收藏本站
《北京协和医学院》 2011年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

斑马鱼Mil/s1pr2和vmhc基因的功能研究及药源性心脏毒性模型的建立

张庆友  
【摘要】:心血管疾病是威胁人类健康的最常见疾病,且造成巨大的经济损失。治疗心血管疾病的新药研发一直是药学领域的研发重点。然而与之相配套的药物毒性的早期筛查和预测的新模型和技术系统,仍相对落后。一种具有心脏风险的新药的上市和撤市,除造成人员生命财产的损失外,还导致药物研发领域人力、物力和时间的巨大浪费。因而,建立一个灵敏、准确、高通量、可早期介入的药物心脏安全性的体内评价系统,尤为重要和必要。斑马鱼是一种脊椎类的小型模式动物,繁殖力强,体外受精和发育,其生长发育过程、组织系统结构与人类有很高的相似性,在基因和蛋白质的结构和功能上也具有很高的保守性。目前已经具有成熟的斑马鱼细胞标记技术、突变技术、基因活性移植技术和显微注射技术等各种分子生物学技术。因此斑马鱼成为研究人类疾病的发生发展机制、预防和治疗,以及新药研发的优良模式动物。尤其是斑马鱼的心脏结构清晰,易于观察;虽然其心脏为两腔心脏——一房一室,但其发生和发育路线及相关基因调控机制与人类接近,在胚胎和幼体阶段心脏位于体表,非常适于进行心脏疾病模型和心脏毒理的研究。因此,本研究选用斑马鱼为模式动物建立药物心脏毒性的检测模型。本论文的主要成果如下:1.首次克隆了斑马鱼1-磷酸鞘安醇受体2(mil/slpr2)基因的启动子调控序列;通过基因上游序列分段缺失、基因knock-down和knock-up等基因分析实验,发现mil基因在斑马鱼的心血管系统、神经系统、侧线系统和听力等方面的发育过程中具有非常重要的生物学功能,mil基因表达异常时,将会造成上述系统或器官的发育畸形或异常。尤其是首次证明了mil基因的失调与听觉相关基因和毛细胞损伤密切相关。2.克隆了斑马鱼心室肌球蛋白重链(vmhc)基因的调控序列,并构建了vmhc基因启动子序列指导的绿色荧光蛋白EGFP表达的载体,制备了EGFP荧光在心脏区域特异表达的转基因斑马鱼模型,目前已获得F2代阳性转基因幼体。结果表明本研究已初步获得了心脏标记的转基因斑马鱼株。3.药物心脏毒性的斑马鱼评价模型。利用具有心脏毒性的代表性药物,如特非那定、维拉帕米、莫西沙星,维生素A(Va),分别作用于斑马鱼胚胎或幼体,研究了药物与表型、心律和靶基因表达变化三方面的相关性,并以此作为判断化合物对斑马鱼心脏毒性的初步标准。综上,本论文主要研究了mil/slpr2基因功能,并建立了心脏绿色荧光蛋白标记的转基因斑马鱼模型和药物心脏毒性的斑马鱼评价模型。
【学位授予单位】:北京协和医学院
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2011
【分类号】:R-332;R96

手机知网App
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前2条
1 霍中军;温宗华;刘靖;王鹍;黄志斌;戴朝霞;马宁;颜广;陈英华;陈小辉;刘伟;马品芸;罗伟豪;赵颖;樊淑;赵嘉佳;黄红辉;温子龙;张文清;;斑马鱼红系造血缺陷突变体的正向遗传学筛选[J];南方医科大学学报;2010年05期
2 ;Inactivation gating determines drug potency:a common mechanism for drug blockade of HERG channels[J];Acta Pharmacologica Sinica;2004年05期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 葛朝亮;汪宁;;通窍活血汤对血管性痴呆大鼠脑皮质中NO、ET-1、LPO含量的实验研究[J];安徽医药;2011年09期
