收藏本站
《北京协和医学院》 2011年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

(一)以苯丙氨酰-tRNA合成酶为靶点的新型抗结核药物高通量筛选模型的建立和应用 (二)可可西里碱性土壤样品细菌的分离和嗜碱菌株的多相分类研究

孙莹  
【摘要】:结核病是由结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB1引起的一种严重危害人类健康的传染性疾病。近年来,曾被有效控制的结核病大有卷土重来之势,其重要原因就是对于传统一线抗结核药物的多重耐药菌的急剧出现。因此,迫切需要发现新型低毒、高效抗结核分枝杆菌药物。 氨酰-tRNA合成酶在蛋白质的生物合成过程中起了至关重要的作用,它催化氨基酸与相应的tRNA合成氨酰-tRNA。对于病原菌而言,一旦它的某种氨酰-tRNA合成酶受到抑制失去功能,就会导致其蛋白质的生物合成中断以及许多重要的生理过程受影响,那么病原菌在体外或是在宿主体内的生长繁殖也就随之终止。目前,氨酰-tRNA合成酶已成为开发抗结核药物的理想靶点之一。 本研究以结核分枝杆菌生长所必须的且与其宿主中相关酶有着较大差异的苯丙氨酰-tRNA合成酶(PheRS)作为新型抗结核药物的筛选靶点。在本实验中,我们首先从结核分枝杆菌基因组中扩增出pheRS基因(包括pheS和pheT基因),利用构建的原核表达系统pET30a-pheST在大肠杆菌中成功表达了PheRS蛋白,采用NADH比色法检测酶活性的方法建立了酶水平的PheRS抑制剂高通量初筛模型。并以此模型筛选了化合物样品11600个,发酵液样品5200个,筛选得到阳性化合物9个,阳性发酵液37个 随后,通过耻垢分枝杆菌作为检定菌的抗菌活性测定及细胞毒性评价后,得到了6个在酶水平和抗分枝杆菌方面均具有良好活性且毒性较低的发酵液阳性样品。同时,初步结果还表明I09FA-00484和I09FA-00494对结核分枝杆菌的PheRS抑制活性呈现出一定的量效关系,且对人的重组PheR抑制作用较弱,呈现出良好的选择性毒性。 由于该酶在细菌中是普遍存在的,而且其序列相对比较保守,本研究还检测了阳性发酵液样品对其它革兰氏阳性和阴性病原菌的抗菌活性,结果表明阳性发酵液样品I09FA-00484和I09FA-00494对多种耐药G+细菌如MRSA、MRSE等具有较好的抗菌活性,其中I09FA-00484样品还VRE、对产超广谱β-内酰胺(ESBLs)酶的肺炎克雷伯氏菌和绿脓杆菌表现出一定抑制作用。阳性发酵液样品110AB-00631对所测所有的G+病原菌敏感菌株及其耐药株均有一定抑制作用,110AA-00733对所测15株病原菌均没有体现抗菌活性,但是对分枝杆菌具有较好的选择性抗菌活性。 综上所述,通过酶水平筛选、抗菌活性及毒性评价后,本研究得到了4株候选菌株I09FA-00484、I09FA-00494、I10AB-00631和110AA-00733,为发现以PheRS为靶点的新型抗菌药物或先导化合物奠定了基础。 可可西里是位于青海玉树藏族自治州的自然环境保护区,由于当地的恶劣气候特点,其土壤微生物多样性很少得到研究。本实验采用5种分离培养基对来源于可可西里的12个盐碱土壤样品进行了选择性分离,共分离得到了5株细菌,其中4株菌分别属于游动微菌属(Planomicrobium)、库克菌属(Kocuria)、气球菌属(Aerococcus)和芽孢杆菌属(Bacillus)等4个属。另有一株乳黄色的嗜碱耐盐细菌CPCC100153,由于其16S rRNA基因序列比对结果显示与最相近的地杆菌属(Geomicrobium)相似性仅为93.5%,因此对菌株CPCC100153开展了生物学特性的研究。该菌革兰氏染色呈阳性、细胞为短杆状、多以2-5个细胞呈簇排列;有运动性,周生多根鞭毛,在细胞近中央处可见椭圆形芽胞。菌株生长温度范围为25-37℃(最适生长温度为28℃),生长pH范围为7.5-10.0(最适生长pH为8.0-9.5);NaCl耐受范围为0-20%(最适生长NaCl浓度为10%1。该菌酶学特性结果为:明胶液化阳性,脲酶、氧化酶、接触酶反应阳性,以及碱磷酶、酯酶、类脂酯酶、白氨酸芳胺酶、胰凝乳蛋白酶、酸性磷酸酶、萘酚-磷酸水解酶、α-葡萄糖甙酶、β-葡萄糖甙酶和N-乙酰-葡萄糖胺酶阳性。可利用D-果糖和七叶灵发酵产酸,利用蔗糖、N-乙酰-氨基半乳糖、乳酸钠、甘油、α-酮戊二酸、萘啶酸、吐温40、α-羧基-丁酸、乙酰乙酸、丙酸、乙酸、氨曲南、丁酸钠、溴酸钠作为唯一碳源。利用甲硫氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、缬氨酸、丝氨酸、丙氨酸、苏氨酸、色氨酸、KNO3、L-天冬酰胺作为唯一氮源。
