收藏本站
《北京协和医学院》 2009年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

猪骨髓间充质干细胞体外向心肌样细胞分化过程中Notch4下调

刘昕超  
【摘要】:目的:检测猪骨髓间充质干细胞(Mesenchymal stem cells, MSCs)体外培养自发分化和诱导分化过程中Notch4mRNA、Notch4蛋白的变化趋势,探讨Notch4受体对MSCs体外向心肌细胞分化的影响。 方法:密度梯度离心法分离中华小型猪骨髓单个核细胞,贴壁培养法筛选出MSCs体外培养,原代(PO)培养后按1:2比例每3天传代一次。选取第1,2,3和4代(P1,P2,P3和P4)MSCs,连续镜下观察MSCs的形态变化,同时检测自发分化和5-氮胞苷诱导分化状态下它们Notch4mRNA水平和Notch4蛋白表达量的差异。Real Time RT-PCR定量检测细胞Notch4mRNA表达量,以及心肌结构基因和特异性基因的表达量,包括Cx43和cTnI; Western-blot法检测不同细胞Notch4蛋白的表达水平;免疫细胞化学染色法检测MSCs的表面标志(CD34、CD45、CD90和CD29)及心肌细胞特异性的蛋白表达,包括a-横纹肌肌动蛋白(a-sarcomeric actin, a-actin)、心肌肌钙蛋白-T (cardiactroponin-T, cTn-T)和连接蛋白43(connexin43, Cx43);以透射电镜观察分化细胞超微结构。 结果:5天可见贴壁圆形的MSCs逐渐出现多角状突触,呈长梭形,经过7-10天培养,原代(passage0, PO) MSCs形成均一的细胞克隆,融合70-80%;1:2传代以后第二天细胞即可贴壁生长,细胞为多角长梭形,数量增殖到较多时呈漩涡状生长。免疫细胞化学表型鉴定CD45(-), CD29(+), CD90(+)。猪骨髓来源的MSCs在体外正常培养状态下,随着培养时间的延长(P0-P4),细胞之间的连接增多(Cx43表达量上升),心肌特异性标志物增多(cTnI表达量上升),与此同时Notch4较原代细胞显著下调;5-氮胞苷(10μM)诱导2周后,Notch4的基因表达与对照组相比无明显变化,Notch4阳性细胞与对照组相比显著减少,各代MSCs可以生成更多的细胞连接,但是心肌特异性标志物无显著变化。 结论:猪骨髓间充质干细胞体外向心肌样细胞分化过程中Notch4下调。
【学位授予单位】:北京协和医学院
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2009
【分类号】:R329.2

手机知网App
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前7条
1 符明龙;刘福元;;经冠状动脉自体骨髓干细胞移植对急性心肌梗死后左室射血分数影响的荟萃分析[J];临床心血管病杂志;2013年11期
2 周瀛;白小涓;王勃;;骨髓基质干细胞移植对扩张型心肌病心衰大鼠心功能改善作用机制的研究[J];生物化学与生物物理进展;2013年09期
3 曾彬;王艾丽;胡冬冬;李昌;;小鼠胚胎心脏心外膜细胞体外培养模型的建立[J];中国组织工程研究;2013年44期
4 王明义;吕瑜玫;易棵;王林;辛晓燕;王雨;;Notch1信号蛋白在卵巢癌中的表达及临床意义[J];现代妇产科进展;2013年12期
5 穆军升;李献帅;袁树民;张健群;伯平;;直接贴壁法诱导人胚胎干细胞分化为心肌细胞[J];中国胸心血管外科临床杂志;2013年05期
6 钱波;莫绪明;;第二心脏发育区在心脏发育中的研究进展[J];中华临床医师杂志(电子版);2013年11期
7 公绪合;王国干;王鹏博;王斯佳;;间充质干细胞治疗心血管疾病的研究进展[J];中国心血管杂志;2013年05期
中国重要会议论文全文数据库 前1条
1 王梓良;廖伟;钟一鸣;谢东明;谢东阳;;急性心肌梗死后经冠脉移植骨髓基质干细胞对心功能的影响[A];江西省第六次中西医结合心血管学术交流会论文集[C];2013年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 贺轶宇;温度敏感性水凝胶携带HMGB1治疗大鼠心肌梗死的实验研究[D];武汉大学;2013年
2 肖明月;生理性缺血训练促进远隔侧支循环生成中VEGF/NO的调控机制研究[D];南京医科大学;2013年
3 王振华;新生小鼠心肌再生机制的研究[D];北京协和医学院;2013年
4 华琨;构建基于胞质分裂相关基因表达变化的新型心肌细胞增殖评估体系[D];北京协和医学院;2013年
5 周立民;miR-126-Rac1/p67phox信号在淫羊藿苷促小鼠胚胎干细胞分化为心肌细胞中的关键作用研究[D];浙江大学;2013年