2 王晓伟;张红翠;安晓晶;王振华;;新型模式生物斑马鱼及其胚胎在人类疾病模型研究中的应用[J];北方药学;2012年05期
3 赵淑红;高亦珑;梁军;;美容药物学实验教学初探[J];成功(教育);2010年12期
4 徐洁;杨中州;张姝;吴少亘;胡娅莉;;先天性心脏病胎儿心脏及胎盘组织中MAPK及Akt信号通路分子的变化[J];中国当代儿科杂志;2010年05期
5 崔海燕;江春花;郭伟民;王圆圆;张树峰;;芪益强肾饮对系膜增生性肾小球肾炎大鼠肾组织PDGF和FN的影响[J];当代医学;2010年14期
6 蒋心惠;周岐新;;高效液相色谱法测定硫酸特布他林与红细胞膜表面β2肾上腺素受体结合量[J];分析化学;2010年03期
7 蒋心惠;杨俊卿;周岐新;;高效液相色谱法用于普萘洛尔与β_2肾上腺素受体结合实验研究[J];分析试验室;2010年09期
8 蒲翔;冯泳;梅颖;胡芳君;;理气活血法配伍规律的实验室研究[J];贵阳中医学院学报;2011年03期
9 王婷;庄星星;魏良兵;韩燕全;高家荣;;丹蛭降糖胶囊对2型糖尿病大鼠血管内皮细胞功能的影响[J];中华中医药杂志;2015年10期
10 戴悦;;人类心脏特异表达基因pygo1的克隆与功能研究[J];湖南师范大学自然科学学报;2008年03期
中国重要会议论文全文数据库 前3条
1 袁婺洲;唐旻;夏琼;彭向文;邓志伟;李冉林;张艳阳;Rolf Bodmer;Karen Ocorr;吴秀山;;利用果蝇心力衰竭模型大规模筛选果蝇缺失系及心力衰竭候选基因[A];中国遗传学会模式生物与人类健康研讨会会议论文集[C];2010年
2 何正光;祝慧凤;陈刚;叶兰;徐晓玉;;葛根素对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用及其时效关系[A];第二届临床中药学学术研讨会论文集[C];2009年
3 包·照日格图;唐志国;宋娜丽;却翎;;从生物学技术应用看临床中药学学科发展[A];第二届临床中药学学术研讨会论文集[C];2009年
中国博士学位论文全文数据库 前8条
1 郭新军;拟黑多刺蚁肌细胞增强因子2与肌钙蛋白Ⅰ亚基基因的克隆及其在发育中的表达研究[D];陕西师范大学;2010年
2 王波;番石榴叶提取物辅助降血糖作用及其机制研究[D];四川大学;2007年
3 孙晓峰;辛伐他汀预处理对大鼠肢体缺血再灌注肺损伤的影响及机制探讨[D];中国医科大学;2008年
4 谭志荣;巴替非班等八个药物体内分析方法建立及其在药代动力学研究中的应用[D];中南大学;2009年
5 王晓礽;肌纤生成调节因子-1致心肌细胞肥大的分子机制研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2010年
6 张文婷;对神经退行性疾病具有多靶点治疗作用的药物研究[D];华中科技大学;2010年
7 周防震;藤茶活性成分DMY对乳腺癌细胞增殖、凋亡和侵袭转移的影响[D];华南理工大学;2012年
8 李昊娲;益气复脉合剂治疗室性期前收缩作用机制的实验研究[D];北京中医药大学;2013年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 毕艳艳;黄腐酸及黄腐酸钠的药理实验研究[D];昆明理工大学;2009年
2 张晓萍;苔黑酚葡萄糖苷在不同机体状态大鼠体内的药代动力学和组织分布差异研究[D];北京中医药大学;2011年
3 安民;辛伐他汀预处理对大鼠脊髓缺血再灌注损伤的影响[D];重庆医科大学;2011年
4 陈聪;柴胡葛根配伍退热机理的实验研究[D];新疆医科大学;2011年
