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《北京协和医学院》 2012年
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尖锐湿疣患者宫颈高危型人乳头瘤病毒感染情况的调查及人乳头瘤病毒临床和亚临床感染治疗的研究

米霞  
【摘要】:尖锐湿疣患者宫颈高危型人乳头瘤病毒感染情况的调查及人乳头瘤病毒临床和亚临床感染治疗的研究 背景和目的:人类乳头瘤病毒(human papillomavirus, HPV)是一种环状双链脱氧核糖核酸(deoxyribonucleic acid, DNA)病毒。目前发现的100多种HPV型别中,约40多种可特异性的感染肛门生殖器部位的皮肤和粘膜。按照HPV所导致皮损的性质,人们把HPV型别分为高危型(high risk, HR)和低危型(low risk, LR)。大量研究表明,宫颈HR-HPV感染是宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia, CIN)和宫颈癌发病的必要条件。LR-HPV6、11在尖锐湿疣组织中是最常见的型别。流行病学调查发现,部分免疫功能正常的尖锐湿疣(condylomata acuminata, CA)患者疣组织中同时合并LR-HPV和HR-HPV(?)感染,最常见合并感染的HR型别是HPV16。丹麦和瑞典科学家分别进行的队列研究都提示:CA患者有较高的发生宫颈痛或宫颈原位癌的危险。但是并没有直接的数据说明CA患者宫颈HR-HPV感染几率是否大于普通女性。女性宫颈持续感染高危型HPV不但为宫颈癌的发生埋下隐患,而且增加了病毒在性伴侣之间相互传播的机会。对于宫颈HR-HPV的亚临床感染,尽管人们已经意识到其危害性,但是目前并没有一种被证实有效的方法来消除宫颈HPV感染。相对于传统的治疗方法,5—氨基酮戊酸结合光动力治疗(photodynamic therapy using aminolevulinic acid, ALA-PDT)对于数目较少或体积较小的CA有较高的治愈率和较低的复发率。其作用机制除了对CA组织增生活跃细胞的光毒性作用以外,有研究发现ALA-PDT本身有抗病毒的作用,但是目前没有关于ALA-PDT抗HPV及相关机制的研究。由于受到皮肤角质层和细胞膜的阻挡,ALA在皮肤组织中的渗透有限,这是ALA-PDT对体积较大或数目较多CA疗效不佳的原因。不同程度的冷冻治疗可以造成组织结构和细胞膜的破坏甚至坏死。理论上,皮肤角质层和角质形成细胞膜连续性的破坏可以增加ALA的渗透,继而能提高ALA-PDT的疗效。综上所述,本实验目的是:1、调查女性尖锐湿疣患者宫颈HR-HPV的感染状况,从而明确是否有对这部分患者进行宫颈HR-HPV检测和随访的必要性;2、研究ALA-PDT对Hela细胞内HPV18E6、E7基因表达的影响,从而探索除了细胞死亡途径,ALA-PDT是否还存在其他抗HPV感染的机制;3、研究冷冻联合ALA-PDT作用于Hela细胞的效应,以比较联合治疗的疗效是否优于单独治疗;4、研究ALA-PDT治疗宫颈HR-HPV亚临床感染的临床疗效;5、研究 冷冻联合ALA-PDT治疗肛门外生殖器部位体积较大或数量较多尖锐湿疣的临床疗效。 方法: 1尖锐湿疣女性患者宫颈高危型人乳头瘤病毒感染情况的调查: 1.1用第二代基因杂交捕获(hybrid capture-Ⅱ, HC-Ⅱ)人乳头瘤病毒的方法检测142例外阴尖锐湿疣女性患者及212例健康女性宫颈脱落细胞HR-HPVDNA; 1.2将两组宫颈HR-HPV感染的阳性率及病毒载量进行统计学比较,得到外阴尖锐湿疣患者宫颈HR-HPV感染率和病毒载量与普通人群比较的统计学差异。 25—氨基酮戊酸结合光动力治疗单独或联合冷冻治疗对Hela细胞凋亡及HPV18病毒相关基因表达的影响: 2.1将Hela细胞分为治疗1组(20%ALA-PDT),治疗2组(1%ALA-PDT),治疗3组(0.1%ALA-PDT),治疗4组(0.002%ALA-PDT),治疗5组(冷冻加0.002%ALA-PDT),对照组(冷冻组),空白组(无冷冻无ALA-PDT)。 2.2分别给予各组相应的方法处置,12h后,用流式细胞仪(flow cytometry, FCM)检测各组细胞的凋亡情况,用逆转录聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction, RT-PCR)检测各组细胞中人乳头癌病毒18E6、E7mRNA的表达情况,quantity one4.6.2凝胶定量软件进行灰度分析。 