以激素敏感性脂肪酶为靶点的天然减肥药物的初步筛选
【摘要】：目的：
肥胖症是危害人类健康的全球性疾病。肥胖增加人类患其他疾病的危险性，包括高血压，血脂异常(如高胆固醇，高甘油三酯)，2型糖尿病，冠心病，中风，胆囊疾病，骨关节炎，睡眠呼吸暂停，子宫内膜癌，乳腺癌，结肠癌等肿瘤和心理疾患。白色脂肪组织中脂肪的合成和分解与肥胖症的发生、发展关系密切。增加脂肪分解有助于减少脂肪细胞中甘油三酯的储存。激素敏感性脂肪酶(HSL)是脂肪分解过程中的主要限速酶，在脂肪分解过程中起重要的作用。通过细胞转染技术，将含人脂肪组织HSL基因启动子的荧光素酶表达质粒稳定转染小鼠3T3-L1前脂肪细胞中，并以此为工具，从众多中药天然化合物中寻找对HSL启动子活性有影响的药物，再通过动物实验观察药物对高脂膳食昆明小鼠体重、糖脂代谢的干预作用，及对小鼠体内白色脂肪组织HSL基因表达的影响，探讨以HSL为减肥药物筛选靶点的可行性。
方法：
1．建立含人脂肪组织HSL基因启动子的荧光素酶表达质粒的稳定转染小鼠3T3-L1前脂肪细胞株：以人基因组DNA为模版，克隆人脂肪组织HSL基因启动子序列(-697-+53bp)，将该片断插入到含荧光素报告基因的质粒载体pGL3-Basic-Luc中，得到含人HSL基因启动子序列(-697-+53bp)的荧光素酶表达质粒。然后用脂质体转染法，将该质粒转染到小鼠3T3-L1前脂肪细胞中，经筛选药物Geneticin(G418)筛选，获得表达荧光素酶的稳定转染单克隆小鼠3T3-L1前脂肪细胞株。
2．50％乙醇中药提取液(extracts of Chinese medical herbs，ECMH)对人HSL基因启动子活性的影响：含人HSL基因启动子序列的荧光素酶报告质粒，其荧
【关键词】：激素敏感性脂肪酶 启动子小鼠 3T3-L1 前脂肪细胞 海藻 薏米 冬瓜皮 香附 甘草 茉莉花 昆明小鼠 【学位授予单位】：中国协和医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2006
【分类号】：R589.2
【目录】：
- 一、中文摘要4-8
- 二、英文摘要8-14
- 三、论文正文14-100
- 第一部分 中药提取液对稳定转染人HSL启动子的3T3L1细胞荧光素酶活性的影响14-56
- 前言15-18
- 技术路线18-19
- 实验材料19-25
- 实验方法25-33
- 实验结果33-48
- 讨论48-52
- 参考文献52-56
- 第二部分 薏米、海藻提取液对高脂膳食昆明小鼠体重、体脂和糖脂代谢干预作用56-100
- 前言57-58
- 技术路线58
- 实验材料58-60
- 实验方法60-64
- 实验结果64-79
- 讨论79-82
- 参考文献82-86
- PCR产物测序报告86-100
- 论文综述100-115
- 致谢115
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