5 杨艳环;基于“AAA通路”探讨活血消异方抑制大鼠子宫内膜异位症复发的机理[D];中国中医科学院;2011年
6 邵佳亮;羟基喜树碱对大鼠肝纤维化防治作用及部分机制的研究[D];南昌大学;2011年
7 杨赟昀;银杏内酯B对缺血性中风的保护作用和作用机制[D];北京中医药大学;2005年
8 封硕;酸枣仁汤君臣佐使配伍的药效学研究[D];辽宁中医药大学;2007年
9 余伟师;人类心脏发育候选基因KLHL31的克隆与相互作用蛋白的鉴定[D];湖南师范大学;2007年
10 刘碧胜;人类锌指蛋白家族新基因ZNF552的克隆与功能研究[D];湖南师范大学;2007年
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 薛宏亮;张乃元;袁占鹏;;斑马鱼在神经毒理学研究中的应用[J];公共卫生与预防医学;2014年02期
2 ;学科前瞻[J];当代医学;2003年12期
3 张立凤;钟涛;桂永浩;;外源性视黄酸对斑马鱼心血管系统发育的影响[J];中国实验动物学报;2006年02期
4 杨寒朔;汤明海;邓洪新;杨金亮;;纳升超高效液相色谱-飞行时间质谱检测斑马鱼胚胎中小分子多肽的初步研究[J];四川大学学报(医学版);2007年06期
5 徐娟;吴南翔;;斑马鱼在环境内分泌干扰物筛选和检测中的应用[J];国外医学(卫生学分册);2009年04期
6 胡玮;程露阳;宋韫韬;夏鸿飞;孙大光;李鹏;李丹;陆彩玲;马旭;;硫代硫酸钠干扰斑马鱼胚胎发育并致畸[J];中国生物化学与分子生物学报;2009年09期
7 何秋霞;刘可春;楚杰;王思锋;韩利文;王希敏;;斑马鱼作为模式生物在心血管疾病研究中的应用[J];生命的化学;2009年05期
8 孙淑娜;桂永浩;蒋璆;宋后燕;钟涛;;叶酸缺乏对斑马鱼胚胎造血系统影响的初步研究[J];营养学报;2010年01期
9 李乙根;黄文瑾;黄诚;;斑马鱼在新药发现中的应用[J];生命科学;2011年03期
10 夏勇;郑云燕;宋燕华;徐彩菊;鹿伟;傅剑云;;百草枯对斑马鱼的生理指标和胚胎发育影响[J];环境与职业医学;2011年05期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 马雯雯;杭晓明;王巍;刘聪;孙野青;;模拟微重力影响斑马鱼胚胎发育的蛋白质组特征[A];“基因、进化与生理功能多样性”海内外学术研讨会暨中国生理学会第七届比较生理学学术会议论文摘要[C];2009年
2 张利军;史慧勤;彭双清;;基于斑马鱼模式动物的阿霉素心脏毒性作用研究[A];2010年全国药物毒理学学术会议论文集[C];2010年
3 王晗;;斑马鱼生物钟调节的分子遗传和基因组机制[A];2011年全国时间生物医学学术会议论文集[C];2011年
4 林秀坤;;斑马鱼作为抗肿瘤药物模型的分子基础[A];第四届中国肿瘤大会中国药理学会肿瘤药理专业委员会分会场学术会议论文摘要[C];2006年
5 侯佳;桂永浩;张立凤;王跃祥;宋后燕;钟涛;;视黄酸缺乏对斑马鱼胚胎心脏发育的影响[A];中华医学会第五次全国儿科中青年学术交流大会论文汇编(上册)[C];2008年
6 陈锡强;韩利文;王希敏;王思锋;侯海荣;刘可春;;促渗剂氮酮对斑马鱼胚胎的透皮作用及其毒性影响(英文)[A];2012年中国药学大会暨第十二届中国药师周论文集[C];2012年
7 于永利;杨景峰;王思珍;董武;;高残留农药福美双对斑马鱼胚胎体节以及脊索的影响[A];持久性有机污染物论坛2010暨第五届持久性有机污染物全国学术研讨会论文集[C];2010年
8 巴雅斯胡;杨景峰;于永利;王思珍;董武;;高残留农药代森锌诱导斑马鱼胚胎脊索变形[A];持久性有机污染物论坛2011暨第六届持久性有机污染物全国学术研讨会论文集[C];2011年