6 王逵;SDF-1α/CXCR4轴对心肌干细胞迁移及归巢修复心肌的影响[D];第三军医大学;2013年
7 刘剑锋;Exendin-4联合脂肪来源干细胞移植治疗急性心梗的作用及机制研究[D];中国人民解放军医学院;2013年
8 裴志勇;地黄低聚糖对同种异体脂肪组织来源干细胞移植治疗小型猪急性心肌梗死效应及机制的研究[D];中国人民解放军医学院;2011年
9 张永强;移植血培养内皮祖细胞改善脑损伤小鼠神经功能的研究[D];天津医科大学;2013年
10 张嵬;hUC-MSC_S/hHGF基因修饰的hUC-MSC_S移植在心肌损伤修复中的实验研究[D];天津医科大学;2013年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 杨继涛;低能激光照射对大鼠梗死心肌组织中氧自由基和心室重塑的影响[D];郑州大学;2013年
2 郝晓娟;缺氧高糖预处理hUC-MSCs诱导分化为内皮样细胞的实验研究[D];河北医科大学;2013年
3 赵龙彪;乌司他丁对急性心肌梗死大鼠心脏的保护作用[D];河北医科大学;2013年
4 褚勤;心肌微环境下NKX2-5基因诱导MSCs向心肌分化[D];河北医科大学;2013年
5 翟文斌;不同剂量MSCs移植促进大鼠任意皮瓣成活的实验研究[D];延安大学;2013年
6 钟扬;经冠状动脉自体骨髓干细胞移植治疗急性心肌梗死时间窗选择的Meta分析[D];大连医科大学;2012年
7 李小雪;BMP-2、FGF-2在心肌梗死区的表达及其对c-kit~+心肌干细胞影响的相关性研究[D];大连医科大学;2012年
8 杨德忠;旁分泌机制在脂肪间充质干细胞移植治疗心肌梗死中的作用[D];第三军医大学;2013年
9 黄子明;肝肿瘤细胞内Sox17基因mRNA的表达水平与细胞迁移、侵袭力的相关性研究[D];安徽医科大学;2013年
10 侯红;人心脏干细胞定向分化为心肌细胞的研究[D];第四军医大学;2013年
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 周小建;Notch信号通路与T淋巴细胞发育[J];国外医学.免疫学分册;2004年05期
2 纪春岩,张茂宏;Notch及其配体在造血过程中的作用[J];山东医科大学学报;2001年06期
3 鲁茁壮,王立生,吴祖泽;Notch信号通路研究进展[J];生理科学进展;2004年02期
4 艾建平,李永青,吴秀山;Notch信号途径与心血管发育[J];生命科学研究;2004年S1期
5 张琦,郑志竑;Notch信号通路与神经干细胞的增殖分化[J];国外医学.遗传学分册;2004年02期
6 王海燕,徐如祥,姜晓丹;Notch信号转导通路对神经干细胞的调控[J];生命的化学;2003年03期
7 周庆军,胡若真,邵健忠,项黎新;Notch信号转导与调控[J];生物化学与生物物理进展;2004年03期
8 鲁茁壮,吴祖泽,张群伟,王华,刘红军,贾向旭,王立生;重组人Delta-like-1胞外区促进细胞因子对脐带血造血祖细胞的扩增[J];军事医学科学院院刊;2004年02期
9 俞海;钱关祥;葛盛芳;;Notch途径与宫颈癌细胞系的增殖调控[J];生命的化学;2006年04期
10 陈镇洲,徐如祥;神经胶质细胞命运与Notch信号途径的决定作用[J];中国临床康复;2005年17期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 高嵩;刘鹏;;Notch信号通路的失活损害了成骨细胞矿化的进程[A];中华医学会第三次骨质疏松和骨矿盐疾病中青年学术会议论文汇编[C];2011年
2 郭萌;张华;边凤花;李舸;夏国良;;在小鼠原始卵巢形成过程中孕酮能够抑制Notch信号通路的表达[A];全国动物生理生化第十一次学术交流会论文摘要汇编[C];2010年
3 兰雨;;Endothelial Smad4 Maintains Cerebrovascular Integrity by Activating N-cadherin through Cooperation with Notch[A];第二届模式生物与人类健康研讨会会议论文集[C];2012年
4 史涛坪;;Association of Low Expression of Notch-1 and Jagged-1 in Human Papillary Bladder Cancer and Shorter Survival[A];第二届中国科学院博士后学术年会暨高新技术前沿与发展学术会议程序册[C];2010年
5 林春兰;郑海涛;王春燕;杨力建;陈少华;李萡;周羽竝;谭获;李扬秋;;T-ALL中Notch1基因突变和高表达特点[A];第13届全国实验血液学会议论文摘要[C];2011年
