰的骨髓间充质干细胞移植的促血管新生作用[D];华中科技大学;2010年
10 杨志峰;应用慢病毒载体介导RNA干扰在MCF-7细胞中剔降IKKα基因和制备转基因小鼠模型的研究[D];第二军医大学;2006年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 邹雨珊;健康管理在原发性高血压社区防治中的应用[D];兰州大学;2010年
2 傅增泮;原发性高血压前期血管活性物质水平变化及其意义研究[D];青岛大学;2003年
3 周拥志;还原型谷胱甘肽对原发性高血压患者炎症反应和血管内皮功能影响的临床疗效研究[D];福建医科大学;2010年
4 马贵亮;慢病毒载体介导的TNF-α基因在脐血间充质干细胞中的表达的实验研究[D];青岛大学;2010年
5 栾冲;可诱导表达hBMP-2基因的慢病毒载体的构建及其慢病毒的产生和鉴定[D];青岛大学;2010年
6 陈豪;乙肝病毒X基因(HBVX)慢病毒载体的构建和鉴定[D];福建医科大学;2011年
7 刘翀;HMG-CoA还原酶抑制剂对原发性高血压患者血管性认知功能障碍的治疗价值[D];浙江大学;2010年
8 陈春;携带大鼠Foxp3基因慢病毒载体的构建及慢病毒包装的研究[D];安徽医科大学;2011年
9 王钢;运动负荷肾动态显像对潜在性肾功能损害的初步探讨[D];广州中医药大学;2010年
10 沈上杭;短发夹RNA抑制缺氧诱导因子-1α表达对脑胶质瘤细胞增殖、侵袭及转移的影响[D];福建医科大学;2010年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026