9 张利军;郭家彬;苑晓燕;史慧勤;赵君;束玉磊;彭双清;;应用斑马鱼胚胎和幼鱼评价布洛芬的心脏毒性[A];2013年(第三届)中国药物毒理学年会暨药物非临床安全性评价研究论坛论文摘要[C];2013年
10 朱小山;朱琳;李燕;端正花;;富勒烯(C_(60))对斑马鱼胚胎发育毒性的初步研究[A];第三届全国环境化学学术大会论文集[C];2005年
中国重要报纸全文数据库 前8条
1 刘妍;美国培育出终生透明的斑马鱼[N];中国渔业报;2008年
2 本报记者 滕继濮;小小斑马鱼 大大有用处[N];科技日报;2010年
3 枫叶 编译;筛选药物:斑马鱼责任重大[N];医药经济报;2012年
4 记者 熊琳晖 通讯员 孙慧;研究斑马鱼揭示器官再生之谜[N];长江日报;2013年
5 罗刚 李兵;斑马鱼破译人类基因的先锋[N];健康报;2004年
6 记者 李学梅;斑马鱼为治疗白血病提新思路[N];新华每日电讯;2010年
7 本报记者 许琦敏;静候那一点流星似的光亮[N];文汇报;2012年
8 本报记者 许琦敏;刘廷析 “掘宝”斑马鱼世界[N];文汇报;2011年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 管翊闳;核仁因子Def磷酸化修饰调控细胞周期和p53降解的研究[D];浙江大学;2015年
2 胡晶莹;环境雌激素影响斑马鱼生殖系统发育机制的初步研究[D];复旦大学;2011年
3 赵婷;Karsch-Neugebauer综合征斑马鱼模型的建立和行为学观察[D];复旦大学;2014年
4 王健;新型斑马鱼模型在研究肿瘤浸润、转移和血管侵袭机制中的应用[D];山东大学;2015年
5 王明勇;斑马鱼生物钟基因per2突变体的构建及在生物钟系统中的功能分析[D];苏州大学;2014年
6 龚璐;p53及其异构体△133p53/△113p53在人类细胞和斑马鱼中的功能及生物学意义研究[D];浙江大学;2015年
7 郭翠翠;斑马鱼D3b基因结构及其在胚胎发育中的作用研究[D];上海交通大学;2014年
8 沈兵;致癌染料的生理毒性及分子机制研究[D];浙江大学;2015年
9 张庆友;斑马鱼Mil/s1pr2和vmhc基因的功能研究及药源性心脏毒性模型的建立[D];北京协和医学院;2011年
10 徐绘;17α-炔雌醇对斑马鱼生殖系统的影响及其机理的研究[D];复旦大学;2008年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 崔俊安;稀土对斑马鱼胚胎发育的影响[D];青岛科技大学;2011年
2 吴二社;nano-TiO_2,nano-Ag对斑马鱼胚胎发育的毒理学研究[D];西北师范大学;2012年
3 温鼎声;利用模式生物斑马鱼对化合物心脏毒性和急毒性筛选的研究[D];华南理工大学;2012年
4 梁荣朝;丙烯酰胺对斑马鱼生物余能的影响及对其肝、鳃毒性的作用[D];哈尔滨商业大学;2013年
5 海洋;鱼藤素对斑马鱼胚胎CyclinD1的表达调控及相关抗肿瘤机制研究[D];华南理工大学;2015年
6 蒋宇霞;东江流域沉积物生物毒性及其沉积物质量综合评价[D];中国科学院研究生院(广州地球化学研究所);2015年
7 袁忠月;壳聚糖纳米载体对神经系统影响的研究[D];浙江大学;2015年
8 余凯敏;毒死蜱对斑马鱼胚胎的毒性机制研究[D];中国农业科学院;2015年
9 罗茜;斑马鱼生长抑素-1基因靶向敲降和营救以及基于表达谱的胚胎发育功能分析[D];西南大学;2015年
10 胡月阳;UBE2C基因在斑马鱼胚胎发育中的时空表达规律[D];河北医科大学;2015年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026