【学位授予单位】:北京协和医学院
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2011
【分类号】:R965

手机知网App
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 张鹭;王庆忠;徐颖;陈嘉臻;路福平;王洪海;;结核分枝杆菌泛酸激酶的克隆表达及酶学性质[J];第四军医大学学报;2006年23期
2 王恩多;氨基酰-tRNA合成酶及其与相关tRNA的相互作用研究[J];中国科学院院刊;2001年05期
3 刘雪梅;金晓玲;巩菊芳;;氨酰-tRNA合成酶的结构和功能[J];山东医药;2009年03期
4 赵明炜,王恩多;两种具有调节血管生成作用的氨基酰-tRNA合成酶[J];生物化学与生物物理进展;2003年05期
5 贾捷,金由辛;氨酰tRNA合成酶的分子网络和功能[J];生物化学与生物物理进展;2004年04期
6 朱斌;王恩多;;氨基酰-tRNA合成酶与神经退行性疾病[J];生物化学与生物物理进展;2007年06期
7 刘文,刘默芳,夏宪,王恩多,王应睐;N端的改变对大肠杆菌精氨酰-tRNA合成酶的影响(英文)[J];生物化学与生物物理学报;2002年02期
8 林军,黄京飞;苯丙氨酰-tRNA合成酶的进化与结构域丢失(英文)[J];生物化学与生物物理学报;2003年12期
9 李勇,王恩多;tRNA个性研究进展[J];生命的化学;1999年04期
10 周勤华;周盛梅;;氨酰-tRNA合成酶的研究进展[J];中国生物工程杂志;2009年06期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 解永梅;张成玲;赵永强;张薇;张广民;;山东省大白菜黑腐病病原的鉴定及其生物学特性的研究[J];山东农业科学;2007年06期
2 姚良同;丁延芹;刘尧;陈一然;杜秉海;李俊;;玉米秸秆低温快速腐熟菌的筛选、鉴定及效果试验[J];山东农业科学;2008年03期
3 朱彭玲;陈强;丁延芹;姚良同;杜志兵;王晶;杜秉海;;新疆地区棉花根际拮抗菌的筛选与鉴定[J];山东农业科学;2008年06期
4 张广志;周红姿;杨合同;赵晓燕;;盐碱土壤中耐盐细菌的分离与鉴定[J];山东农业科学;2008年09期
5 张一;王凤忠;张铭铄;李妍;韩明渠;周波;毛志泉;;苹果园土壤中一株根皮苷降解菌的筛选[J];山东农业科学;2011年12期
6 凌晨;刘波;;2,4,6-三溴苯酚降解菌的筛选[J];安徽化工;2012年03期
7 鲍立宁,洪桂云,黄显怀;电极生物膜脱氮工艺中反硝化菌相分析[J];安徽建筑工业学院学报(自然科学版);2004年05期
8 刘营;李玉保;;鲁西地区奶牛乳房炎病原菌分离鉴定及药敏试验[J];安徽农学通报;2008年19期
9 曹宁;杨革非;王世彭;刘占云;汤晖;;大庆土壤盐碱菌的分离鉴定[J];安徽农学通报(上半月刊);2009年07期
10 曹红梅;冯杰;沙莎;刘力;;大西洋鲑腐皮病研究——鳃部病原菌的分离鉴定[J];安徽农学通报(上半月刊);2009年11期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 窦瑞木;雷清泉;张改强;;番茄内生细菌TB-2生化特性及对番茄灰霉病菌的抑制作用[A];经济策论(上)[C];2011年
2 刘春;;鳢舒伯特气单胞菌内脏类结节病的研究[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第三次学术研讨会论文集[C];2012年
3 马镝;;产壳聚糖酶菌株的筛选、鉴定及抑菌活性研究[A];科学发展与社会责任(A卷)——第五届沈阳科学学术年会文集[C];2008年
