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《中国协和医科大学》 2006年
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采用自体肌卫星细胞及异种膀胱无细胞基质构建组织工程膀胱的实验研究

张玉石  
【摘要】:第一部分:种子细胞—肌卫星细胞的原代培养及鉴定 【目的】本部分通过应用改良Percoll非连续密度梯度离心法分离纯化培养新西兰兔骨骼肌干细胞—肌卫星细胞,探讨为组织工程膀胱的构建提供种子细胞的可行性。 【方法】分别采用差速贴壁法和Percoll非连续密度梯度离心法进行新西兰兔肌卫星细胞的原代培养并进行纯化。光镜及扫描电镜检查细胞形态。通过免疫细胞化学染色方法鉴定培养细胞纯度。利用MTT法测定细胞生长曲线,同时测定细胞分裂指数,了解细胞生长特性。 【结果】两种方法均能分离培养获得肌卫星细胞,经测定差速贴壁法所得细胞纯度为30-40%,Percoll非连续密度梯度离心法所得细胞纯度在90%以上。光镜及扫描电镜检查符合卫星细胞形态,生长曲线及细胞分裂指数测定提示细胞生长壮况良好、具有较强增殖能力。 【结论】应用Percoll非连续密度梯度离心法可以培养得到高纯度的肌卫星细胞,该方法所培养的细胞体外传代周期短、具有较强增殖能力,短期即可获得足够数量的细胞,可作为组织工程用种子细胞培养方法。 第二部分:膀胱无细胞基质支架材料的制备和特性分析 【目的】探讨猪膀胱无细胞基质制备的方法及其作为生物支架材料应用于组织工程膀胱构建的可行性。 【方法】新鲜猪膀胱分别采用酶消化法和去污剂洗涤法进行脱细胞处理。处理后的材料进行HE染色及电镜检查有无细胞成分残留。以新西兰兔肌肉干细胞为鉴定细胞接种于96孔板中,分别采用猪膀胱无细胞基质浸提液及完全培养基进行培养,应用MTT法进行细胞毒性测定。 【结果】经脱细胞处理所得膀胱无细胞基质呈白色半透明状,表面光滑,厚度约0.3cm,具有一定弹性及韧性。光镜观查无细胞成分残留,透射电镜可见多孔
【学位授予单位】:中国协和医科大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2006
【分类号】:R318.0

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