应用人脂肪前体细胞构建工程化脂肪组织的实验研究
【摘要】：临床上已有应用自身脂肪移植体治疗包括软组织缺损等多种疾病的报道。但是，无论带蒂脂肪移植还是游离脂肪移植，都有其各自的不足。一方面，缺损量大，自体脂肪组织转移常常带来术区和供区损伤。另一方面，缺损量小，因为脂肪注射移植的吸收率高，也需要反复多次矫正。组织工程是近年来蓬勃兴起的一项新技术，作为生物医学和材料工程等多种学科的交叉学科，它可以通过获取少量的种子细胞经过体外扩增构建出大块的自体组织。最近，刚刚注意到用组织工程技术来修复软组织缺损。如果组织工程三个基本要素——种子细胞、支架和微环境能够很好的结合，种子细胞可以在合适的环境下被诱导形成新生组织，这就可以为临床提供一种崭新的治疗组织器官功能缺陷或缺损的方法。
研究目的
1．分离并培养人的脂肪前体细胞。
2．探索适合工程化脂肪组织生长的支架、微环境。探索目前比较常用的两种支架(藻酸钙和胶原海绵)作为人脂肪前体的载体的可行性。
3．探讨生长因子(bFGF)对脂肪组织形成的作用机制，以及缓释技术应用于脂肪组织工程的可能性。
研究方法
1．利用胶原酶消化法分离、原代培养脂肪前体细胞，并诱导分化，鉴定细胞，将其作为种子细胞。
2．鼠尾胶原通过冻干和化学交联制备胶原海绵作为组织工程的支架材料。
3．明胶通过化学交联制备空白明胶微球。将其浸泡于bFGF溶液
【关键词】：组织工程 人脂肪前体细胞 碱性成纤维细胞生长因子 藻酸钙 【学位授予单位】：中国协和医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2006
【分类号】：R318.0
【目录】：
- 英文缩略词表6-9
- 中文摘要9-11
- Abstract11-14
- 文献综述 工程化脂肪组织的研究进展14-27
- 1．细胞来源15-19
- 1．1 成熟脂肪细胞16
- 1．2 脂肪前体细胞16-17
- 1．3 前脂肪细胞的替代品17-18
- 1．4 多能干细胞18-19
- 2．支架19-21
- 2．1 支架的要求19-21
- 2．2 已试用的脂肪组织支架21
- 3．微环境21-25
- 3．1 再血管化21-23
- 3．2 细胞外基质23-24
- 3．3 生长因子24-25
- 4．局限性25-26
- 5．脂肪组织工程未来的发展26-27
- 第一部分 脂肪前体细胞的分离、培养和诱导分化27-45
- 1．材料与方法27-37
- 1．1 实验材料27-34
- 1．1．1 脂肪组织27
- 1．1．2 主要试剂与溶液27-32
- 1．1．2．1 主要试剂27-29
- 1．1．2．2 主要试剂及溶液配制29-32
- 1．1．3 主要仪器设备32-34
- 1．2 实验方法34-37
- 1．2．1 人脂肪前体细胞的原代培养和诱导分化34-35
- 1．2．2 CCK-8比色实验测定细胞生长曲线35
- 1．2．3 脂肪前体细胞分化鉴定35-36
- 1．2．4 甘油-3-磷酸脱氢酶(Glycerol-3-Phosphate Dehydrogenase,G-3-PDH)活性测定36-37
- 1．2．5 细胞分化比例的测定：37
- 2．结果37-40
- 2．1 形态学观察37-39
- 2．1．1 增殖阶段37-38
- 2．1．2 分化阶段 形态学及油红O染色观察38-39
- 2．2 生长曲线39
- 2．3 G-3-PDH活性测定39-40
- 2．4 脂肪前体细胞的分化比例40
- 3．讨论40-45
- 第二部分 胶原海绵、含bFGF的明胶微球与人脂肪前体细胞构建工程化的脂肪组织45-68
- 前言45-46
- 摘要46-47
- 1．材料和方法47-54
- 1．1 实验材料47-50
- 1．1．1 实验试剂47-48
- 1．1．2 主要溶液试剂的配置方法48
- 1．1．3 主要仪器48-49
- 1．1．4 实验用动物49-50
- 1．2 实验方法50-54
- 1．2．1 种子细胞50
- 1．2．2 胶原海绵的制备50-51
- 1．2．3 bFGF缓释明胶微球的制备51-52
- 1．2．3．1 方法51
- 1．2．3．2 bFGF缓释微球的体外释药研究51-52
- 1．2．4 体内植入52-53
- 1．2．5 观察指标53-54
- 2．结果54-62
- 2．1 胶原蛋白和胶原海绵54-55
- 2．2 bFGF明胶缓释微球55-58
- 2．2．1 bFGF明胶缓释微球的粒径、分布及形态55-56
- 2．2．2 载bFGF微球的体外释放行为56-58
- 2．3 体内植入后的结果58-62
- 2．3．1 脂肪组织和血管生成的情况58-62
- 2．3．2 免疫组化结果62
- 2．3．3 bFGF的剂量对于脂肪形成的影响62
- 3．讨论62-68
- 3．1 胶原的制备62-63
- 3．2 明胶缓释微球的制备63-64
- 3．3 bFGF微球体外释药行为64
- 3．4 胶原海绵、人脂肪前体细胞和bFGF构建工程化的脂肪组织64-68
- 第三部分 藻酸钙水凝胶与脂肪前体细胞构成工程化脂肪组织的体内和体外实验研究68-81
- 前言68-69
- 摘要69-70
- 1．材料与方法70-73
- 1．1 实验材料70-71
- 1．1．1 实验试剂70
- 1．1．2 主要仪器70-71
- 1．1．3 实验器械71
- 1．1．4 实验用动物71
- 1．2 实验方法71-73
- 1．2．1 种子细胞71
- 1．2．2 藻酸钠水凝胶的制备71
- 1．2．3 脂肪前体细胞与藻酸钙载体的复合71-73
- 1．2．4 脂肪前体细胞与藻酸钙载体复合物的移植73
- 2．结果73-77
- 2．1 凝胶细胞中的形态观察73-75
- 2．2 体外细胞增殖和分化的情况75-76
- 2．3 细胞—藻酸盐复合物异位组织形成76-77
- 3．讨论77-81
- 结论81-82
- 参考文献82-95
- 志谢95-96
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