4 黄华伟;王印庚;陈霞;张凤萍;;渡夏期养殖刺参腐皮综合征的发生与环境因子间的关系[A];农产品质量安全与现代农业发展专家论坛论文集[C];2011年
5 邬纯鸿;黄毅;王文莉;钟代彬;吴广安;方艳军;;现代化奶牛场乳房炎病因调查及其防治[A];中国奶业协会年会论文集2009(上册)[C];2009年
6 余东游;刘韶娜;李卫芬;黄海智;;一株异养型亚硝酸盐转化菌的分离鉴定及特性研究[A];全国畜禽和水产养殖污染监测与控制治理技术交流研讨会论文集[C];2008年
7 胡治刚;胡江春;刘丽;汪思龙;苏振飞;王书锦;;海洋微生物复合制剂改善桉树人工林土壤质量研究[A];微生物实用技术生态环境应用学术研讨会论文集[C];2008年
8 刘爱民;王敏;黄为一;;抗生素对一株假单胞菌耐镉能力的影响及其红外光谱分析[A];微生物实用技术生态环境应用学术研讨会论文集[C];2008年
9 李俊;陈济安;邱志群;赵清;舒为群;;一株降解DBP菌株CQ0302的分离鉴定及其降解特性研究[A];重庆市预防医学会2005年学术交流会论文集[C];2005年
10 席青;张德纯;管晓冉;;山西醋醅中醋酸菌的分离及初步鉴定[A];重庆市预防医学会2010年论文集[C];2011年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 王勇;细基格孢属、匍柄霉属及其近似属的形态学与分子系统学研究[D];山东农业大学;2010年
2 郎亚军;Ectoines高效制备技术及其应用研究[D];大连海事大学;2010年
3 李永芹;养殖鱼类病原菌检测芯片技术的建立[D];中国海洋大学;2010年
4 赵祺;冻土细菌新种和冰缘植物内生细菌新种的特征和多相分类学研究[D];兰州大学;2010年
5 朱兵峰;枯草杆菌两步法生产四甲基吡嗪的调控及机制的研究[D];江南大学;2010年
6 王大红;粘细菌Stigmatella WXNXJ-B产生新型抗肿瘤抗生素的研究[D];江南大学;2010年
7 肖仔君;Acetobacter sp. CCTCC M209061细胞催化潜手性酮不对称还原反应的研究[D];华南理工大学;2010年
8 李敏;异翅亚目DNA条形码,谱系生物地理学及花蝽科(狭义)分子系统发育研究[D];南开大学;2010年
9 刘咏梅;产精氨酸脱亚胺酶变形假单胞菌的筛选鉴定及酶的定向改造[D];江南大学;2010年
10 刘君昂;油茶林健康经营关键技术研究[D];中南林业科技大学;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 罗晶晶;斑点叉尾鮰生鱼片加工过程中的微生物变化[D];华中农业大学;2010年
2 郎晓磊;肠道菌对苏云金芽胞杆菌家蚕杀虫活性的作用[D];华中农业大学;2010年
3 逯晋忠;苏云金芽胞杆菌对云斑天牛的抗性研究[D];华中农业大学;2010年
4 张献芳;利用半夏凝集素构建内生工程菌及其抗同翅目害虫效果研究[D];华中农业大学;2010年
5 韩亚超;新型微生态制剂的研制[D];华中农业大学;2009年
6 袁玮;贵州省苗族腌酸汤中产乳酸菌素菌的筛选与初步研究[D];华中农业大学;2010年
7 胡佳;鲟形目部分种类基于线粒体COⅠ基因的分子进化研究[D];华中农业大学;2010年
8 贺中华;黄鳝肠道菌群的初步分析和益生菌的开发与应用研究[D];华中农业大学;2010年
9 孟小亮;黄颡鱼肠道益生菌的筛选及其应用研究[D];华中农业大学;2010年
10 田甜;鱼源嗜水气单胞菌的分离鉴定及耐药性研究[D];华中农业大学;2010年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 郑度,张荣祖,杨勤业;试论青藏高原的自然地带[J];地理学报;1979年01期
2 柏银兰,李元,李别虎,薛莹,范雄林,徐志凯;结核分枝杆菌分泌蛋白MPT64的克隆、表达与鉴定[J];第四军医大学学报;2003年01期
3 师长宏,王晓武,朱德生,李元,徐志凯;结核分枝杆菌差异蛋白MPT64与ESAT6的融合表达与纯化[J];第四军医大学学报;2005年20期
4 李立青,苏明权,李立文,郝晓柯;结核分枝杆菌Rv2450c基因的克隆和原核表达[J];第四军医大学学报;2005年20期