35—氨基酮戊酸结合光动力治疗宫颈高危型人乳头瘤病毒业临床感染的临床疗效研究: 3.1将35例宫颈HR-HPV阳性患者随机分为ALA-PDT治疗组和无治疗的对照组; 3.2治疗组治疗1次后、对照组从第一次检测到高危型人乳头瘤病毒阳性后,三个月复查宫颈人乳头瘤病毒感染情况。 3.3比较两组检测结果和副反应。用统计产品与服务解决方案17.0软件(statistical product and service solutions, SPSS17.0)对实验结果进行统计学分析。 4冷冻联合5—氨基酮戊酸光动力治疗与冷冻单独治疗多发性尖锐湿疣临床疗效的随机对照研究 4.180例多发性尖锐湿疣的患者随机分为两组,分别接受冷冻加5—氨基酮戊酸光动力治疗(n=40)和冷冻加安慰剂光动力治疗(n=40)。冷冻疣体之后在患处及周围5mm范围外敷5—氨基酮戊酸或安慰剂溶液,3h之后用红光(波长635nm,100mW/cm2,100J/cm2)照射15min。如皮损未消退7天后重复治疗。 4.2比较两组的完全反应率、复发率和副作用。 结果: 1. HR-HPV阳性率,尖锐湿疣组为54.2%(77/142),健康对照组为13.2%(28/212),两组阳性率有显最著差异(P0.05)。病毒载量(relative light units/positive control, RLU/PC),尖锐湿疣组1~1024例,10-10016例,100~100022例,≥100015例。健康对照组1-1010例,10-10010例,100-10007例,≥10001例,尖锐湿疣组病毒载量≥1000者与对照组比较有显著差异(P0.05)。 2.各组Hela细胞流式细胞仪检测结果:治疗1组10.84%存活,0.23%凋亡,86.01%死亡;治疗2组8.59%存活,14.83%凋亡,74.54%死亡;治疗3组81.17%存活,2.80%凋亡,8.55%死亡;治疗4组83.98%存活,1.66%凋亡,11.16%死亡;治疗5组18.06%存活,10.80%凋亡,67.99%死亡;对照组23.05%存活,9.40%凋亡,58.85%死亡;空白组88.78%存活,1.00%凋亡,7.63%死亡。各组Hela细胞人乳头瘤病毒18E6、E7mRNA表达情况:治疗1组、2组、3组、4组、5组、对照组E7mRNA分别为空白组的26.81%、41.20%、61.83%、71.75%、70.30%、93.26%;治疗1组、2组E6mRNA没有表达,3组、4组、5组、对招租E6mRNA分别为空白组的34.02%、49.76%、41.67%、97.67%。 3.治疗组共17人,其中10人高危型人乳头瘤病毒转阴,7人阳性。对照组18人中1人高危型人乳头瘤病毒转阴,17人阳性。治疗组与对照组间转阴率有显著差异(P0.05)。治疗组中的副反应包括轻度到中度的疼痛、水肿、糜烂,没有发生治疗部位的感染、溃疡、瘢痕及畸形。 4.2次治疗后,联合治疗组(冷冻加5—氨基酮戊酸光动力治疗)和冷冻组在肛周,尿道口和外生殖器尖锐湿疣的完全反应率分别为32.4%(36/111)和32.6%(43/132)(P0.05),100%(32/32)和54.5%(18/33)(P0.05),94.2%(129/137)和50.5%(56/111)(P0.05);复发率分别为24.3%(27/111)和31.1%(41/132)(P0.05),9.4%(3/32)和39.4%(13/33)(P0.05),3.6%(5/137)和31.5%(35/111)(P0.05)。两组的副反应包括轻度到中度疼痛、水肿、糜烂和色素沉着,无感染、溃疡、瘢痕或尿道口畸形。 结论: 1.外阴尖锐湿疣患者宫颈HR-HPV阳性率和高病毒载量者较普通人群显著增高,应重视这部分患者宫颈HR-HPV的检测和随访。 2.5—氨基=酮戊酸结合光动力治疗可以抑制Hela细胞内人乳头瘤病毒18E6、E7mRNA的表达;冷冻可增强5—氨基酮戊酸结合光动力治疗对Hela细胞的杀伤效应和对细胞内人乳头瘤病毒18E6、E7mRNA表达的抑制作用。 3.5—氨基酮戊酸结合光动力治疗是一种安全、有效的治疗宫颈人乳头瘤病毒感染的方法。 4.相对于冷冻单独治疗,冷冻联合5—氨基酮戊酸光动力治疗肛门外生殖器多发性尖锐湿疣是一种更加有效的治疗方案。
【学位授予单位】:北京协和医学院
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2012
【分类号】:R752.53

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10 李博;人乳头瘤病毒16 E6蛋白与人端粒酶逆转录酶在乳腺癌中的表达及意义[D];山西医科大学;2011年
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