6 耿涛;杨福合;邢秀梅;李春义;;Notch信号通路在体外培养的鹿茸干细胞中的表达[A];2010中国鹿业进展[C];2010年
7 崇蕾;李昌崇;张维溪;聂颖;王婷;;Notch信号通路对哮喘小鼠急性气道炎症的影响及调节[A];2011年浙江省医学会儿科学分会学术年会暨儿内科疾病诊治新进展国家级学习班论文汇编[C];2011年
8 顾问;郭雪君;丁涛;;Notch信号通路胞外调控分子Fring对哮喘T细胞分化的影响[A];中华医学会呼吸病学年会——2011(第十二次全国呼吸病学学术会议)论文汇编[C];2011年
9 付璐;辛晓敏;李洁;吴悦;张云平;;Notch配体刺激对白血病细胞内Cleaved Notch1蛋白及基因表达的影响[A];中华医学会第九次全国检验医学学术会议暨中国医院协会临床检验管理专业委员会第六届全国临床检验实验室管理学术会议论文汇编[C];2011年
10 邹晓英;庄姮;岳林;高学军;;阻断Notch信号通路对人牙髓细胞增殖和老化的影响[A];全国第三次牙体牙髓病学临床技术研讨会论文汇编[C];2009年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 ;为什么心在左肝在右?[N];新华每日电讯;2004年
2 殷赅 游心;奥巴马先下两镇 美选民投票热情空前[N];第一财经日报;2008年
3 刘可;人参总皂苷可诱导干细胞分化为心肌样细胞[N];中国医药报;2006年
4 曹丽君;有效抑制器官移植排异反应[N];医药导报(中药报);2003年
5 曹丽君;英国 尝试抑制器官移植排异反应新方法[N];医药经济报;2003年
6 河北 王春海;用 PXE 技术实现 WIN98无盘工作站(下)[N];电脑报;2001年
7 实习生 李娜 本报记者 袁志勇;新发现可以阻断肿瘤通路吗[N];科技日报;2010年
8 范晓艳;抗癌药物研发思路走偏?[N];医药经济报;2003年
9 岳阳;原发性渗出性淋巴瘤的治疗研究取得进展[N];中国医药报;2009年
10 大可;细胞周期钟如何运行(下)[N];大众科技报;2001年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 刘昕超;猪骨髓间充质干细胞体外向心肌样细胞分化过程中Notch4下调[D];北京协和医学院;2009年
2 张庆华;Notch信号对天然免疫的调控作用及其机制研究[D];第二军医大学;2011年
3 高方;Notch途径在中枢神经系统发育过程中的作用[D];第四军医大学;2010年
4 于恒超;Notch信号通路在肝脏缺血再灌注损伤中的作用及作用机制的研究[D];第四军医大学;2011年
5 何金婷;Notch通路在脑缺血损伤中的作用及信号转导机制研究[D];吉林大学;2012年
6 张昕霞;弥漫大B细胞淋巴瘤中Notch2受体截短突变的生物学功能研究[D];浙江大学;2013年
7 王琳;Notch信号通路调控肝再生的细胞生物学基础及其分子机制的研究[D];第四军医大学;2010年
8 吕淑敏;胸腺肽β4与体内血管再生的关系及促血管生成中的Notch通路机制的研究[D];浙江大学;2011年
9 丰帆;Notch信号缺失对小鼠树突状细胞抗肿瘤免疫功能的影响及其机制研究[D];第四军医大学;2010年
10 李瑾;Notch信号通路在常染色体显性多囊肾病发生中的作用及机制研究[D];第二军医大学;2011年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 张树君;Notch信号在小鼠胚胎早期造血的表达[D];重庆医科大学;2011年
2 袁恒锋;Notch1-Hes信号通路在强直性脊柱炎髋关节韧带中的关联研究[D];第二军医大学;2013年
3 曹光彪;Notch信号通路在小鼠椎间盘细胞中的差异表达调控作用[D];重庆医科大学;2013年
4 潘庆;Notch信号通路在心肌成纤维细胞向肌成纤维细胞转分化中的作用[D];第四军医大学;2010年
5 于秀文;Notch信号通路在肺成纤维细胞表型转化中的作用及机制研究[D];南昌大学;2012年
6 柳柯;Notch信号通路在骨髓间充质干细胞向肝细胞分化过程中的表达特征[D];南方医科大学;2013年
7 王煜;Notch信号通路在人肾细胞癌组织中的表达及其意义[D];吉林大学;2010年
8 张赫;肌源性干细胞在修复大鼠脊髓损伤过程中Notch1基因的表达差异[D];辽宁医学院;2011年
9 邓海燕;miR-1介导Notch信号通路调控大鼠MSCs向心肌样细胞分化的研究[D];南昌大学;2012年
10 曲静;抑制Notch1、4受体基因的表达对涎腺腺样囊性癌细胞增殖、侵袭以及迁移的影响[D];福建医科大学;2013年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026