5 孟宪芳,陈金中,杨泉胜,王曙,周光云,应康,谢毅,毛裕民;一条新的人类组氨酰tRNA合成酶类似物全长cDNA的克隆及表达谱分析[J];复旦学报(自然科学版);2002年01期
6 于海东,张雪莲,王宝林,雷建强,曹健,淳于利娟,许云敏,王洪海;结核分支杆菌H_(37)Rv莽草酸脱氢酶基因的克隆、表达及酶学性质的研究[J];复旦学报(自然科学版);2004年02期
7 赵明炜,王恩多;两种具有调节血管生成作用的氨基酰-tRNA合成酶[J];生物化学与生物物理进展;2003年05期
8 贾捷,金由辛;氨酰tRNA合成酶的分子网络和功能[J];生物化学与生物物理进展;2004年04期
9 朱斌;王恩多;;氨基酰-tRNA合成酶与神经退行性疾病[J];生物化学与生物物理进展;2007年06期
10 王金亭,李渤生;西藏羌塘高原高寒草原的基本类型与特征[J];植物生态学与地植物学丛刊;1982年01期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 庄玉辉;非典型抗酸性分枝杆菌研究的若干进展[J];解放军医学杂志;1985年06期
2 何仲一,易松林,陈和竹,吴佩;1996~2001年湖南省结核病耐多药菌的研究[J];实用预防医学;2003年01期
3 熊礼宽,周亚红,付丽华,周君;分枝杆菌药物最低抑菌浓度的快速测定方法研究[J];动物医学进展;2004年05期
4 陆宇;;抗结核分枝杆菌持留菌的药物研究进展[J];国外医药(抗生素分册);2007年02期
5 李仁龙;林琳;刘渠;徐亚军;;100株结核分枝杆菌耐药情况分析[J];中国实用医药;2007年33期
6 李国利;张灵霞;;氨基糖甙类抗生素抗分枝杆菌作用的研究[J];中国现代医学杂志;2007年12期
7 李国利;张灵霞;;大环内酯类抗生素抗分枝杆菌作用的研究[J];临床肺科杂志;2007年11期
8 祖燕,赵富山,闫国蕊;河南省历次结核病流行病学调查分枝杆菌药敏试验结果分析[J];中原医刊;2005年16期
9 王小莲,栾燕,吴晓;左氧氟沙星联合化疗对28例复治肺结核的临床观察[J];实用临床医学;2005年08期
10 马小波,张明科,孙敏霞,王继华,肖长生;NTM感染是影响结核病疗效的重要因素 附19例报告[J];临床肺科杂志;2005年02期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 谢建平;刘雪梅;冀磊;王洪海;;分枝杆菌毒素Mycolactone的生物合成及其系统进化[A];第八届中国生物毒素学术研讨会论文摘要集[C];2007年
2 谢建平;刘雪梅;冀磊;王洪海;;分枝杆菌毒素Mycolactone的生物合成及其系统进化[A];第八届中国生物毒素学术研讨会论文摘要[C];2007年
3 赵凤仪;王巨存;王缬秀;赵德福;白人骁;王甦民;王学谦;邢国胜;;我国临床可遇见18种分枝杆菌霉菌酸指纹谱库构建及种型鉴定的研究[A];2004年中国防痨协会临床基础专业委员会学术会议论文集[C];2004年
4 郭设平;刘思国;张秀华;王春来;宫强;郭洋;邵美丽;;牛分枝杆菌三价串联抗原基因的原核表达及其免疫学活性研究[A];中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第六次研讨会论文集[C];2005年
5 李雅静;李继红;时东彦;王鑫;魏宏莲;吕翠环;李仲兴;赵建宏;;一起由脓肿分枝杆菌引起臀部感染暴发的初步调查及分子诊断[A];中华医学会第九次全国检验医学学术会议暨中国医院协会临床检验管理专业委员会第六届全国临床检验实验室管理学术会议论文汇编[C];2011年
6 李国利;赵铭;庄玉辉;;应用PNB耐受试验鉴别结核与非结核分枝杆菌的评价[A];2004年中国防痨协会临床基础专业委员会学术会议论文集[C];2004年
7 闫国蕊;;河南省历次结核病流行病学调查分枝杆菌药敏试验结果分析[A];2004年中国防痨协会临床基础专业委员会学术会议论文集[C];2004年
8 李艳冰;张媛媛;李晓亮;赵秀琴;万康林;刘文恩;;PCR-RFLP技术用于脓肿分枝杆菌群鉴定的初步研究[A];中华医学会第九次全国检验医学学术会议暨中国医院协会临床检验管理专业委员会第六届全国临床检验实验室管理学术会议论文汇编[C];2011年
9 禚风麟;孙照刚;张建中;;NCCLS M24-A方案检测脓肿分枝杆菌的药物敏感性[A];中华医学会第14次全国皮肤性病学术年会论文汇编[C];2008年
10 苏云开;任育麟;王晓君;刘耀;马岩;廖鸿敏;宋常琴;郭淑芳;马俊敏;韩清华;;1250例分枝杆菌两种药敏试验方法结果比较[A];科技、工程与经济社会协调发展——中国科协第五届青年学术年会论文集[C];2004年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 贾磊磊;《可可西里》:向死亡抗争的集体仪式[N];人民日报海外版;2004年
2 记者 徐鸿伟 钱荣;可可西里生态更加恶化[N];新华每日电讯;2000年
3 新华社记者 侯德强 王娅楠 凌朔;美丽神奇的可可西里“无人区”[N];新华每日电讯;2002年
4 李盎;追梦,在青色山梁[N];西部时报;2007年
5 侯德强、文贻炜、拉巴次仁;可可西里:动物乐园[N];新华每日电讯;2006年
6 刘诗平;车陷冰河,可可西里连环大营救[N];新华每日电讯;2006年
7 记者 解悦;新型“热棒”可可西里护环保[N];南京日报;2009年
8 记者 安世远;为可可西里野生动物撑起一片蓝天[N];中国环境报;2003年
9 ;联通独家通信支持可可西里科考[N];网络世界;2005年
10 辛轩;在可可西里挑战施工极限[N];国家电网报;2010年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 姚建忠;重组分枝杆菌免疫治疗效应及抗肿瘤活性的研究[D];第三军医大学;2002年
2 张红梅;中医养阴清肺法治疗肺结核的疗效观察及分枝杆菌鉴定的方法学研究[D];湖北中医药大学;2010年
3 冯雨苗;皮肤分枝杆菌感染快速诊断和药敏试验方法的研究和应用[D];中国协和医科大学;2010年
4 朱新星;分枝杆菌基因组信息分析平台的设计、构建和实现[D];浙江大学;2009年
5 王甦民;1.结构分枝杆菌毒力相关基因的研究 2.结构分枝杆菌DNA指纹技术及其应用研究[D];北京市结核病胸部肿瘤研究所;2001年
6 李子玲;分枝杆菌DNA的多重聚合酶链反应检测研究[D];第二军医大学;2004年
7 方平飞;基于与转运蛋白P-gp相互作用的抗结核药物耐药机制研究[D];中南大学;2010年
8 梁建琴;应用膜反向斑点杂交技术快速鉴定分枝杆菌菌种和耐药结核分枝杆菌基因型[D];北京市结核病胸部肿瘤研究所;2005年
9 王国庆;分枝杆菌hsp65基因多态性与其对消毒剂抗性的关系研究[D];四川大学;2004年
10 李传友;结核分枝杆菌黏附素HBHA的制备及其应用研究[D];北京市结核病胸部肿瘤研究所;2005年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 孙莹;(一)以苯丙氨酰-tRNA合成酶为靶点的新型抗结核药物高通量筛选模型的建立和应用 (二)可可西里碱性土壤样品细菌的分离和嗜碱菌株的多相分类研究[D];北京协和医学院;2011年
2 刘晶波;应用微列阵技术快速鉴定常见致病性分枝杆菌[D];苏州大学;2010年
3 李艳冰;分枝杆菌菌种鉴定及北京家族蛋白质组学初步研究[D];中南大学;2011年
4 孙谦;分子生物学快速鉴定分枝杆菌方法学比较及其耐药研究[D];浙江大学;2012年
5 张峰;Toll样受体2在分枝杆菌诱导巨噬细胞凋亡中的作用[D];第二军医大学;2010年
6 王风清;利用分枝杆菌降解植物甾醇生产雄甾烯酮的研究[D];天津科技大学;2003年
7 彭涛;分枝杆菌临床分离株的16S rRNA基因和16S-23S rRNA基因转录间隔区的序列分析[D];第三军医大学;2003年
8 章国平;家兔皮肤液化病理模型与分枝杆菌毒力差异相关性研究及结核整合蛋白疫苗研究[D];兰州大学;2011年
9 刘冠;分枝杆菌菌种鉴定及其基因分型的研究[D];北京市结核病胸部肿瘤研究所;2010年
10 郭艳玲;应用DNA分型技术鉴定结核分枝杆菌菌株的研究[D];北京市结核病胸部肿瘤研究所;2004年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026